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一种黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法.pdf

花匠小妙招
2024-12-24 00:54

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610291162.4 (22)申请日 2016.05.05 (65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 105918124 A (43)申请公布日 2016.09.07 (73)专利权人宁波大学地址 315211 浙江省宁波市江北区风华路 818号宁波大学 (72)发明人熊金波周伟黄文娟张进杰 (74)专利代理机构杭州丰禾专利事务所有限公司 33214 代理人王鹏举 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (56)对比文件 CN。

2、 105359980 A,2016.03.02,说明书第2、 6-10段. CN 104663458 A,2015.06.03,说明书第17 段. CN 104396746 A,2015.03.11,全文. CN 104686344 A,2015.06.10,全文. 周欢等.百合科植物组织培养的研究进展. 湖北农业科学 .2010,第49卷(第5期),第1232- 1237页. 审查员王琼 (54)发明名称一种黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法 (57)摘要本发明公开了一种黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤1）外植体的消毒：剪取黄花油点草茎段，清洗后消毒，。

3、接种到添加植物生长调节剂的MS培养基中； 2）腋芽的诱导； 3)丛生芽的诱导； 4）不定芽的增殖和壮苗； 5）不定芽的生根培养； 6）再生苗的炼苗和移栽。在上述步骤中采用了不同成分和配比的培养基。采用本发明方法，黄花油点草茎段腋芽诱导率达 96.6%，丛生芽诱导率达90%左右，不定芽增殖倍数达5.6-5.8，幼苗生根率达97.1%以上，植株炼苗成活率达98.8%，植株移栽成活率达98%以上，按此方法，每年可以繁殖超过100万株幼苗。权利要求书2页说明书7页 CN 105918124 B 2017.11.17 CN 105918124 B 1.一种黄。

4、花油点草组织培养与快速繁殖的方法，包括以下步骤：（1）黄花油点草的消毒 4月至8月之间，剪取带腋芽的茎段，先用软毛刷于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2 min，倾倒洗洁精溶液后用流水冲洗0.5 h后，在紫外灯消毒30 min以上的超净工作台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡1 min，用无菌水冲洗3次，浸泡入滴加有2滴吐温-80的0.1% HgCl2溶液内浸泡消毒12-13 min，然后用无菌水充分浸洗3次；（2）腋芽的诱导将上一步得到的的外植体，以正常的极性方向插入到装有添加NAA 0.2 g/L， 6-BA 2.0 mg/L的MS基本培养基的。

5、培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8 g/ L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；接种好的培养瓶先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度为30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯；（3）丛生芽的诱导待上一步培养的腋芽长出后，在紫外灯灭菌30 min的超净工作台里切下带腋芽的茎段，以正常的极性方向接种到装有添加TDZ 0.5 mg/L， 6-BA 1.0-2.0 mg/L的MS基本培养基的培。

6、养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30- 40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯；（4）不定芽的增殖将上一步诱导获得的不定芽丛切成2-3株不定芽的芽块，以正常的极性方向接种到装有添加6-BA 2.0mg/L， IAA 0.5-1.0 mg/L的MS基本培养基的培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，。

7、琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯；（5）再生植株的生根培养切取叶片嫩绿、生长旺盛且23 cm高的不定芽，插入到添加NAA 0.2 mg/L， AC 0.5 mg 的25% MS基本培养基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为15-20 g/L，琼脂添加量为 8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L，。

8、pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 mol/(m2s)；（6）炼苗移栽待生根的组培苗的苗高长至5 cm以上，根长超过5 cm时，松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注入少量清水，防止培养基干裂，但先不移开瓶盖， 12 h后半挪开瓶盖，再过12 h，移走瓶盖，让灯光直照再生植株培养2 d；然后小心地将培养基捣碎，拿出再生植株，用水浸润根部过夜后，小心将残留的琼脂冲洗干净，将植株定植于珍珠岩、泥炭重量比为 1：。

9、 2的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在15-25，光源可采用自然光或白色节能灯；第8 d松开薄膜，使与外面空气相通，第9 d揭开薄膜，经常于叶权利要求书 1/2 页 2 CN 105918124 B 2 面喷雾保持湿润，炼好苗后，小心挖出移栽入大田。权利要求书 2/2 页 3 CN 105918124 B 3 一种黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法技术领域 0001 本发明属于植物培养技术领域，具体涉及一种黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法。背景技术 0002 黄花油点草Tricyrtis maculat。

10、a (D. Don) Machride，是百合科（Liliaceae）油点草属（Tricyrtis）多年生草本植物，产云南、四川、贵州、陕西、甘肃、河北、河南、湖南和湖北等地。生于海拔280-2300米的山坡林下、路旁等处。其根或全草入药，名黑点草，也叫立竹根、山黄瓜、黄瓜菜、大黄瓜香、瓜米菜，其性微寒，味甘，具清热除烦、活血消肿之功效，主治胃热口渴、烦燥不安、劳伤、水肿；其花的颜色常有变化，由绿白色、淡黄色至近黄色，花被片内面的斑点由紫黑色点状小块分布到紫褐色星散地分布，具有良好的观赏价值，有待于商业化。油点。

11、草属植物在全世界约15种，国内有4种，分别为台湾油点草（T. Formosana）、油点草（T. Macropoda）、黄花油点草（T. Maculata）、紫花油点草（T. Stolonifera），目前尚未有该属植物的组织培养快速繁殖的研究报道。发明内容 0003 本发明所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种成活率高，利于实现产业化生产的黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法。 0004 为实现本发明之目的，采用以下技术方案予以实现：一种黄花油点草组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于包括以下步骤： 0005 （1）黄花油点草的。

12、消毒 0006 4月至8月之间，剪取带腋芽的茎段，先用软毛刷于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2 min，倾倒洗洁精溶液后用流水冲洗0.5 h后，在紫外灯消毒30 min以上的超净工作台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡1 min，用无菌水冲洗3次，浸泡入滴加有 2滴吐温-80的0.1% HgCl2溶液内浸泡消毒12-13 min，然后用无菌水充分浸洗3次，即可得到消完毒的外植体； 0007 （2）腋芽的诱导 0008 将上一步得到的的外植体，以正常的极性方向插入到装有添加NAA 0.1-0.5 g/L， 6-BA 1.0-5.0 mg/L的MS基本培养基。

13、的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8 g/L，活性炭的添加量为0-2.0 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；接种好的培养瓶先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为 (251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度为30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯； 0009 （3）丛生芽的诱导 0010 待上一步培养的腋芽长出后，在紫外灯灭菌30 min的超净工作台里切下带腋芽的茎段，以正常的极性方向接种到装有添加TDZ 0-2.0 mg/L， 6-BA 0-5.0 m。

14、g/L的MS基本培养说明书 1/7 页 4 CN 105918124 B 4 基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度 30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯； 0011 （4）不定芽的增殖 0012 将上一步诱导获得的不定芽丛切成2-3株不定芽的芽块，接种到装有添加6-BA 0- 6.0mg/L， IAA。

15、 0-3.0 mg/L的MS基本培养基的培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/ L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251) ，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯； 0013 （5）再生植株的生根培养 0014 切取叶片嫩绿、生长旺盛且23 cm高的不定芽，插入到添加NAA 0-1.0 mg/L ， AC 0.5 mg的12.5%-100% MS基本培养。

16、基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为10-50 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 mol/(m2s)； 0015 （6）炼苗移栽 0016 待生根的组培苗的苗高长至5 cm以上，根长超过5 cm时，松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注入少量清水，防止培养基干裂，但先不移开瓶盖， 12 h后半挪开瓶盖，再过12 h，移走瓶盖，让灯光直照再生植。

17、株培养2 d；然后小心地将培养基捣碎，拿出再生植株，用水浸润根部过夜后，小心将残留的琼脂冲洗干净，将植株定植于珍珠岩、泥炭重量比为 1：（1-5）的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控制在15-25，光源可采用自然光或白色节能灯；第8 d松开薄膜，使与外面空气相通，第9 d揭开薄膜，经常于叶面喷雾保持湿润，适应3-5 d后可移栽大田中。 0017 作为优选方案：用于丛生芽诱导的材料为步骤（1）和（2）获得的无菌萌发的腋芽。 0018 作为优选方案：所述步骤（2）中MS基本培养基中添加了6-BA 2.0 mg/。

18、L， NAA 0.2 mg/L，活性炭0.5 mg/L。 0019 作为优选方案：所述步骤（3）中MS基本培养基中添加了TDZ 0.5 mg/L， 6-BA 1.0- 2.0 mg/L。 0020 作为优选方案：所述步骤（4）中MS基本培养基中添加了6-BA 2.0 mg/L， IAA 0.5- 1.0 mg/L。 0021 作为优选方案：所述步骤（5）中的生根培养基为25%MS基本培养基， NAA 0.2 mg/L，蔗糖15-20 g/L。 0022 作为优选方案：所述步骤（6）中混合基质中珍珠岩与泥炭的重量比为 1： 2。 0023 与现有技术相比较，本发明的。

19、有益效果是：采用本发明的方法，能够快速地获得植株，利于产业化生产。采用本发明方法，黄花油点草茎段腋芽诱导率达96.6%，丛生芽诱导率达90%左右，不定芽增殖倍数达5.6-5.8，幼苗生根率为97.1%以上，幼苗炼苗成活率达 98.8%，植株移栽成活率达98%以上，按此方法，在一年内可繁殖出幼苗超过100万株。说明书 2/7 页 5 CN 105918124 B 5 具体实施方式 0024 实施例1 0025 本实施例提供一种组织培养与快速繁殖的方法，包括以下步骤： 0026 （1）黄花油点草的消毒 0027 4月至8月之间，剪取带腋芽的茎段，先用软毛刷。

20、于自来水下轻柔刷洗，加入适量的洗洁精溶液浸泡2 min，倾倒洗洁精溶液后用流水冲洗0.5 h后，在紫外灯消毒30 min以上的超净工作台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡1 min，用无菌水冲洗3次，浸泡入滴加有 2滴吐温-80的0.1% HgCl2溶液内浸泡消毒12-13 min，然后用无菌水充分浸洗3次。经此步骤消毒的外植体，接种培养基20 d后统计发现，其污染率3.7%，成活率在91.8%； 0028 （2）腋芽的诱导 0029 将上一步得到的的外植体，以正常的极性方向插入到装有添加NAA 0.2 g/L， 6-BA 2.0 mg/L的MS基本培养基的培养瓶。

21、中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8 g/L，活性炭（AC）的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；接种好的培养瓶先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251) ，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度为30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯；最早培养5 d后腋芽出现明显的萌动，平均出现萌动的时间为8.6 d； 30 d统计腋芽的萌发率达 96.6%； 0030 （3）丛生芽的诱导 0031 待上一步培养的腋芽长出后，在紫外灯灭菌30 min的超净工作台。

22、里切下带腋芽的茎段，以正常的极性方向接种到装有添加TDZ 0.5 mg/L， 6-BA 1.0-2.0 mg/L的MS基本培养基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度 30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯；在培养9 d时节间膨大起来， 14 d开始出现丛生芽， 30 d统计丛生芽诱导率为90%左右； 00。

23、32 （4）不定芽的增殖 0033 将上一步诱导获得的不定芽丛切成2-3株不定芽的芽块，以正常的极性方向接种到装有添加6-BA 2.0mg/L， IAA 0.5-1.0 mg/L的MS基本培养基的培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯； 30 d统计不定芽的增殖倍数为5。

24、.6-5.8，不定芽的生长正常，叶色浓绿； 0034 （5）再生植株的生根培养 0035 切取叶片嫩绿、生长旺盛且23 cm高的不定芽，插入到添加NAA 0.2 mg/L， AC 0.5 mg的25% MS基本培养基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为15-20 g/L，琼脂添加量为 8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 mol/(m2s)；生根最早在培养7 d后出现。

25、， 30 d统计后发现说明书 3/7 页 6 CN 105918124 B 6 平均出根时间为8.8 d，生根率为97.1%以上； 0036 （6）炼苗移栽 0037 待生根的组培苗的苗高长至5 cm以上，根长超过5 cm时，松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注入少量清水，防止培养基干裂，但先不移开瓶盖， 12 h后半挪开瓶盖，再过12 h，移走瓶盖，让灯光直照再生植株培养2 d；然后小心地将培养基捣碎，拿出再生植株，用水浸润根部过夜后，小心将残留的琼脂冲洗干净，将植株定植于珍珠岩、泥炭重量比为 1： 2的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保。

26、温保湿，室内温度控制在15-25，光源可采用自然光或白色节能灯；第8 d松开薄膜，使与外面空气相通，第9 d揭开薄膜，经常于叶面喷雾保持湿润，适应5 d后统计发现炼苗成活率为98.8%，炼好苗后，小心挖出移栽入大田，按常规管理，移栽成活率可达98%以上。 0038 文中涉及的缩略词： 0039 6-BA 6-苄氨基腺嘌呤 0040 AC 活性炭 0041 IAA 吲哚乙酸 0042 NAA 萘乙酸 0043 TDZ 噻苯隆(脱叶脲) 0044 MS Murashige和Skoog （1962） 0045 实施例2 0046 本实施例与实施例1的区别在于步骤（2）。

27、腋芽的诱导：以正常的极性方向插入到装有添加NAA 0.1-0.6 mg/L， 6-BA 1.0-6.0 mg/L的MS基本培养基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8 g/L， AC添加量为0-2.0 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；接种好的培养瓶先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度为30-40 mol/(m2 s)，光源为白色节能灯； 30 d后统计发现，腋芽诱导率在0-97.9%之间，腋芽出芽平均时间为 7.7-15。

28、.4 d之间，其中以NAA 0.2 mg/L， 6-BA 2.0 mg/L， AC 0.5 g/L效果最佳，腋芽诱导率为98.7%，腋芽出芽平均时间为8.2 d。结果还表明随着6-BA浓度提高，腋芽诱导率增加，随着NAA浓度增加，腋芽生长速度加快。腋芽在萌发过程中可看到外植体周围的培养基产生褐色，而AC可去除褐化物质，但过多的AC却吸附过多营养，易导致生长的减缓。 0047 表1 不同处理对腋芽诱导率和腋芽出芽平均时间的影响 0048 处理腋芽诱导率(%)腋芽出芽平均时间(d)腋芽生长长势 NAA 0.1 mg/L， 6-BA 1.0 mg/L72.213.2出芽慢。

29、，生长慢，培养基有少量褐化 NAA 0.1 mg/L， 6-BA 2.0 mg/L78.612.1出芽尚可，生长较慢，培养基有少量褐化 NAA 0.1 mg/L， 6-BA 4.0 mg/L85.710.9出芽尚可，生长较慢，培养基有褐化 NAA 0.1 mg/L， 6-BA 6.0 mg/L80.29.6生长较慢，叶稍有水渍化，培养基有褐化 NAA 0.2 mg/L， 6-BA 2.0 mg/L83.510.2出芽尚可，生长较慢，培养基有褐化 NAA 0.4 mg/L， 6-BA 2.0 mg/L89.09.4出芽尚可，生长较慢，培养基有褐化 NAA 0.6 mg/L。

30、， 6-BA 2.0 mg/L83.410.1出芽尚可，生长较慢，培养基大量褐化 NAA 0.2 mg/L， 6-BA 2.0 mg/L， AC 0.5 g/L96.68.6出芽快，生长快 NAA 0.2 mg/L， 6-BA 2.0 mg/L， AC 1.0 g/L95.89.2出芽快，生长较快 NAA 0.2 mg/L， 6-BA 2.0 mg/L， AC 2.0 g/L98.19.9出芽慢，生长慢 0049 实施例3 说明书 4/7 页 7 CN 105918124 B 7 0050 本实施例与实施例1的区别在于步骤（3）丛生芽的诱导：在紫外灯灭菌30 min的超净。

31、工作台里切下带腋芽的茎段，以正常的极性方向接种到装有添加TDZ 0-2.0 mg/L， 6-BA 0-6.0 mg/L的MS基本培养基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯。 30 d后统计发现，不定芽诱导率介于0-91.8%之间，不定芽数为1.0-8.8之间，其中以M。

32、S， TDZ 0.5 mg/L， 6-BA 2.0mg/ L效果最佳，不定芽诱导率在90%左右，不定芽数在6.4-6.5，而且不定芽叶色浓绿，生长良好，株高和茎粗适中。结果还表明， 6-BA对于丛生芽的诱导效果较弱， TDZ较强，两者组合效果更佳。 0051 表2 不同处理对丛生芽诱导的影响 0052 处理丛生芽诱导率(%)不定芽数生长情况 TDZ 0.5 mg/L68.55.5不定芽叶色淡绿，生长尚可 TDZ 1.0 mg/L72.65.8不定芽叶色浓绿，生长良好 TDZ 2.0 mg/L73.45.7不定芽玻璃化严重，叶片和茎水渍状 TDZ 0.5 mg/L， 6-。

33、BA 1.0 mg/L89.66.4不定芽叶色淡绿，生长良好 TDZ 0.5 mg/L， 6-BA 2.0 mg/L906.5不定芽叶色淡绿，生长尚可，有水渍化倾向 TDZ 0.5 mg/L， 6-BA 6.0 mg/L84.27.2不定芽玻璃化严重，叶片和茎水渍状 0053 实施例4 0054 本实施例与实施例1的区别在于步骤（4）丛生芽的增殖：将上一步诱导获得的不定芽丛切成2-3株不定芽的芽块，接种到装有添加6-BA 0-6.0mg/L， IAA 0-3.0 mg/L的MS基本培养基的培养基中，该培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性。

34、炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 mol/(m2s)，光源为白色节能灯。 30 d后统计发现，各培养基中不定芽的增殖倍数在1.0-6.2之间，高的生长素和细胞分裂素均容易产生玻璃化现象，表现最佳的培养基为MS， 6-BA 2.0 mg/L， IAA 0.5-1.0 mg/L其增殖倍数在5.6-5.8，且无玻璃化苗，植株粗壮，且生长较快。 0055 表3 不同处理对不定芽增殖的影。

35、响 0056 不同处理增殖倍数生长情况 6-BA 2.0 mg/L5.1生长较慢 6-BA 4.0 mg/L5.8生长较慢 6-BA 6.0 mg/L6.2生长较慢，叶有水渍化 6-BA 2.0 mg/L， IAA 0.5 mg/L 5.6生长快，茎粗壮 6-BA 2.0 mg/L， IAA 1.0 mg/L 5.8生长快，茎粗壮 6-BA 2.0 mg/L， IAA 3.0 mg/L 5.2生长快，茎较弱，且有水渍 0057 实施例5 0058 本实施例与实施例1的区别在于步骤（5）再生植株的生根培养：切取叶片嫩绿、生说明书 5/7 页 8 CN 105918124 。

36、B 8 长旺盛且23 cm高的不定芽，插入到添加NAA 0-1.0 mg/L，活性炭0.5 mg/L的12.5%-100% MS基本培养基的培养瓶中，该培养基中的蔗糖添加量为10-50 g/L，琼脂添加量为8.0 g/L，活性炭的添加量为0.5 g/L， pH为5.8-6.0，培养基曾于121下高温高压灭菌20 min；先置于黑暗中过夜，随后光照培养，培养条件为：培养温度为(251)，光照时间为14 h光/10 h暗，光照强度30-40 mol/(m2s)； 30 d时统计发现，最早生根时间8-14 d，生根率在 59.8-98.8%，说明较易生根， MS基本培。

37、养基的浓度对于生根基本无影响，只不过太低的浓度下生根的再生植株生长柔弱；蔗糖浓度对于不定芽的生根影响也不大；最佳的组合为25% MS， NAA 0.2 mg/L，蔗糖15-20 g/L，生根时间早，最早7 d就可以生根，生根率可达97.1%以上，根粗适中，叶绿浓绿，适于炼苗移栽。 0059 表4 不同培养基对生根的影响 0060 培养基生根率(%)最早发根时间（d）平均生根时间（d）生长情况 12.5%MS，蔗糖30 g/L64.31011.6根细、长，叶色黄 25%MS，蔗糖30 g/L66.81113.2根粗和根长适中，叶色较黄 50%MS，蔗糖30。

38、 g/L67.51113.5根较细长，叶色浓绿 MS，蔗糖30 g/L59.81315.4根较细长，叶色浓绿 25%MS，蔗糖20 g/L68.31011.3根较细长，叶色浓绿 25%MS，蔗糖50 g/L63.21416.8根较细长，叶色逍绿 25%MS， NAA 0.1 mg/L，蔗糖20 g/L90.489.5根粗和根长适中，叶色浓绿 25%MS， NAA 0.2 mg/L，蔗糖20 g/L97.178.8根粗和根长适中，叶色浓绿 25%MS， NAA 0.2 mg/L，蔗糖15 g/L97.478.8根粗和根长适中，叶色浓绿 25%MS， NAA 0.5 mg。

39、/L，蔗糖20 g/L98.889.1根粗、短，叶稍有水渍化 0061 实施例6 0062 本实施例与实施例1的区别在于步骤（6）炼苗移栽：待生根的组培苗的苗高长至5 cm以上，根长超过5 cm时，松开组培瓶的瓶盖，往瓶中注入少量清水，防止培养基干裂，但先不移开瓶盖， 12 h后半挪开瓶盖，再过12 h，移走瓶盖，让灯光直照再生植株培养2 d；然后小心地将培养基捣碎，拿出再生植株，用水浸润根部过夜后，小心将残留的琼脂冲洗干净，将植株定植于珍珠岩、泥炭重量比为 1：（1-5）的混合基质中，浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿，室内温度控。

40、制在15-25，光源可采用自然光或白色节能灯；第8 d 松开薄膜，使与外面空气相通，第9 d揭开薄膜，经常于叶面喷雾保持湿润，适应3-5 d后可移栽大田中。适应5 d后统计发现，随着泥炭的比例提高，幼苗的生长变得健壮，但炼苗成活率却有小幅下降，这主要是因为珍珠岩在培养基中起到保水透气的作用，而泥炭提供幼苗生长所需的营养。综合来看，珍珠岩与泥炭的比例在1： 2时，炼苗成活率和幼苗生长达到最佳。 0063 表5 不同栽培基质对炼苗成活率的影响 0064 珍珠岩、泥炭重量比炼苗成活率（%）生长状况 1： 198.5苗稍黄 1： 298.8苗生长佳 1： 392.7苗生长佳 1： 488.5苗生长佳说明书 6/7 页 9 CN 105918124 B 9 1： 582.9苗生长佳 0065 对比实施例1至6可知，实施例1为最优选的实施例，实施例1的每个步骤均采用了实施例2至6所述的最佳培养条件，能够获得最高的植株产量。说明书 7/7 页 10 CN 105918124 B 10 。