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植物切片制作.docx

花匠小妙招
2024-12-17 22:43

植物组织制片技术是随着显微镜的出现而发展起来的技术，是人们认识植物体结构的有效手段，已成为植物生物学的重要组成部分。植物制片技术已建立了许多方法，现简要介绍如下几种最常见的制片技术：徒手切片法、滑走切片法、离析法、压片法、石蜡制片法和冰冻切片法。徒手切片法徒手切片法是指手拿刀片把植物新鲜材料切成薄片，所作的切片通常不经染色或经简单染色后，制成临时的水装片用于观察，亦可以通过脱水与染色制成永久制片。优点：简单、方便，不需要复杂的设备，不经过化学药物的处理，基本上保留了植物活体的状态。用品与材料显微镜、载（盖）玻片、刀片、毛笔、培养皿、吸水滤纸、滴管、 ddH2O 或清水、 1% 番红水溶液、菜叶、胡萝卜、马铃薯实验材料对于软硬适中，便于手持的材料，可将实验材料截成适当小块，一般以长 2~3cm ，切片断面不超过 3~5mm 2 为宜。对于过于柔嫩的器官（如叶片等），一般可选用胡萝卜根、土豆块茎等作为支撑物，包被住材料后再进行切片。有时也可将叶片卷成圆筒后再进行切片。实验步骤 1、在小培养皿中放入ddH2 O 或清水。 2、用左手拇指、食指和中指拿住材料，拇指略低于食指与中指，并使材料略为突出在指尖上面。 3、右手持刀，将刀片平稳地放在左手食指之上，与材料切面平行，然后以均匀的动作，自左前方向右后方，斜着向后拉切，切时用臂力而不用腕力。 4、切下许多薄片后，用湿毛笔将这些薄片放人培养皿中。用毛笔挑选透明的薄片，放在载玻片上，用吸管滴一滴水在载玻片上，盖上盖玻片，制成临时装片进行观察。注意事项 1、在切片前，要不断地用水湿润材料和刀片。 2、切片时，两只手应该保持活动状态，不要使它们紧靠身体或实验台，且用力不要过猛，不能用刀片挤压材料或来回切割材料。 3、动作要敏捷，材料要一次切下，不要追求切片形状的完整。简单的组织化学染色经徒手切片法切下的薄片，可以进行简单的组织化学染色，这样更容易分辨细胞的结构，同时可以观察到细胞各部分的化学成分。一般选用以下几种染料进行染色： 1、 1％番红水溶液木质化、栓质化的细胞壁及细胞核染成红色。 2、 25％硫堇水溶液组织呈现从粉红到蓝紫的多色反应，区分含纤维素、木质素的细胞壁。 3、 5%间苯三酚反应木质化的细胞壁成红色，颜色深浅与木质化程度有关。 4、 I2 —KI 染色淀粉粒呈蓝色，细胞核呈黄色。视课上实验进展情况，另外安排显微镜下观察动植物组织装片。压片法（简要介绍，补充实验洋葱根尖有丝分裂染色体标本制备及观察）压片法是植物的器官或组织未经处理或经过处理后，被涂抹或压在载玻片上，使细胞成一薄层，便于进行观察的一种制片方法。压片法的实验步骤包括：取材、预处理、固定、解离、染色、压片、镜检和制成永久制片等。实验步骤 1、取材：用锋利的双面刀片截取生长良好的植物根尖或茎尖，长度不超过3mm。 2、预处理：利用预处理液如秋水仙素、对二氯苯等处理材料，使细胞分裂停留在有丝分裂的中期，并使染色体缩短变粗。预处理的时间视不同植物而定。观察有丝分裂各期特点和减数分裂的幼小花药的制片不需要预处理。 3、固定：用固定剂迅速杀死正在分裂的细胞，使其尽量保持分裂的状态。常用的固定剂是卡诺固定剂，固定时间l~24h 。 4、解离：用酶或盐酸处理固定后的材料，使正在分裂的细胞分离，便于压片。解离时要掌握好时间，特别是用盐酸解离时，时间过短，细胞不易分开；时间过长，则染色困难。 5、染色：常用碱性品红或醋酸洋红等染核的染料进行染色。 6、压片：压片时，将新鲜的或经固定的材料放在载玻片上，用解剖刀或镊子后端压住材料，并往载玻片的另一边拖，注意用力均匀。也可以将载玻片上的材料盖上盖玻片，用解剖针、竹毛衣针或铅笔轻轻敲击，使组织或细胞分散，再用拇指挤压盖玻片，使细胞成一薄层。前者常用于花粉和小孢子母细胞，后者用于根尖、茎尖和幼叶等幼嫩器官。 7、镜检：将压片置于显微镜下观察，选取目标细胞。用记号笔在载玻片和盖玻片上分别作记号。 8、照相或制成永久制片：好的压片可以直接照相，也可以通过冷冻干燥后制成永久制片。滑走切片法（补充）滑走切片法是利用滑走切片机切新鲜的或保存的材料，亦可以切经由石蜡制片法包埋的材料。此法切出的切片厚薄均匀、结构完整，适用于一些比较坚硬的材料。用品和材料实验用品显微镜、滑走切片机、切片刀、载玻片、盖玻片、双面刀片、毛笔、培养皿、滤纸、滴管和软木。实验材料新鲜材料，若直径小于 lcm ，可分割成 3cm 长的小段；若大于 lcm ，则应将材料劈开，使切面的面积小于 lcm2 为宜。新鲜材料可直接用于切片，也可以经处理后再进行切