报春花属(Primula)植物物种资源丰富,种类繁多,花色艳丽,观赏价值高,其主要繁殖方式为种子繁殖,但种子寿命短、发芽率低,幼苗增殖速度慢、增殖率低,很难满足种植要求。利用组织培养技术可加快繁殖速度,更好地保持优良品种。本研究以欧报春(Primula vulgaris)、四季报春(Primula obconica)、红宝石球花报春(Primula denticulate‘Cashmeriana Ruby’)、橘红灯台报春(Primula bulleyana)和Primula×pubescens为试验材料,以种子上胚轴和下胚轴、无菌苗叶片、无菌苗叶柄和无菌苗腋芽为外植体,通过对种子萌发条件、愈伤组织及不定芽诱导、不定芽增殖、生根培养及炼苗移栽的研究,建立了这五种报春花属植物的植株再生体系。主要研究结果如下:(1)不同灭菌剂和灭菌时间及不同光照条件和温度对四季报春和欧报春的种子萌发效果产生了影响。试验结果表明用0.1%升汞(HgCl_2)灭菌30秒为四季报春种子最佳灭菌处理;6%次氯酸钠(NaClO)灭菌10分钟可使欧报春种子达到最佳灭菌效果,灭菌后将四季报春和欧报春的种子置于光照12小时、温度为20~25℃的条件下进行萌发,可达到较高发芽率。(2)欧报春种子上胚轴外植体在MS+NAA 0.4 mg/L+6-BA 0.6 mg/L中诱导不定芽效果最佳,诱导率为21.67%;无菌苗叶柄外植体在1/2MS+NAA 1 mg/L+6-BA0.1mg/L中诱导愈伤组织效果最佳,诱导率为77.78%,1/2MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA0.1 mg/L利于叶柄外植体愈伤组织分化,分化率为88.89%;无菌苗叶片外植体在1/2MS+NAA 1mg/L+6-BA 0.5 mg/L中诱导愈伤组织效果最佳,诱导率为84.44%,1/2MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 0.5 mg/L利于无菌苗叶片外植体愈伤组织分化,分化率为82.22%;无菌苗腋芽外植体在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 1 mg/L中诱导不定芽效果最佳,诱导率为97.78%。种子下胚轴外植体不能诱导出不定芽。不定芽在MS+NAA0.6 mg/L+6-BA 0.5 mg/L中增殖效果最佳,增殖率为62.96%。MS培养基的生根效果最好,生根率为95.59%。(3)四季报春种子上胚轴外植体在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.6 mg/L中诱导不定芽效果最佳,诱导率为26.67%;无菌苗叶柄外植体在MS+NAA 1 mg/L+6-BA0.1mg/L中诱导愈伤组织效果最佳,诱导率为82.22%,无菌苗叶柄外植体在MS+NAA 0.1mg/L+6-BA 0.5 mg/L中愈伤组织分化效果最佳,分化率为82.22%;无菌苗叶片外植体在MS+NAA 0.5mg/L+6-BA 0.1 mg/L中诱导愈伤组织及分化的效果最佳,诱导率和分化率分别为84.44%和88.89%;无菌苗腋芽外植体在MS+NAA0.5mg/L+6-BA 0.1 mg/L中诱导不定芽效果最佳,诱导率为68.89%。种子下胚轴外植体不能诱导出不定芽。不定芽在MS+NAA 0.6 mg/L+6-BA 0.2 mg/L中增殖效果最佳,增殖率为29.63%。最佳生根培养基为MS+NAA 0.1 mg/L,生根率为96.30%。(4)红宝石球花报春无菌苗叶片外植体在MS+NAA 1 mg/L+6-BA 0.1 mg/L中诱导愈伤组织及分化的效果最佳,愈伤组织诱导率和分化率分别为77.78%和82.22%;无菌苗腋芽外植体在MS+NAA 1 mg/L+6-BA 0.1 mg/L中诱导不定芽效果最佳,诱导率为73.33%。无菌苗叶柄外植体不能诱导出不定芽。不定芽在MS+NAA1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L中增殖效果最佳,增殖率为85.19%。不定芽在1/2MS+NAA0.2 mg/L中生根效果最佳,生根率为95.59%。(5)橘红灯台报春无菌苗叶柄外植体在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L中诱导愈伤组织及分化的效果最佳,愈伤组织诱导率和分化率分别为75.56%和80%;无菌苗腋芽外植体在MS+NAA 0.1 mg/L+6-BA 0.5 mg/L中诱导不定芽效果最佳,诱导率高达100%。无菌苗叶片外植体在诱导过程中未能诱导出愈伤组织和不定芽。不定芽在MS+NAA 0.6 mg/L+6-BA 2 mg/L中增殖效果最佳,增殖率为92.59%。不定芽在1/2MS+IBA 0.1mg/L中生根效果最佳,生根率为88.89%。(6)Primula×pubescens无菌苗腋芽外植体在1/2MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 2mg/L中诱导不定芽效果最佳,诱导率为73.33%。无菌苗叶片外植体和无菌苗叶柄外植体在诱导过程中均褐化,未能诱导出愈伤组织和不定芽。不定芽在MS+NAA0.2mg/L+6-BA 0.5 mg/L中增殖效果最佳,增殖率为96.30%。最佳生根培养基为MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.3mg/L,生根率为92.60%。(7)这五种报春花属植物的组培苗在草炭土:珍珠岩=3:1的基质中生长最好,移栽成活率达96.67%。
[关键词]:
报春花属植物;组织培养;种子上下胚轴;叶片;叶柄;腋芽
[文献类型]: 硕士论文
[文献出处]:
河北农业大学2018年
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