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植物组织切片.ppt

花匠小妙招
2024-12-17 22:43

植物组织永久制片一、徒手切片法二、滑走切片法三、离析法四、压片法五、石蜡切片法六、冰冻切片法石蜡切片法石蜡切片法是用石蜡作为包埋剂的一种显微制片方法，是显微技术中最重要最常用的方法之一。它的优点是能够切出薄而均匀的连续切片，便于进行器官的三维重构。此法多用手摇切片机切片。对于较硬的材料，也可以使用滑走切片机。石蜡切片法的操作程序包括：取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、修块、切片、粘片、染色和封片。取材选取生长良好、有代表性的目标材料，洗净。用锋利的双面刀片截取材料，动作要迅速。材料的大小不超过0.5~lcm3。固定将选取的材料放人固定液中，固定液的体积大约是材料的20倍。固定是用化学试剂迅速杀死细胞的过程。目的是尽可能使细胞中的各个组分保持生活状态的结构，并固定在它们原来的位置上。常用的固定剂有：FAA、卡诺和纳瓦兴固定液。【FAA是Formalin-Aceto-Alcohol（福尔马林-乙酸-乙醇）混合液的缩写，配法：50%或70%酒精90毫升,冰醋酸5毫升,福尔马林,5毫升。柔软材料用50%酒精，坚硬材料用70%酒精配制。】脱水固定好的材料经各级酒精脱水至纯酒精。各级酒精的浓度为：30%、50%、70%、85%、95%和l00%。（自动脱水机)透明纯酒精中的植物材料用l／2纯酒精和l／2二甲苯混合液处理2~3h，转入纯二甲苯中，处理两次。由于石蜡溶于二甲苯而不溶于酒精，因此透明的作用除了使材料变得透明外，另一方面是将材料中的酒精除去。浸蜡使石蜡慢慢溶于透明剂中，然后完全取代透明剂进人植物组织中。一般将透明好的材料换入新的二甲苯中，然后加入等体积的碎蜡，置于40℃左右的温箱中。随着碎蜡的溶解，不断加入碎蜡使石蜡饱和为止。时间大约l~2天。包埋浸蜡后，在60℃的温箱中，换两次已溶解的纯蜡，每次约2h。然后将材料和石蜡一起倒人小纸盒中，用加热的镊子迅速把材料按需要的切面和一定的间隔排列整齐，再将小纸盒平放于冷水中，使其很快凝固。