一种红心火龙果离体组培快速成苗的方法与流程
本发明属于植物繁殖技术领域，具体涉及一种红心火龙果离体组培快速成苗的方法。
背景技术
红心火龙果又称为红火龙果，是火龙果（hylocereusundatus）的一种新型的具有良好保健功效的水果，其果肉含有大量天然花青素而显红色。红心火龙果的果实营养丰富，含有丰富的钙、磷、铁等矿物质和维他命族群，另外还富含有植物白蛋白、花青素和高量的水溶性膳食纤维，甜度远高于普通火龙果，改变了过去“火龙果好看不好吃”的普通认识，深受人们的喜爱，在我国热带、亚热带地区广泛引种栽培，种苗需求量大，种苗供不应求。
火龙果的繁殖主要通过种子、扦插、嫁接等方式，这些方法的繁殖速度较慢，又受繁殖材料供应的限制，很难满足市场的需求。近年来，也有研究人员在火龙果的组织培养方面进行了研究，并取得了一定的进展。如专利申请号为201410135613.6的发明专利“一种提高火龙果组培苗成苗率的方法”，公开了一种提高火龙果组培苗成苗率的方法，其中从外植体刺座处萌生出小芽需要35-40d，成苗周期约需100d。专利申请号为201510297283.5的发明专利“一种火龙果组培快繁方法”，公开了一种火龙果组培快繁方法，其中通过外植体诱导出小芽的时间为28-32d，成苗周期大于100d。同一物种不同基因型对组培快繁技术体系的要求不同。上述方法均为普通火龙果的组培方法，这些方法在红心火龙果的组培应用中效果不佳。
目前还缺乏一套关于红心火龙果稳定、高效的离体快繁体系。同时，能否进一步缩短红心火龙果组培中各个环节的培养时间且保证其品质，将直接影响红心火龙果组培生产能否实现工厂化生产的目标。
技术实现要素：
本发明的目的在于：针对上述问题，提供一种红心火龙果离体组培快速成苗的方法，为红心火龙果种苗工厂化、规模化和集约化生产提供技术支持。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种红心火龙果离体组培快速成苗的方法，其特征在于：以红心火龙果带刺座的茎段为外植体，消毒处理后拔去小刺，分别进行诱导培养、增殖培养、生根培养和移栽培养。
所述消毒方法为：使用洗洁精溶液浸泡外植体并用毛刷刷洗刺座部位，再用清水冲洗30min；之后将外植体浸泡在75%酒精中10s，取出后用无菌水冲洗2次，再将外植体放入0.1%升汞溶液中清毒5-8min，取出后用无菌水反复冲洗6-8次。
所述诱导培养的方法为：将消毒并拔除皮刺的外植体竖直接种于诱导培养基上，置于光照强度1600-1800lux，光照12h/天，温度为25±2℃的条件下光照培养10-15d，得到外植体刺座部位萌生出高2-3cm左右的小芽。
其中，所述外植体竖直接种于诱导培养基上是将外植体竖直插入培养基，且刺座部位浸没于培养基中。所述诱导培养基为ms+6-ba2.0~3.0mg/l+naa1.0~1.5mg/l+蔗糖20~30g/l+琼脂4.0~6.0g/l，ph值为5.8~6.2。
采取本发明的诱导培养基，以及将外植体竖直接种于诱导培养基上的方式进行诱导，且与现有技术相比能显著缩短小芽萌出天数，发明人就已公开的诱导培养基，采取传统的刺座部位位于培养基上的方式进行对比试验，结果如下表：
所述增殖培养的方法为：将诱导萌生的小芽从外植体切下后，接种于增殖培养基上，置于光照强度1600-1800lux，光照12h/天，温度为25±2℃的条件下光照培养25-30d，从小芽基部处萌生出3-5个高约4-5cm的丛生芽。其中，所述增殖培养基为ms+6-ba1.0~2.0mg/l+naa0.5~1.0mg/l+蔗糖20~30g/l+琼脂4.0~7.0g/l，ph值为5.8~6.2。
与已公开的增殖培养基成分相比，本发明的增殖培养基具备差异如下：
本发明采用的增殖培养基，将低浓度的细胞分裂素6-ba与生长素类naa相结合，产生了显著的协同增效作用，不仅增殖系数达到3-5倍，而且增殖芽长势旺盛、高度达到4-5cm，不通过壮苗培养环节即可用于生根诱导培养，缩短了红心火龙果组培苗生产周期，也节约了生产成本。
所述生根培养的方法为：将增殖培养获得的丛生芽切成单芽，转接于生根培养基上，置于光照强度1600-1800lux，光照12h/天，温度为25±2℃的条件下光照培养10-15d，待单芽基部有2-3根不定根萌生出即可移栽到育苗穴盘进行移栽培养。
其中，所述生根培养基为1/2ms+iba0.2~1.0mg/l+iaa0.1~0.5mg/l+蔗糖20~30g/l+琼脂4.0~7.0g/l，ph值为5.8-6.2。
本发明与已公开发明的诱导生根培养基成分比较：
本发明低盐含量的1/2ms与低浓度的2种生长素类外源激素配比使用，发挥了较为明显的协同增效作用，不仅能够促进接种小芽在10-15d即可在其基部萌生出2-3根不定根，生根率达到100%，而且小芽生长健壮，可用于移栽成苗培养，较已有技术缩短生产周期15d以上。
所述移栽培养的方法为：将幼苗移栽于填装有红土：腐殖土：蛭石=1:1:1基质的育苗穴盘，每穴1苗，浇足水，将育苗穴盘放置于温室大棚内的双层拱棚内培养30d，得到高8-12cm、根数6-8根、根长10-12cm、根系粗壮的红心火龙果种苗。
其中，所述温室大棚内的双层拱棚为首先搭建高50-60cm的小拱棚，上面覆盖一层白色塑料薄膜，之后，再在小拱棚外层搭建高100cm的拱棚，上面覆盖一层白色塑料薄膜。
本发明通过以红心火龙果带刺座的茎段为外植体，消毒处理后拔去小刺，分别进行小芽诱导培养、增殖培养、生根培养和移栽培养等步骤建立了红心火龙果稳定高效的离体组培快速成苗的技术体系。其中，步骤（2）中将外植体刺座部位浸没于培养基中，能够比现有技术缩短小芽诱导时间15d左右；步骤（3）增殖培养实现了增殖系数3-5倍；步骤（4）生根培养时，待小芽基部初步萌生出2-3根不定根，即进行移栽培养，较现有技术缩短培养时间15d左右，且生根率达到100%；步骤（5）移栽培养的成活率在96%以上。综合应用该发明技术，能够在90d内获得符合生产需求的苗木，且能够实现年生产苗木100万株以上。
综上，本发明的红心火龙果离体组培快速成苗方法是一种红心火龙果快速繁殖的技术，适用于红心火龙果种苗工厂化、规模化和集约化生产。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例1:本实施例公开的红心火龙果离体组培快速成苗的方法，包括如下步骤：
（1）外植体选取与消毒：采取带有刺座的红心火龙果茎段，使用洗洁精溶液浸泡外植体并用毛刷刷洗刺座部位，再用清水冲洗30min；之后将外植体浸泡在75%酒精中10s，取出后用无菌水冲洗2次，再将外植体放入0.1%升汞溶液中清毒5-8min，取出后用无菌水反复冲洗6-8次，用消毒后的摄子拔去皮刺；
（2）诱导培养：将消毒并拔除皮刺的外植体竖直接种于ms+6-ba2.0mg/l+naa1.5mg/l+蔗糖20g/l+琼脂6.0g/l，ph值为5.8~6.2的诱导培养基上，且外植体刺座部位浸没于培养中，置于光照强度1600-1800lux，光照12h/天，温度为25±2℃的条件下培养10-15d，得到外植体刺座部位萌生出高2-3cm左右的小芽；
（3）增殖培养：将诱导萌生的小芽从外植体切下后，接种于ms+6-ba1.0mg/l+naa1.0mg/l+蔗糖30g/l+琼脂4.0g/l，ph值为5.8~6.2的培养基上进行增殖培养，置于光照强度1600-1800lux，光照12h/天，温度为25±2℃的条件下光照培养25-30d，从小芽基部处萌生出3-5个高约4-5cm的丛生芽；
（4）生根培养：将增殖培养获得的丛生芽切成单芽，转接于1/2ms+iba0.5mg/l+iaa0.1mg/l+蔗糖20g/l+琼脂5g/l，ph值为5.8-6.2的生根培养基上，置于光照强度1600-1800lux，光照12h/天，温度为25±2℃的条件下光照培养10-15d，待单芽基部有2-3根不定根萌生出即可移栽到育苗穴盘进行移栽培养；
（5）移栽培养：将幼苗移栽于填装有红土：腐殖土：蛭石=1:1:1基质的育苗穴盘，每穴1苗，浇足水，将育苗穴盘放置于温室大棚内的双层拱棚内培养30d即可将苗木换袋出圃。
采用此方法进行红心火龙果的快速扩繁，平均增殖系数达4.6倍，生根率达100%，平均移栽培养成活率98.6%，90d内可获得平均苗高10.6cm、平均侧根数量8根、平均根长12cm、根系粗壮的红心火龙果种苗。
实施例2:本实施例公开的红心火龙果离体组培快速成苗的方法，包括如下步骤：
（1）外植体选取与消毒：采取带有刺座的红心火龙果茎段，使用洗洁精溶液浸泡外植体并用毛刷刷洗刺座部位，再用清水冲洗30min；之后将外植体浸泡在75%酒精中10s，取出后用无菌水冲洗2次，再将外植体放入0.1%升汞溶液中清毒5-8min，取出后用无菌水反复冲洗6-8次，用消毒后的摄子拔去皮刺；
（2）诱导培养：将消毒并拔除皮刺的外植体竖直接种于ms+6-ba3.0mg/l+naa1.0mg/l+蔗糖30g/l+琼脂4.0g/l，ph值为5.8~6.2的诱导培养基上，且外植体刺座部位浸没于培养中，置于光照强度1600-1800lux，光照12h/天，温度为25±2℃的条件下培养10-15d，得到外植体刺座部位萌生出高2-3cm左右的小芽；
（3）增殖培养：将诱导萌生的小芽从外植体切下后，接种于ms+6-ba2.0mg/l+naa0.5mg/l+蔗糖30g/l+琼脂7.0g/l，ph值为5.8~6.2的培养基上进行增殖培养，置于光照强度1600-1800lux，光照12h/天，温度为25±2℃的条件下光照培养25-30d，从小芽基部处萌生出3-5个高约4-5cm的丛生芽；
（4）生根培养：将增殖培养获得的丛生芽切成单芽，转接于1/2ms+iba1.0mg/l+iaa0.5mg/l+蔗糖30g/l+琼脂6g/l，ph值为5.8-6.2的生根培养基上，置于光照强度1600-1800lux，光照12h/天，温度为25±2℃的条件下光照培养10-15d，待单芽基部有2-3根不定根萌生出即可移栽到育苗穴盘进行移栽培养；
（5）移栽培养：将幼苗移栽于填装有红土：腐殖土：蛭石=1:1:1基质的育苗穴盘，每穴1苗，浇足水，将育苗穴盘放置于温室大棚内的双层拱棚内培养30d即可将苗木换袋出圃。
采用此方法进行红心火龙果的快速扩繁，平均增殖系数达5倍，生根率达100%，平均移栽培养成活率96.7%，90d内可获得平均苗高11.8cm、平均侧根数量6.9根、平均根长11.6cm、根系粗壮的红心火龙果种苗。
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