一种利用鳞茎繁育朱顶红的组培方法与流程

• 花匠小妙招
• 2024-12-11 15:14

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种利用鳞茎繁育朱顶红的组培方法。

背景技术：

朱顶红为石蒜科孤挺花属的杂交品种群总称，具有花大色艳、形态丰富等明显优势，具有很高的观赏价值和经济价值。我国引进了部分品种，市场接受度较高，朱顶红成为新兴花卉品种之一，但是，朱顶红鳞茎的自然繁殖率很低，其中多数品种和杂交种几乎不产生子球。

亚洲地区虽然也有朱顶红鳞茎的生产，但生产设施相对落后，国内朱顶红品种相对单一，鳞茎生产较少，仅有的国产鳞茎质量较差，优良鳞茎大量依赖从荷兰、南非等国家进口，昂贵的鳞茎价格极大限制了此鳞茎根花卉在我国的发展。

朱顶红常用的繁殖方法主要有：自然分球、扦插和播种等，但是，繁殖速度很慢，很难满足市场的需求。

近年来，国内外已广泛采用鳞茎扦插、组织培养和刻伤法来繁殖，以加快其繁殖速度。鳞茎扦插和刻伤法操作程序繁琐，成本高，受外界条件影响大。

组织培养技术是目前植物快繁最有效的方法之一，具有繁殖系数高、成苗时间短和便于商品化和产业化生产的优势。

目前，朱顶红的组培外植体选择比较多，有大鳞茎、叶片、花葶、花梗等，但是，只有鳞茎中的双鳞片作为外植体时，才能诱导出丛生芽，其他外植体诱导都只能得到愈伤组织，而大鳞茎作为外植体时，消毒效率低下，污染率最高可达90％，一般诱导后，增殖系数只有2～3，并且在获得丛生芽后，对丛生芽直接进行生根培养，或是再进行壮球培养，最后移栽，移栽成活率70～90％。

可见，现有朱顶红组培外植体消毒效率低、增殖系数较低、移栽成活率有限，增殖过程还需壮球培养，操作步骤繁琐等问题。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种利用鳞茎繁育朱顶红的组培方法，以小鳞茎为外植体，接种污染率低，快速繁育出试管小鳞茎，操作简单有效，诱导率高，一步成球的试管鳞茎生根率高，移栽成活率高，缩短诱导及繁育时间，节省了组培时间，减少了操作步骤，保持了原球的优良种性，克服朱顶红组培中操作步骤较多且成活率较低的问题，为朱顶红产业发展提供技术支撑。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种利用鳞茎繁育朱顶红的组培方法，包括以下步骤：

1)外植体的选择和消毒

选取健康、直径为0.5～1cm的朱顶红小鳞茎，置于4～10℃冷处理4～6周，去掉皮膜，水冲洗1～3h，消毒，冲洗，吸干水分后备用；

2)诱导培养

将消毒好的朱顶红鳞茎切除顶部，留带有1/2～2/3鳞片基部的鳞茎盘，将鳞茎盘十字平均纵切成2～4份，基部朝下接种在诱导培养基上培养，光照培养30～40天后诱导出丛生芽，丛生芽基部膨大，继续培养20～30天，得到丛生鳞茎；

培养温度22～27℃，湿度60～80％；光照培养条件：光照时间10～14h/d，光照强度为1500～2500lx；

3)继代增殖

将丛生鳞茎切成单个鳞茎，切除顶端，保留基部0.3～0.5cm，接种至增殖培养基上，培养40～60天，获得增殖鳞茎；

培养条件：温度22～27℃，湿度60～80％，光照时间10～14h/d，光照强度为1500～2500lx；

4)生根培养

将增殖鳞茎切分为带基部的单个鳞茎，接种于生根培养基中，进行生根培养，培养15～20天，获得生根的朱顶红幼苗；

培养条件为：22～27℃，湿度60～80％，光照时间10～14h/d，光照强度1500～2500lx；

5)移栽

取出生根的朱顶红幼苗，洗净根系琼脂，移栽至基质中，炼苗后获得再生朱顶红植株。

进一步，步骤2)所述诱导培养基包含：ms基本培养基，6-苄氨基嘌呤1～5mg/l，萘乙酸0.5～3mg/l，蔗糖30～40g/l，琼脂4～6g/l，ph5.8～6.0。

又，步骤3)所述增殖培养基为：ms基本培养基，6-苄氨基嘌呤1～5mg/l，萘乙酸0.5～2mg/l，琼脂4～6g/l，蔗糖30～60g/l，ph5.8～6.0。

进一步，所述生根培养基包含：1/2ms基本培养基，萘乙酸0.05～1.0mg/l，活性炭0.5～1.0g/l，蔗糖30～40g/l，琼脂粉4～6g/l，ph5.8～6.0。

优选地，步骤5)中的在移栽至基质中前，进行炼苗，炼苗过程为：温室条件下，保持空气和基质湿润，气温20～25℃，遮阴7～15天，再全光照，每2～3天浇一次水，20～30天后移栽，成活率100％。

又，所述基质为泥炭：珍珠岩＝7：3～5：5，体积比。

进一步，步骤3)中，单个鳞茎的直径在0.5cm以上时，将其纵向平均切分成2～4块，再接种至增殖培养基上，单个鳞茎的直径小于0.5cm时，将其直接接种至增殖培养基上。

本发明的ms基本培养基是指：murashige和skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，是目前普遍使用的培养基。

本发明的1/2ms基本培养基是指：ms基本培养基中的大量元素、微量元素、铁盐、有机物质浓度均减半。

本发明以朱顶红小鳞茎为外植体，直接诱导试管小鳞茎，并对增殖后的试管小鳞茎进行生根，节省了组培需要的时间，减少了操作步骤，保持了原球的优良种性，为朱顶红产业发展提供技术支撑。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1).本发明以朱顶红的小鳞茎为外植体材料，小鳞茎生长年限短，所含内生菌少，使污染率降低至6～10％，克服了以往利用大鳞茎为外植体材料时消毒后污染率高等问题。

2).本发明将试管小鳞茎的诱导率提高到99.6％，同时，本发明缩短了诱导时间，在1个月左右一个外植体就能诱导出丛生芽，2个月左右壮大成试管小鳞茎，可投入增殖培养，增殖系数从现有的2～3提高到4～6。

3).本发明在试管内直接诱导出丛生芽，无需更换培养基，在原培养基上实现成球，一步诱导出小鳞茎，省去了以往诱导出愈伤组织后，经过再分化成丛生芽的过程。

4).本发明诱导出试管球后，经快速增殖生根，移栽成活率可达100％，并使整个从外植体接种到移栽成活的组培过程，从原来的5～6个月，缩短到3～4个月左右，大幅缩短了繁育周期，加快了繁育进程，可实现工厂化高效繁育，解决朱顶红国产中鳞茎稀缺的问题。

附图说明

图1为本发明实施例中增殖后的小鳞茎。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例

一种利用鳞茎繁育朱顶红的组培方法，包括以下步骤：

1、外植体的选择和消毒

挖取鳞茎后，选取健康、4℃左右冷处理4周后的朱顶红的小鳞茎(直径＜1cm)，去掉外层褐色皮膜，自来水冲洗1h，在,超净工作台上，用70％酒精浸泡30s，无菌水清洗，再用0.1％升汞浸泡8～12min，然后用无菌水冲洗5遍，吸干水分后备用。

2、诱导培养

将消毒好的小鳞茎十字平均纵切成4份，基部朝下接种在诱导培养基上，接种后，污染率低于8％。

其中，所述诱导培养基为ms+6-ba2mg/l+naa1mg/l+蔗糖30g/l+琼脂4g/l，ph5.8。

诱导培养条件为：培养条件为温度25℃，湿度70％。12h/d光照培养，光照强度为2000lx。

约1个月后诱导出丛生芽，在原培养基上继续培养，丛生芽基部逐渐膨大成试管小鳞茎；若培养2个月，每个切分后的外植体可产生3.5个小鳞茎。

3、继代增殖培养

将诱导产生的试管鳞茎(直径大于0.5cm)单个分开，切去茎顶部，平均纵切成2半，均需带鳞茎盘。切好后，接种在增殖培养基上培养1个月，增殖系数为4.8，增殖培养后，小鳞茎生长健壮，小鳞茎直径可达0.3～1.0cm，株高为8～12cm，单个小鳞茎有叶片2～3片，并伴随少量生根，参见图1。

其中，所述增殖培养基为：ms+6-ba2mg/l+naa0.5mg/l+蔗糖40g/l+琼脂4g/l(ph5.8)；增殖培养条件为：25℃，湿度70％，光照强度为2000lx，光照时间：10h/d。

4、试管鳞茎的生根

将继代增殖产生的试管鳞茎单个分开，每个均带鳞茎盘，接种于生根培养基上，培养20天，生根率达到100％；

其中，所述的生根培养基为：1/2ms+naa0.5mg/l+ac0.5g/l+蔗糖40g/l+琼脂4g/l(ph5.8)；培养条件为：25℃，湿度70％，光照时间10h/d，光照强度为2000lx。。

5、试管鳞茎移栽

将已生根的试管鳞茎从培养瓶中取出，洗净根系上的琼脂，根系蘸取少量五氯硝基苯可湿粉剂，移栽在32孔穴盘中，栽培基质为泥炭：珍珠岩＝7：3。温室条件下，遮阴，保持空气和基质湿润，气温20～25℃左右。10天后，全光照，每2～3天浇一次水，1个月后移栽成活率100％。

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