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一种羊肚菌菌种快速繁育方法与流程

花匠小妙招
2024-12-26 08:28

本发明涉及食用菌栽培技术领域，具体涉及到一种羊肚菌菌种快速繁育方法。

背景技术：

羊肚菌（Morchella）属子囊菌门（Ascomycota）、盘菌纲（Pezizimycetes）、盘菌目（Pezizales）、羊肚菌科（Morchellaceae）。因其表面呈蜂窝状，外形常为圆顶或尖顶，与羊肚颇为相似，故名为羊肚菌。

羊肚菌肉质脆嫩，含有丰富的氨基酸、多糖、脂肪酸，其营养价值较高，是世界公认的珍贵食用真菌。在欧洲各地，羊肚菌以其鲜美的味道被认为是仅次于块菌的美味食用菌，北美人同样认为它是食用菌中的佳品。羊肚菌在我国最早被收载于《本草纲目》，中医以其子实体入药，因性平味甘，故具有健脾、化痰理气、益肠消食等功效。

近年来，由于国内、国外市场对羊肚菌的需求日益增加，加之分布区域特定、出菇期短、天然产量有限以及过度采摘，呈现产量逐年下降趋势。市场价格也因此居高不下。目前我国已实现部分羊肚菌菌株人工栽培，每亩产量一般在100～200公斤，但是由于菌种的获取方法极不规范，菌种生产周期较长，加之对羊肚菌生活史周期尚未完全明了，导致菌种产量不稳定，甚至有绝收的现象出现。

技术实现要素：

为了解决上述技术问题，本发明提供一种羊肚菌菌种快速繁育方法，该方法能够显著缩短羊肚菌菌种的繁育周期，并且能有效提高羊肚菌菌种繁育的产量。

本发明通过下述技术方案实现：

一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）种菇选择：选取菇柄长1～2厘米、菇帽长3～4厘米、纹路清晰、褶皱紧密的羊肚菌种菇连根拔除，清除杂质后摊晾至含水量为60～70%，以提高组织分离可操作性，降低细菌感染的几率；

（2）无糖培养基制备：将土豆去皮后切成0.9～1.1cm3的颗粒，称取200份，加水煮沸18～20分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；

（3）菌种分离：将步骤（1）中的种菇、无糖培养基和分离器具灭菌后，切开种菇菌盖，铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内，16～18℃培养4～6天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝，7～8天后待菌丝长到直径1.5～2cm的菌落时即可提纯；

（4）接种：从步骤（3）所得无糖培养基中挑取4～5mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接20～30支，16～18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝，9～10天菌丝即可长满试管；

（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9～1.1cm的片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，一支试管能够接6～8瓶原种，温度16～18℃、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料，5～7天菌丝即可封面；

（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动8～10次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养3～5天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量380～410瓶。

其中，步骤（4）中所述提纯培养基的制备方法如下：

取20份黄豆打磨成豆浆后加入葡萄糖20份、琼脂粉20份、KH2P04 1.5份、MgSO41.5份、酵母膏1份充分溶解，调节PH值为7，采用20mm×200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，用试管塞封口，灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基。

步骤（5）中所述原种培养基的制备方法如下：

1）选用当年无虫优质麦粒60份，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1份，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用；

2）取木屑30份提前备好用水淋透，自然堆放至棕黄色备用；

3）将上述步骤中制备好的麦粒、木屑以及草炭土8份、石膏1份混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口。

在原种培养基中，麦粒富含淀粉和灰分营养更易于菌丝吸收，木屑增加培养基透气性，易于菌丝生长，草炭土含大量腐殖酸和微量元素增加菌丝活力，能够有效促进菌核形成，利于羊肚菌菌丝的快速生长。

羊肚菌属于子囊菌，其生长过程较为复杂，且生长过程中，子囊、菌丝体、子实体形态大小会发生较大变化，其次，不同种的羊肚菌菌种具有不同的培养条件，其生长速度、生长习性、菌核发育、菌丝和菌核的颜色等都有明显的差异。目前羊肚菌菌种的获取方法各式各样，如组织分离、孢子分离、菌土分离等导致品种退化非常严重。以上原因导致目前羊肚菌菌种生产的周期长、产量不稳定，甚至绝收，难以满足市场供应。

本发明的菌种生产由传统的先生产原种再生产栽培种用于播种，改进为直接生产原种播种，去掉了原种扩繁为栽培种的环节，菌种繁育时间缩短了24～25天，进一步地，改进接种方式，接种方式由1个点位接种改进为2个点位接种，将菌种在试管内的提纯培养基生长的时间由10天缩短到6天，再通过改变原种培养方式，将传统的静置培养改为摇瓶培养，使得原种培养时间缩短5天以上。因此，本发明的羊肚菌菌种繁育方法有效将传统的70天缩短到33～36天，大大提升了菌种制种效率，适合在羊肚菌栽培中推广。

本发明直接采用原种播种，由于减少了种子繁殖代数，避免菌种由于扩繁导致的退化和衰弱，保证了种子活性，其适应性和抗逆性更强，利于羊肚菌播种后的快速生长发育，提高产量。

与传统的分离培养基相比，本发明采用了不含葡萄糖的无糖培养基，由于羊肚菌菌丝由组织块的再生萌发长成，能够快速附着在培养基表面，而杂菌菌丝必须由芽孢萌发长成，芽孢在无糖培养基表面由于养分不够很难萌发，减少了杂菌滋生的机会，因而无糖培养基能够避免菌种被杂菌污染，使羊肚菌更易存活生长，提高菌种分离的成活率，提高羊肚菌菌种的产量，为做羊肚菌品种的分类鉴定及品种选育奠定了基础。

本发明通过将菌种分离容器由试管改进为三角瓶，将菌种繁殖数量由8～10支增加到25～30支，大大提高了原种的产量，利于大范围播种。

本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：

（1）本发明的菌种生产由传统的先生产原种再生产栽培种用于播种，改进为直接生产原种播种，去掉了原种扩繁为栽培种的环节，大大缩短了菌种制种时间，同时由于减少了种子繁殖代数，保证种子活性，其适应性和抗逆性更强；

（2）通过改进接种方式、改变原种培养方式有效将菌种培养时间缩短9天以上，同时本发明直接采用原种播种，因而整个菌种繁育方法由传统的70天缩短到33～36天；

（3）通过将菌种分离容器由试管改进为三角瓶，提纯培养时菌种繁殖数量由8～10支增加到25～30支，大大提高了繁育出的菌种的产量。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。

实施例1

一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）种菇选择：采集当地人工种植或野生的羊肚菌，选取菇柄长1～2厘米、菇帽长3～4厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌，采菇时将种菇整连根拔除，去掉多余泥土和杂质，用纸质采样袋密封，摊晾至含水量60%备用；

（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成0.9cm3的颗粒，称取200g，加水1000ml放入锅内煮沸20分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，灭菌方法为，将三角瓶直立放在医用高压锅内密封，通电加热，打开排气阀，待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时，表示锅内冷空气已排尽，关闭排气阀待温度上升至120℃时开始计时，维持40分钟后断电，灭菌完成后，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；

（3）菌种分离：将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中，超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开，利用接种铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内，16℃培养4天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝，8天后待菌丝长到直径1.5cm的菌落时即可提纯；

（4）接种：从无糖培养基中挑取4mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接28支，16℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝，10天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：

取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、KH2P04 1.5g、MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解，调节PH值为7，采用20mm×200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，用试管塞封口，灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基；

（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9cm的片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25℃，接种在接种箱或接种室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度18℃、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料，6天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：

选用当年无虫优质麦粒60g，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1g，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用，取木屑30g提前备好用水淋透，自然堆放至棕黄色备用，将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高压灭菌设备，压力0.14MPa下灭菌3小时；

（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动8～10次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养5天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量400瓶。

实施例2

一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）种菇选择：采集当地人工种植或野生的羊肚菌，选取菇柄长1～2厘米、菇帽长3～4厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌，采菇时将种菇整连根拔除，去掉多余泥土和杂质，用纸质采样袋密封，摊晾至含水量70%备用；

（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.1cm3的颗粒，称取200g，加水1000ml放入锅内煮沸20分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，灭菌方法为，将三角瓶直立放在医用高压锅内密封，通电加热，打开排气阀，待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时，表示锅内冷空气已排尽，关闭排气阀待温度上升至120℃时开始计时，维持40分钟后断电，灭菌完成后，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；

（3）菌种分离：将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中，超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开，利用接种铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内，18℃培养4天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝，7天后待菌丝长到直径1.5cm的菌落时即可提纯；

（4）接种：从无糖培养基中挑取5mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接30支，18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝，9天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：

（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成1.1cm的片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25℃，接种在接种箱或接种室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度16℃、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料，5天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：

（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动8～10次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养5天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量380瓶。

实施例3

一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）种菇选择：采集当地人工种植或野生的羊肚菌，选取菇柄长1～2厘米、菇帽长3～4厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌，采菇时将种菇整连根拔除，去掉多余泥土和杂质，用纸质采样袋密封，摊晾至含水量65%备用；

（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.0cm3的颗粒，称取200g，加水1000ml放入锅内煮沸19分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，灭菌方法为，将三角瓶直立放在医用高压锅内密封，通电加热，打开排气阀，待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时，表示锅内冷空气已排尽，关闭排气阀待温度上升至120℃时开始计时，维持40分钟后断电，灭菌完成后，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；

（3）菌种分离：将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中，超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开，利用接种铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内，17℃培养5天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝，8天后待菌丝长到直径1.8cm的菌落时即可提纯；

（4）接种：从无糖培养基中挑取5mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接29支，17℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝，9天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：

（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9cm的片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25℃，接种在接种箱或接种室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度17℃、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料，7天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：

（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动8～10次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养4天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量390瓶。

实施例4

一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（4）接种：从无糖培养基中挑取5mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接29支，18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝，10天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：

（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成1.1cm的片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25℃，接种在接种箱或接种室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度18℃、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料，5天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：

（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动8～10次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养5天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量385瓶。

实施例5

一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：

（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.1cm3的颗粒，称取200g，加水1000ml放入锅内煮沸18分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，灭菌方法为，将三角瓶直立放在医用高压锅内密封，通电加热，打开排气阀，待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时，表示锅内冷空气已排尽，关闭排气阀待温度上升至120℃时开始计时，维持40分钟后断电，灭菌完成后，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；

（3）菌种分离：将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中，超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开，利用接种铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内，16℃培养5天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝，7天后待菌丝长到直径2cm的菌落时即可提纯；

（4）接种：从无糖培养基中挑取4mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接30支，18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝，9天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：

（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9cm的片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25℃，接种在接种箱或接种室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度17℃、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料，6天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：

经发明人大量的试验和探索，最终得出上述羊肚菌菌种快速繁育方法，该方法在保证菌种品质、存活率和产量的前提下，大大缩短了羊肚菌菌种繁育周期，满足市场需求。

以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。