实验三植物冰冻切片制作及显微观察
植物冰冻切片制作及显微观察一实验原理冰冻切片是利用低温使组织迅速冻结达到一定的硬度进行切片的一种方法因其不需经过脱水和透明等步骤具有快速、简便、易操作等特点而且能比较好地保存组织的酶活性较完好地保存组织抗原的免疫活性是原位杂交、酶组织化学和免疫组织化学等实验中常用的方法。冰冻切片的种类较多常用的切片机主要分为两大类开放式冰冻切片机和恒温冰冻切片机。前者主要包括半导体制冷切片机、醇制冷切片机及老式CO2、氯乙烷等切片机等开放式冰冻切片机由于暴露于空气中温度不易控制技术难度大现多已淘汰。后者主要是低温恒冷箱冰冻切片法是目前应用最为广泛的方法。冰冻切片在动物和人体的研究中已被广泛应用但在植物上的应用相对较少。原因是植物组织中存在液泡结构而且由于细胞壁的存在细胞之间有较大间隙细胞含水量远大于相同体积的动物细胞更容易在低温冷冻过程中形成冰晶损伤植物细胞的细微结构且比较容易破碎难以切片和保持植物组织结构的完整性也使得准备植物组织的冰冻切片存在一定的困难。因此在植物材料进行冷冻切片时常使用冷冻保护剂进行处理。冷冻保护剂的作用就是能与组织细胞中的水分结合降低细胞内溶液的冰点使形成冰晶或较大冰晶的机会减小从而减轻细胞内冰晶的损伤。常用的的冷冻保护剂有蔗糖和甘油等不同植物组织细胞结构不同因此选择适合的保护剂的浓度非常重要。另外影响植物冰冻切片的主要因素还有包埋剂和切片厚度等冰冻切片常用的包埋剂有水、普通胶水和OCT用水做包埋剂较难切出完整的切片OCT包埋剂与普通胶水效果基本相同都能切出完整的切片如果在冰冻前将材料浸没在OCT或胶水中让OCT或胶水充分渗透进组织中切片效果更好。切片不可过厚否则细胞重叠不易观察切片也不可过薄否则切片容易破碎需根据不同实验材料和实验目的进行优化。二实验材料拟南芥茎段
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