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一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法

花匠小妙招
2024-12-03 23:25

一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法

本发明涉及中药活性成分提取与中药质量评价领域，具体涉及一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法。

背景技术：

1、金银花是忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花，性寒味甘，具有清热解毒和凉血化淤的功效，临床上主治外感风热、瘟病初起、疮疡病毒、红肿热痛和便脓血等症状。现代药理学研究表明，金银花具有优异的抗氧化、抗炎、抗病毒、抗菌、降血糖、保肝护肝等作用，临床应用广泛。据统计，如双黄连注射液、小儿退烧颗粒、牛黄化毒片等含有金银花。此外，金银花也广泛用于食品饮料、医药保健、日用化妆等领域。目前，金银花在我国各地均有栽培，其道地产区为山东、河南、河北等地，但金银花质量受到产地、品种、采集时间、加工方法、包装方式等多种因素的影响。此外，金银花市场上还存在以假乱真和有效含量不达标等现象。因此，开展金银花质量评价研究不仅对其临床使用的安全性、有效性意义重大，对维持金银花市场稳定也至关重要。

2、现代药理学研究表明抗氧化是金银花发挥疗效的关键特性，因此开展金银花抗氧化成分筛选对金银花的质量评价至关重要。但目前，金银花抗氧化的物质成分不清，如何高效、全面提取金银花的抗氧化成分是金银花指标成分筛选的关键。目前，金银花中活性成分的提取主要以水、乙醇、甲醇作为溶液进行萃取，但是上述溶剂性能单一，无法完全萃取金银花中不同理化性质的抗氧化成分。尽管，开发了一些新型的溶剂对金银花活性成分进行提取，如公开号为cn 115684452 a的中国发明专利公开了一种提取金银花有效成分的方法、产品及应用，使用甘油水溶液提取的金银花活性成分；公开号为cn107157842a的中国发明专利公开了一种牙膏用金银花提取物的制备方法，使用了基于氯化胆碱的低共熔溶剂-盐双水相体系。但是，该方法没有针对金银花抗氧化物质，且有的使用的双水相体系，导致有些抗氧化成分残留在水相中。此外，目前并没有报道如何利用新型溶剂筛选金银花抗氧化成分的报道。因此，开发针对金银花抗氧化成分的提取方法，进而筛选金银花抗氧化质量标志物对金银花质量评价具有重要的现实意义。

技术实现思路

1、本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，提供一种金银花抗氧化质量标志物提取方法、筛选方法及其应用。

2、本发明的技术解决方案如下：

3、一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法，包括以下步骤：

4、s1：将金银花药材粉碎、干燥，过筛，得金银花粉末；将提取溶剂与金银花粉末混合后，萃取，过滤，得到不同批次的金银花抗氧化提取物；

5、所述提取溶剂为低共熔溶剂与水混合而得，低共熔溶剂为四甲基氯化铵-乙二醇低共熔溶剂；

6、所述四甲基氯化铵与乙二醇的摩尔比为1:2-4；

7、所述金银花粉末与提取溶剂按1：30-50质量体积比（g/ml）混合；

8、s2：利用高效液相色谱法对s1中不同批次的金银花抗氧化提取物进行分析，构建金银花指纹图谱；

9、s3：对s1中不同批次的金银花抗氧化提取物进行多维度抗氧化活性评价，获得多维度抗氧化活性；

10、s4：将s2中金银花指纹图谱中特征峰的峰面积与s3中的多维度抗氧化活性进行拟合，构建金银花抗氧化谱-效关系，采用化学计量学方法筛选抗氧化质量标志物。

11、进一步地，步骤s3中，所述多维度抗氧化活性评价为dpph自由基清除率、abts自由基清除率、oh自由基清除率和铁还原能力；

12、依据抗氧化活性评价的评价指标与提取物中总黄酮、总多酚以及总还原糖含量进行灰色关联度分析，根据分析结果构建多维度抗氧化性能计算公式=dpph自由基清除率×25%+abts自由基清除率×25%+oh自由基清除率×25%+铁还原能力×25%；

13、按照多维度抗氧化性能计算公式计算得到多维度抗氧化活性。

14、进一步地，步骤s4中，金银花指纹图谱中特征峰的峰面积与多维度抗氧化活性进行拟合模型为：

15、y=0.248016x1+0.0744882x2+0.144516x3-0.150627x4-0.136074x5+0.226756x6-0.0399248x7+0.0395959x8+0.233523x9；

16、其中，y表示多维度抗氧化活性； x1、x2、x3、x4、x5、x6、x7、x8、x9分别表示特征峰1、特征峰2、特征峰3、特征峰4、特征峰5、特征峰6、特征峰7、特征峰8、特征峰9的平均峰面积。

17、进一步地，步骤s4中，所述的化学计量学方法为采用simca 14.1软件，进行偏最小二乘法判别分析；并以筛选变量重要性投影值大于1的成分作为抗氧化质量标志物。

18、进一步地，步骤s2中，高效液相色谱法的色谱条件为：采用sepax c18柱250 mm x4.6 mm，5 um；柱温：31℃；流动相包括洗脱液a和洗脱液b，洗脱液a为0.1%磷酸水溶液，洗脱液b为乙腈；检测波长为330 nm。

19、本发明还公开了一种如上任一的筛选方法筛选出的抗氧化质量标志物为绿原酸、芦丁和异绿原酸a。

20、本发明还公开了一种金银花抗氧化质量标志物的应用，首先，按照上述的提取方法提取不同产地和真伪金银花抗氧化提取物；然后，利用高效液相色谱方法对金银花抗氧化提取物中的标志物进行含量分析；最后，利用不同产地和真伪金银花中抗氧化质量标志物的含量构建辨别模型，以区分金银花的真假和产地。

21、优选地，所述辨别模型为使用spss软件构建的聚类分析模型，分类距离为10及以下。

22、本发明的有益效果是：本发明创造性采用依据抗氧化效果得到的低共熔溶剂作为萃取溶剂，提取出的金银花提取物抗氧化性优异，保证大部分抗氧化成分的高效提取；采用高抗氧化活性的提取方法与指纹图谱联合首次构建了基于低共熔溶剂提取物的抗氧化的谱效关系，筛选出了具有优异抗氧化活性的抗氧化质量标志物：绿原酸、芦丁和异绿原酸a，且三类抗氧化标志物能有效区分金银花的真伪和产地。此外，本发明还发现以四甲基氯化铵-乙二醇（des）作为溶剂，相比于传统的萃取溶剂，可以有效的破坏金银花的植物细胞壁。

技术特征：

1.一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法，其特征在于，步骤s3中，所述多维度抗氧化活性评价的评价指标为dpph自由基清除率、abts自由基清除率、oh自由基清除率和铁还原能力；

3.根据权利要求1所述的一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法，其特征在于，步骤s4中，金银花指纹图谱中特征峰的峰面积与多维度抗氧化活性进行拟合模型为：

4. 根据权利要求1所述的一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法，其特征在于，步骤s4中，所述的化学计量学方法为采用simca 14.1软件，进行偏最小二乘法判别分析；并以筛选变量重要性投影值大于1的成分作为抗氧化质量标志物。

5. 根据权利要求1所述的一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法，其特征在于，步骤s2中，高效液相色谱法的色谱条件为：采用sepax c18柱250 mm x 4.6 mm，5μm；柱温：31℃；流动相包括洗脱液a和洗脱液b，洗脱液a为0.1%磷酸水溶液，洗脱液b为乙腈；检测波长为330 nm。

技术总结
本发明公开了一种金银花抗氧化质量标志物的筛选方法，涉及中药活性成分提取与中药质量评价领域，该方法具体包括以下步骤：首先利用低共熔溶剂对金银花进行萃取；接着，考察提取物多重抗氧化性，构建抗氧化谱‑效关系，采用化学计量学方法筛选抗氧化标志物；最后，将筛选的质量标志物用于金银花真伪辨别与产地区分。本发明创造性的发现利用低共熔溶剂提取可以显著提高提取物的抗氧化性能，经谱‑效关系筛选出的抗氧化质量标志物具有优异的抗氧化性能。本发明的抗氧化标志物的提取、筛选方法绿色环保、效率高，所筛选的抗氧化标志物能用于金银花真伪鉴别与产地区分。

技术研发人员：邓文文,李慧,杨寒,胡思齐
受保护的技术使用者：中国中医科学院中医药健康产业研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15