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黑腹果蝇替代铃木氏果蝇繁育毛角锤角细蜂的方法与流程

花匠小妙招
2025-01-01 19:52

本发明属于害虫天敌饲养技术，具体地说是黑腹果蝇替代铃木氏果蝇繁育毛角锤角细蜂的方法。

背景技术：

铃木氏果蝇(铃木氏果蝇)是软皮和薄皮水果如樱桃、蓝莓、黑莓、覆盆子和草莓等的主要害虫。大多数果蝇只攻击腐烂的果实，例如常见的物种黑腹果蝇。但与大多数其他果蝇不同，铃木氏果蝇雌性通过用锯齿状产卵器切割果实皮，在成熟的果实中产卵，然后幼虫以果肉为食，这使得水果没有了市场价值，降低了作物产量。铃木氏果蝇在全世界造成巨大的经济损失。

目前，对蓝莓园果蝇的控制方法主要有以下几种途径：首先，化学防治方法，包括配制含敌百虫等农药的诱杀剂、使用农药喷雾防治和喷烟防治等，如中国专利(公开号101213961b)提供了一种植物型烟剂及其制备方法。其次，物理防治的方法，通过一定孔径的尼龙网做成隔离网，再将该网在蓝莓成熟前罩在蓝莓树上，从而隔离了果蝇和蓝莓果实，一定孔径的尼龙网将果蝇害虫与作物隔离的方法也在蓝莓园果蝇防治上有一定应用，如中国专利(公开号2488279y)无公害及绿色农作物生产大棚。此外，农业防治的方法也在蓝莓园果蝇的防治上有着一定应用，如在蓝莓果实成熟前，将园内及周边植物残体及枯叶、灌木杂草等清除干净，阻断成虫迁飞取食的食物链，减少成虫基数。

上述技术从化学和物理等防治方法方面探讨了对蓝莓园果蝇的控制途径。但是化学农药手段存在对蓝莓果实的污染问题，可能在果实上形成农药残留；物理手段因条件和成本的局限，未能在山区蓝莓产地大量推广。

果蝇约有50种寄生性寄生物种，但是，大多数幼虫寄生蜂不能在铃木氏果蝇中发育，因为铃木氏果蝇体内具有很强的免疫应答反应。然而，蛹期寄生蜂毛角锤角细蜂可以在铃木氏果蝇中成功发育。毛角锤角细蜂是一种其寄主范围在已知果蝇内受限的内寄生性寄生蜂。有些报道已经证明在北美，欧洲和亚洲的田间样本中这种寄生蜂可以寄生铃木氏果蝇,在实验室实验中发现毛角锤角细蜂较其他蛹寄生蜂相比，对铃木氏果蝇的防治效果更佳。对天敌进行规模化繁育是利用天敌开展害虫生物防治的核心内容，繁殖效率的提高可极大地降低生产成本，促进天敌在害虫防治领域的运用。但在实验室饲养铃木氏果蝇难度较大，获得的蛹数量少，则考虑使用替代寄主天敌饲养。

使用替代寄主进行天敌饲养也是规模化繁育寄生蜂的重要技术手段。对天牛类害虫的替代寄主研究最多。如中国专利(申请号200810113232.2)介绍了使用人工替代寄主繁殖粒肩天牛花绒寄甲及防治锈色粒肩天牛的技术；中国专利(申请号200810114181.5)提出使用替代寄主繁殖花斑花绒寄甲及应用于防治松褐天牛的技术；中国专利(申请号200810116317.6)提出使用替代寄主繁殖星天牛花绒寄甲及防治光肩星天牛的技术；中国专利(申请号200810222846.4)提出使用替代寄主繁殖白条天牛花绒寄甲用于防治云斑天牛的技术；中国专利(申请号201010134765.6)提出使用壁蜂的老熟幼虫或蛹作为替代寄主，繁殖肿腿蜂用于防治天牛等蛀干害虫的技术；中国专利(申请号201110191705.2)提出使用甘蓝蚜作为替代寄主，替代烟蚜繁殖烟蚜茧蜂防治烟草害虫的技术；中国专利(申请号201210000679.5)提出使用蚱蝉的剖腹卵作为替代寄主，繁殖大蛾卵跳小蜂这种舞毒蛾的卵寄生蜂；中国专利(申请号02159588.7)提出使用赤松毛虫、油松毛虫等作为替代寄主，繁殖白蛾周氏啮小蜂这种美国白蛾的寄生蜂。

但是，由于目前没有公开代替铃木氏果蝇繁育毛角锤角细蜂的方法。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供黑腹果蝇替代铃木氏果蝇繁育毛角锤角细蜂的方法，克服在实验室难以获得大量的铃木氏果蝇蛹来扩繁毛角锤角细蜂的问题，通过本发明的方法获得大量黑腹果蝇蛹，用黑腹果蝇替代铃木氏果蝇人工繁育毛角锤角细蜂。

本发明具体技术方案如下：

黑腹果蝇替代铃木氏果蝇繁育毛角锤角细蜂的方法，包括以下步骤：

1)黑腹果蝇蛹的获得；

2)利用黑腹果蝇蛹接种毛角锤角细蜂，繁育毛角锤角细蜂。

步骤1)黑腹果蝇蛹的获得包括以下步骤：

1-1)、在养蝇笼内饲养黑腹果蝇成蝇，将盛有培养基的开口容器置于养蝇笼中，24h后取出，开口容器中有黑腹果蝇卵；

1-2)、在步骤1-1)取出的开口容器的内壁围绕一圈塑料，再饲养至幼虫在塑料内壁上化蛹。

步骤1-1)中所述养蝇笼：用100目尼龙网制作边长为55×55×55cm的立方体养蝇笼主体，养蝇笼侧面开一个直径为15cm的圆孔，圆孔处紧密连接一个相应直径长50-60cm的尼龙网套筒,尼龙网套筒边缘与圆孔边缘缝制在一起。连接的套筒方便养蝇饲料取放。

步骤1-1)中所述养蝇笼内放置1000-1200只黑腹果蝇成蝇。

步骤1-1)中所述培养基既作为饲料供黑腹果蝇食用，同时黑腹果蝇产卵在培养基中。

步骤1-1)中盛有培养基的开口容器放入养蝇笼后每24h更换一次，不断获得黑腹果蝇卵。

步骤1-1)中所述培养基制备方法为：准备水2000ml、糖220g、玉米粉200g、琼脂20g和酵母粉50g，将2000ml的水加热至50℃左右，然后依次加入220g糖，200g玉米粉，20g琼脂，搅拌均匀，加热至沸腾后煮5min，再倒入容器中冷却至40℃，然后再加入50g酵母粉搅拌均匀，室温下发酵1h后放入4℃冰箱保存。

步骤1-1)中每个开口容器盛放150ml培养基。所述开口容器优选为内径10厘米的玻璃培养皿。

进一步的，步骤1-1)中，每个养蝇笼内放置上述4个盛有黑腹果蝇培养基的培养皿。

进一步的，步骤1-2)中，在步骤1-1)取出的有黑腹果蝇卵的开口容器的内壁围绕一圈塑料，塑料首尾相接处用透明胶固定。

进一步的，步骤1-2)中，塑料围绕开口容器的内壁一圈形成中空的立体结构，其高度高于开口容器的高度，高度优选为25cm。立体结构可以为柱状、盒状等。经过饲养，黑腹果蝇卵生长为幼虫，幼虫在化蛹前会爬出培养基，在塑料形成的中空的立体结构内壁上化蛹。

进一步的，步骤1-2)中，所述塑料优选为pet塑料。

进一步的，步骤1-2)中塑料顶端开口处用带孔的保鲜膜封住。封保鲜膜的目的是为了防止果蝇幼虫从塑料顶部爬出。同时，保鲜膜带孔为了透气，保鲜膜孔直径小于黑腹果蝇幼虫直径，保证幼虫黑腹果蝇不能通过。

步骤1-2)中所述饲养条件为：温度20-28℃，光照强度为2000lux，光照时间与黑暗时间的比例为14:10，相对湿度为50-60％。在此条件下饲养5天，黑腹果蝇卵生长为幼虫，幼虫再化蛹。

进一步的，经过步骤1-2)化蛹后，将附着有黑腹果蝇蛹的塑料取出，置于4℃冰箱中保存。既方便保存，又节省空间。需要繁育毛角锤角细蜂时，从冰箱中取出用于毛角锤角细蜂寄生。

或者，经过步骤1-2)化蛹后，将附着有黑腹果蝇蛹的塑料取出，在黑腹果蝇蛹附着处喷水，再使用软毛刷扫下黑腹果蝇蛹，即可获得黑腹果蝇蛹。

进一步的，喷水后1min后再使用软毛刷扫下黑腹果蝇蛹。

进一步的，扫下的黑腹果蝇蛹置于吸水纸上，吸干黑腹果蝇蛹表面水分后，收集黑腹果蝇蛹。

进一步的，将附着有黑腹果蝇蛹的塑料取出后展开，方便收集黑腹果蝇蛹。

步骤2)具体为：

2-1)、将收集的黑腹果蝇蛹接种毛角锤角细蜂；

2-2)、收集毛角锤角细蜂寄生的黑腹果蝇蛹,培养至毛角锤角细蜂羽化，即可。

步骤2-1)中按照数量比毛角锤角细蜂：黑腹果蝇蛹＝1:10接种。

步骤2-1)在温度20-28℃，光照强度为2000lux，光照时间与黑暗时间的比例为14:10，相对湿度为50-60％的条件下，黑腹果蝇蛹接种毛角锤角细蜂，饲养24h；

饲养24h后收集毛角锤角细蜂寄生的黑腹果蝇蛹。

优选的，步骤2-1)中使用2-3日龄黑腹果蝇蛹接种。

步骤2-2)中所述培养条件为：温度20-28℃，光照强度为2000lux，光照时间与黑暗时间的比例为14:10，相对湿度为50-60％。

步骤2)中接种、培养方法按照现有寄生蜂接种、培养的方法。

毛角锤角细蜂的寄主类型有多种蝇类的蝇蛹，主要是铃木氏果蝇蛹，但是铃木氏果蝇养殖更繁琐，其蝇蛹更难获得。

而且，铃木氏果蝇的培养基配方为：水2800ml，糖200g，玉米粉125g，琼脂45g，酵母粉70g，丙酸17.7ml，乙醇31.7ml；而黑腹果蝇的培养基为：水2000ml，糖220g，玉米粉200g，琼脂20g，酵母粉50g，相比之下，养殖黑腹果蝇培养基相对较为简单，繁殖黑腹果蝇更为经济，成本更低。而且，铃木氏果蝇在饲养的过程中特别容易被其他果蝇污染，所以在饲养的过程中需要单独的空间，且需要2-3个蝇笼套笼叠加使用，饲养过程复杂，成本高。但黑腹果蝇可以在比较复杂的环境中生长繁殖，且不容易被污染，所以，黑腹果蝇的养殖更简单。另外，铃木氏果蝇是在固态培养基里面化蛹，如若收集培养基，需要用镊子在培养基中一个一个挑取，经清洗，干燥后才能被收集使用，不能大批量繁殖毛角锤角细蜂。但黑腹果蝇是在塑料壁上化蛹，方便收集，且蛹的数量多，可大量繁育毛角锤角细蜂。

与现有技术相比，本发明采用黑腹果蝇替代铃木氏果蝇繁育毛角锤角细蜂的方法，黑腹果蝇蛹比铃木氏果蝇相蛹容易获得，而且，饲养成本低，更简单。黑腹果蝇替代铃木氏果蝇繁育毛角锤角细蜂，寄生蜂后代羽化率更高，内禀增长率更高，寿命更长。

附图说明

图1为本发明获得黑腹果蝇蛹的结构，1—培养皿，2—pet塑料片围绕培养皿的内壁形成中空圆柱体，3—带孔的保鲜膜。

具体实施方式

实施例1

黑腹果蝇替代铃木氏果蝇繁育毛角锤角细蜂的方法，包括以下步骤：

1)黑腹果蝇蛹的获得；

1-1)、用100目尼龙网制作边长为55×55×55cm的立方体养蝇笼主体，养蝇笼主体侧面开一个直径为15cm的圆孔，圆孔处紧密连接一个直径为15cm长50cm的尼龙网套筒,尼龙网套筒边缘与圆孔边缘缝制在一起，构成养蝇笼，连接的套筒方便养蝇饲料取放，防止黑腹果蝇逃走，在养蝇笼主体内放置4个内径20cm的玻璃培养皿，在每个培养皿中放置150ml黑腹果蝇培养基，在养蝇笼中放入1000只黑腹果蝇成蝇。放置的培养基供黑腹果蝇取食，而且，黑腹果蝇在培养基中产卵，每24h后将有黑腹果蝇卵的培养皿取出，同时更换新的盛有培养基的培养皿；

所述培养基的制备方法：准备水2000ml、糖220g、玉米粉200g、琼脂20g和酵母粉50g，利用电磁炉和锅将2000ml的水加热至50℃左右，然后依次加入220g糖，200g玉米粉，20g琼脂，搅拌均匀，加热至沸腾后煮5min，后倒入容器中冷却至40℃，再加入50g酵母粉搅拌均匀，室温下发酵1h后放入4℃冰箱保存。

1-2)、取一块长62cm、宽25厘米的pet塑料片，将此pet塑料片紧贴着步骤1-1)取出的有黑腹果蝇卵的培养皿1的内壁围绕一圈，首尾处用透明胶固定，pet塑料片围绕培养皿的内壁形成中空圆柱体2，高度为25cm，在此pet塑料中空圆柱体的顶端开口处用带孔的保鲜膜3封住，封保鲜膜的目的是为了防止果蝇幼虫从pet塑料顶部爬出。同时，保鲜膜带孔为了透气，为卵的生长提供有利的环境，同时，保鲜膜孔直径小于黑腹果蝇幼虫直径，保证幼虫黑腹果蝇不能通过。在温度20-28℃，光照强度为2000lux，光照时间与黑暗时间的比例为14:10，相对湿度为50-60％的条件下饲养5天，在这个过程中，黑腹果蝇卵生长为幼虫，幼虫在化蛹前会爬出培养基，在pet塑料形成的中空圆柱体内壁上化蛹。

1-3)将附着有黑腹果蝇蛹的pet塑料取出，撕掉用于固定的透明胶，展开pet塑料，附着有黑腹果蝇蛹的一面朝上，在黑腹果蝇蛹附着处喷水，1min后再使用软毛刷扫下黑腹果蝇蛹，扫下的黑腹果蝇蛹置于吸水纸上，吸干黑腹果蝇蛹表面水分后，收集黑腹果蝇蛹。

2)繁育毛角锤角细蜂：

2-1)、在温度20-28℃，光照强度为2000lux，光照时间与黑暗时间的比例为14:10，相对湿度为50-60％的条件下，将2日龄黑腹果蝇蛹接种毛角锤角细蜂，数量比毛角锤角细蜂：黑腹果蝇蛹＝1:10；毛角锤角细蜂饲以10％的蜂蜜水；

2-2)、收集毛角锤角细蜂寄生的黑腹果蝇蛹,在温度20-28℃，光照强度为2000lux，光照时间与黑暗时间的比例为14:10，相对湿度为50-60％的条件下培养至毛角锤角细蜂羽化，即可。

探究不同来源的毛角锤角细蜂在利用不同寄主时的种群生命表：

实验一、按照实施例1方法利用黑腹果蝇蛹获得的羽化的毛角锤角细蜂再利用铃木氏果蝇蛹及黑腹果蝇蛹繁育的实验：

1)、实施例1获得的黑腹果蝇蛹寄生的毛角锤角细蜂，在毛角锤角细蜂出蜂前，将被寄生的黑腹果蝇蛹单头分装于50μl的透明薄壁管中，薄壁管表面使用昆虫针扎小孔，以保持透气性，待毛角锤角细蜂羽化；

2)羽化24h内的毛角锤角细蜂配对:将单个羽化24h内的雄性毛角锤角细蜂和单个羽化24h内的雌性毛角锤角细蜂一同放置在倒扣的透明玻璃杯内，杯内放置30头铃木氏果蝇蛹，同时给予蜂蜜水喂食；铃木氏果蝇蛹放置24h后，取出放置的30头铃木氏果蝇蛹，更换新的30头铃木氏果蝇蛹，每24h更换1次。取出的铃木氏果蝇蛹置于冻存管内，上述实验重复35组。统计出蝇数，临近出蜂时间时每天观察出蜂情况，统计每天的出蜂数记录雌蜂和雄蜂的数量；统计后将羽化的寄生蜂全部吸出留备使用。

3)将步骤2)中的杯内放置的铃木氏果蝇蛹替换为黑腹果蝇蛹(即本发明的利用黑腹果蝇蛹为寄主的方法)，其他实验过程、参数同步骤2)。

4)、步骤2)和步骤3)从玻璃杯内取出的果蝇蛹不再有小蜂羽化时，解剖既未出小蜂也未出蝇的蝇蛹观察。

实验二、按照现有技术利用铃木氏果蝇蛹获得的羽化的毛角锤角细蜂再利用铃木氏果蝇蛹及黑腹果蝇蛹繁育的实验：

1)、按照现有技术利用铃木氏果蝇蛹寄生的毛角锤角细蜂，在毛角锤角细蜂出蜂前，将被寄生的铃木氏果蝇蛹单头分装于50μl的透明薄壁管中，薄壁管表面使用昆虫针扎小孔，以保持透气性，待毛角锤角细蜂羽化；

2)羽化24h内的毛角锤角细蜂配对，将单个羽化24h内的雄性毛角锤角细蜂和单个个羽化24h内的雌性毛角锤角细蜂一同放置在倒扣的透明玻璃杯内，杯内放置30头铃木氏果蝇蛹，同时给予蜂蜜水喂食；铃木氏果蝇蛹放置24h后，取出放置的30头铃木氏果蝇蛹，更换新的30头铃木氏果蝇蛹，每24h更换1次。取出的铃木氏果蝇蛹置于冻存管内，上述实验重复35组。统计出蝇数，临近出蜂时间时每天观察出蜂情况，统计每天的出蜂数记录雌蜂和雄蜂的数量；统计后将羽化的寄生蜂全部吸出留备使用。

3)将步骤2)中的杯内放置的铃木氏果蝇蛹替换为黑腹果蝇蛹(即本发明的利用黑腹果蝇蛹为寄主的方法)，其他实验过程、参数同步骤2)。

4)、步骤2)和步骤3)从玻璃杯内取出的果蝇蛹不再有小蜂羽化时，解剖既未出小蜂也未出蝇的蝇蛹观察。

实验结果：

实验一中，利用本发明实施例1方法获得的寄生黑腹果蝇蛹获得的羽化的毛角锤角细蜂，再寄生黑腹果蝇蛹(即本发明方法)，羽化获得的毛角锤角细蜂雌性平均寿命为20.00±10.83(n＝28),雄性平均寿命为34.54±11.01(n＝28)；利用本发明是实施例1方法寄生黑腹果蝇蛹获得的羽化的毛角锤角细蜂再寄生铃木氏果蝇，羽化获得的毛角锤角细蜂雌性平均寿命为11±5.03(n＝26),雄性平均寿命为11.72±7.67(n＝26)(分别做了35组，有效数据26组),结果表明，同样按照本发明方法获得的毛角锤角细蜂再寄生黑腹果蝇蛹(即本发明方法)相比于再寄生铃木氏果蝇获得的毛角锤角细蜂雌性寿命明显延长(t52＝3.88，p＜0.01)，雄性寿命也明显延长(t52＝8.80，p＜0.01)。

实验二中，按照现有技术利用铃木氏果蝇蛹获得的羽化的毛角锤角细蜂，再利用黑腹果蝇蛹寄生(即本发明方法)，获得的毛角锤角细蜂雌性平均寿命为28.92±11.36(n＝26),雄性平均寿命为39.88±11.98(n＝26)；按照现有技术利用铃木氏果蝇蛹获得的羽化的毛角锤角细蜂，再利用铃木氏果蝇蛹寄生繁育的毛角锤角细蜂雌性平均寿命为20.57±10.44(n＝32),雄性平均寿命为22.97±16.34(n＝32)。结果表明，同样按照来源的毛角锤角细蜂再寄生黑腹果蝇蛹(即本发明方法)相比于再寄生铃木氏果蝇获得的蝇蛹金小蜂雌性寿命明显延长(t56＝2.92，p＜0.01)，雄性寿命也明显延长(t56＝4.40，p＜0.01)。

实验一中，利用本发明方法获得的毛角锤角细蜂，其单个雌蜂寄生黑腹果蝇蛹繁育的后代雌蜂为48.46±16.87头；利用本发明方法获得的毛角锤角细蜂，其单个雌蜂寄生铃木氏果蝇蛹繁育的后代雌蜂为25.96±13.08头。

实验二中，按照现有技术利用铃木氏果蝇蛹获得毛角锤角细蜂，其单个雌蜂寄生黑腹果蝇蛹繁育的后代雌蜂为42.92±12.30头；按照现有技术利用铃木氏果蝇蛹获得毛角锤角细蜂，其单个雌蜂寄生铃木氏果蝇蛹繁育的后代雌蜂为13.56±7.68头；两个实验都证明用本发明方法(以黑腹果蝇为寄主)繁育的毛角锤角细蜂后代雌蜂数显著较多(实验一中t52＝5.52，p＜0.01；实验二中t56＝11.11，p＜0.01)。因此，本发明以黑腹果蝇为寄主的方法繁殖的毛角锤角细蜂对铃木氏果蝇具有更强的控制效果。

比较实验一和实验二可以得到，无论是以铃木氏果蝇为寄主还是以黑腹果蝇蛹为寄主获得的毛角锤角细蜂，均可以在繁殖时，以黑腹果蝇蛹为寄主进行繁殖。

综上所述，采用本发明黑腹果蝇生物防治蓝莓园铃木氏果蝇的方法,与使用铃木氏果蝇蛹繁殖的毛角锤角细蜂相比,使用黑腹果蝇蛹获得的毛角锤角细蜂在对铃木氏果蝇的控制上,效率更高。使用铃木氏果蝇蛹羽化的毛角锤角细蜂分别寄生铃木氏果蝇蛹和黑腹果蝇蛹，记录生命表数据；使用黑腹果蝇羽化的毛角锤角细蜂分别寄生铃木氏果蝇蛹和黑腹果蝇蛹，记录生命表数据，通过比较四个生命表的数据，获得黑腹果蝇繁育的毛角锤角细蜂平均生命期望、净生殖率、内禀增长率都大于铃木氏果蝇繁育的毛角锤角细蜂。毛角锤角细蜂寄生黑腹果蝇的寄生率极显著地高于毛角锤角细蜂寄生铃木氏果蝇的寄生率。