一种酶解法从山茶花、叶中制备抗衰老原料的方法和应用与流程

• 花匠小妙招
• 2024-12-12 18:50

本发明属于山茶花、叶深加工技术与应用领域，具体涉及一种酶解法从山茶花、叶中制备抗衰老原料的方法和应用。本发明所述的山茶花提取物、山茶叶提取物具有促进胶原蛋白合成和抑制胶原蛋白降解、修护、抗氧化、美白等功效，可以作为功效原料广泛的应用于化妆品。

背景技术：

1、山茶花、叶中含有丰富的黄酮类物质，主要有槲皮素类、木犀草素类等。这类物质主要是由黄酮苷元与糖以o-糖苷键联接而成，通过葡萄糖苷酶的酶解作用将其末端的糖环酶切，使其糖环脱落，呈现为母环和糖环两个部分。通过该方法可以大幅度提升山茶花提取物、山茶叶提取物中黄酮母环的含量，从而提升提取物的抗衰老、修护、美白功效。

2、专利cn202210820549.x公开了一种通过大孔树脂吸附纯化提升山茶花叶提取物中槲皮素的方法，通过该方法可以使山茶花、叶和籽提取物中槲皮素的含量提升3倍左右，但该方法工艺十分复杂，且使用大量的有机溶剂，增加生产成本的同时污染环境。

3、专利cn107164436b公开了一种利用β-葡萄糖苷酶在转化淫羊藿总黄酮制备宝霍苷i的方法，该专利利用β-葡萄糖苷酶酶解淫羊藿苷、朝霍定a和箭藿苷a中的糖苷制备宝霍苷i，提升宝霍苷i的含量，但目前还没有采用β-葡萄糖苷酶酶解山茶花、叶中黄酮苷类物质来提升苷元型黄酮的含量。

4、本发明首次创新性的把β-葡萄糖苷酶酶解技术和山茶花、叶中黄酮苷结合起来，通过β-葡萄糖苷酶酶解山茶花、叶中槲皮素类黄酮苷来提升山茶花提取物、山茶叶提取物中槲皮素的含量。本发明制备出的山茶花提取物、山茶叶提取物中槲皮素含量比传统工艺高100倍以上，从而实现了抗衰老、修护、美白等功效大幅度提升；本发明也为山茶花、叶的深加工提供了参考。

技术实现思路

1、本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种酶解法从山茶花、叶中制备抗衰老原料的方法和应用。

2、山茶花、叶中含有大量的黄酮、多酚、皂苷、多糖等物质，其中山茶花、叶中含有丰富的黄酮类物质主要是由槲皮素等黄酮苷元与葡萄糖等单糖以o-糖苷键联接而成的，且黄酮类物质的母环相同的一类成分较多，通过酶解可以将其糖苷以及母环分开，进而富集脱掉糖苷的母环成分，目前通过酶解制备山茶花、叶中的抗衰老成分的方法及应用还暂未发现。通过常规提取法制备得到的山茶花提取物、山茶叶提取物中的目标活性成分含量较低，本发明可以很好的解决上述问题，通过酶解方法制备的山茶花提取物、山茶叶提取物中含有大量的目标抗衰老成分，进而大幅度提升其护肤功效。

3、同时，发明人在酶解过程中发现，直接使用山茶提取液进行酶解，酶解效果不佳，存在影响β-葡萄糖苷酶的活性的物质，在后续试验时发现，将山茶提取液经大孔树脂预处理后，可以提高酶解效果。

4、本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

5、本发明提供了一种酶解法从山茶中制备抗衰老原料的方法，包括如下步骤：

6、将山茶提取液通过大孔树脂吸附纯化工艺进行前处理，再加入β-葡萄糖苷酶，搅拌酶解，然后升温灭酶，过滤后即得到山茶提取物；

7、所述大孔树脂吸附纯化工艺包括如下步骤：将山茶提取液通过大孔树脂吸附柱，再用水冲洗大孔树脂柱，洗至流出液无色；先用质量分数28-35％的乙醇溶液洗脱，再用质量分数40-45％的乙醇溶液洗脱，所得洗脱液(40-45％的乙醇溶液的洗脱液)即为前处理后的山茶提取液。

8、作为本发明的一个实施方案，所述山茶提取液包括山茶花提取液、山茶叶提取液中的一种或多种。

9、作为本发明的一个实施方案，所述山茶提取液的制备方法如下：

10、将山茶粉末加入乙醇水溶液，然后超声处理，搅拌萃取，过滤，即得山茶提取液；山茶粉末为山茶花粉末和/或山茶叶粉末。

11、其中，乙醇水溶液中乙醇质量含量为10-90％。乙醇水溶液的加入量为山茶粉末质量的10-30倍。超声处理的超声功率为500w-3000w，超声的时间为10min-60min。超声的温度在40℃以下，优选为30-35℃。

12、搅拌萃取的温度为40-70℃，时间为1-4h。萃取完成后，等提取液温度降至室温，过滤即可。

13、作为本发明的一个实施方案，山茶提取液在前处理前，将把山茶提取液浓缩到其质量的1/2-1/6，然后补水至原质量。浓缩是为了除去乙醇，乙醇含量太高酶会失活。山茶提取液的ph值控制在4.0-7.0之间，用氢氧化钠溶液调节。

14、作为本发明的一个实施方案，所述大孔树脂包括d-101、ab-8中的一种或多种。

15、作为本发明的一个实施方案，大孔树脂吸附纯化工艺中所用的大孔树脂，在使用前进行预处理，步骤如下：分别用无水乙醇、酸溶液、碱溶液对大孔树脂进行清洗。大孔树脂中有一些杂质，没有反应的单体，致孔剂等，需要通过乙醇和酸碱洗掉。

16、具体如下：

17、(a)先于吸附柱内加入相当于装填树脂体积0.4-0.5倍的无水乙醇，然后将树脂投入柱中，使其液面高于树脂层约0.3m处，并浸泡24小时；

18、(b)用2bv无水乙醇，以1bv/h的流速通过树脂层，并浸泡4-5小时；

19、(c)用无水乙醇以1bv/h的流速通过树脂层，洗至流出液加水不呈白色混浊和无异味为止，并用水以同样流速洗净乙醇；

20、(d)用1bv的4％hcl溶液，以1bv/h的流速通过树脂层，并浸泡2-4小时，然后用水以同样流速洗至出水ph中性；

21、(e)用1bv的4％naoh溶液，以1bv/h的流速通过树脂层，并浸泡2-4小时，然后用水以同样流速洗至出水ph中性。

22、作为本发明的一个实施方案，所述大孔树脂吸附纯化工艺中，山茶花提取液的用量为0.5-2bv，通过大孔树脂吸附柱的速度为0.5-2bv/h。bv为大孔树脂的床层体积。

23、作为本发明的一个实施方案，所述大孔树脂吸附纯化工艺中，水冲洗大孔树脂柱的速度为1-3bv/h。本发明有些物质需要用水清洗，仅依靠后续28-35％的乙醇溶液无法洗脱。

24、作为本发明的一个实施方案，所述大孔树脂吸附纯化工艺中，质量分数28-35％的乙醇溶液的用量为2-3bv，洗脱的流速为0.5-1bv/h。该浓度的乙醇，可去除山奈酚糖苷等杂质，在后续酶解步骤中，保护β-葡萄糖苷酶的活性。

25、作为本发明的一个实施方案，所述大孔树脂吸附纯化工艺中，质量分数40-45％的乙醇溶液的用量为3-4bv，洗脱的流速为0.5-1bv/h。该浓度的乙醇，可截取山茶提取物中的金丝桃苷和芦丁，同时把大量的成分留在大孔树脂上面，以防其影响β-葡萄糖苷酶的活性。

26、作为本发明的一个实施方案，所述大孔树脂吸附纯化工艺中，所得洗脱液再浓缩到其质量的1/4-1/10，到然后加水到山茶提取液的原质量，即得前处理后的山茶提取液。

27、作为本发明的一个实施方案，β-葡萄糖苷酶的质量为山茶粉末(山茶花粉末、山茶叶粉末)质量的0.1-2％。

28、作为本发明的一个实施方案，搅拌酶解的温度为40-70℃，时间为0.5h-4h。

29、作为本发明的一个实施方案，升温灭酶的温度为80-100℃，时间为10-30min。

30、作为本发明的一个实施方案，过滤是用孔径为0.22μm水膜过滤得到山茶花提取物。

31、本发明还提供了一种所述方法得到的山茶提取物在制备护肤产品上的应用。

32、作为本发明的一个实施方案，所述护肤产品的配方包括化妆水配方、精华液配方、护肤乳液配方、护肤膏霜配方、面贴膜配方、洁面配方中的一种。

33、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

34、(1)本发明首次创新性的用β-葡萄糖苷酶酶解山茶花提取物、山茶叶提取物中槲皮素类黄酮苷制备槲皮素；仅使用该方法能将山茶花提取物、山茶叶提取物中的槲皮素含量提升100倍以上；

35、(2)本发明制备的山茶花提取物、山茶叶提取物，在护肤功效上大大提升，尤其抗皱和修护功效提升一倍以上。

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