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一种基于RPA

花匠小妙招
2025-01-03 03:05

一种基于RPA-侧流层析检测麦瘟菌的试剂盒及方法

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种基于rpa-侧流层析检测麦瘟菌的试剂盒及方法。

背景技术：

1、麦瘟菌的检测主要通过分子标记mot3进行pcr扩增鉴定，但是该方法需要依赖实验室昂贵的pcr仪进行扩增，一般用时为1小时左右，后续还需要用到琼脂糖凝、电泳仪以及笨重的核酸成像仪实现结果的可视化。

2、另外，还有crisipr/cas 12a介导的麦瘟菌的田间检测。该方法通过crisipr/cas12a蛋白特异识别目标序列后，激活该蛋白切割单链dna的功能。人工合成单链dna，通过是否能扩增出人工合成的单链dna来判断目标序列的存在。但该方法中crisipr/cas12a蛋白的活化还需要grna的参与，grna是一种在环境中极易降解的物质，且步骤较多，虽然可以实现目标序列的精确检测，但对于田间检测的大规模运用仍然存在局限性。

技术实现思路

1、本发明所要解决的技术问题为：提供一种基于rpa-侧流层析快速检测麦瘟菌的引物和探针组合、试剂盒及方法。

2、本发明的技术方案为：一种基于rpa-侧流层析检测麦瘟菌的引物和探针组合，所述引物和探针的序列如下：

3、上游引物p98-3f：taacgggcagtcgctaatggtgtaggtactt；

4、下游引物b-p98-3r：5'(biotin)cttgattctcttgggctcctggcatttcgg；

5、探针f-p98-1drp：5'(fam)tgcctcactttaccgatttgctggtcgaa(thf)catgtggcagtgtcctc。

6、一种基于rpa-侧流层析检测麦瘟菌的试剂盒，该试剂盒包含上述所述的引物和探针组合。

7、进一步地，所述试剂盒还包括rpa扩增的a buffer和b buffer。

8、进一步地，所述试剂盒还包括侧流层析试纸。

9、一种基于rpa-侧流层析检测麦瘟菌的方法，包括如下步骤：

10、(1)提取待测样本基因组dna；

11、(2)以步骤(1)得到的基因组dna为模板，以上述所述的引物和探针组合进行rpa扩增；

12、(3)将扩增产物通过侧流层析试纸进行检测。

13、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

14、本发明可实现麦瘟菌和稻瘟菌田间的快速检测区分。实验室条件下，测定到该技术检测的阈值为10-4ng/μl，在麦瘟菌接种后的第2天就能鉴定到麦瘟菌，本发明的方法特异性好，灵敏度高。

技术特征：

1.一种基于rpa-侧流层析检测麦瘟菌的引物和探针组合，其特征在于，所述引物和探针的序列如下：

2.一种基于rpa-侧流层析检测麦瘟菌的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包含权利要求1所述的引物和探针组合。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括rpa扩增的abuffer和b buffer。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括侧流层析试纸。

5.一种基于rpa-侧流层析检测麦瘟菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本发明公开了一种基于RPA‑侧流层析检测麦瘟菌的试剂盒及方法，包括如下步骤：(1)提取待测样本基因组DNA；(2)以步骤(1)得到的基因组DNA为模板，以本发明的引物和探针组合进行RPA扩增；(3)将扩增产物通过侧流层析试纸进行检测。该发明技术可实现麦瘟菌田间的快速检测。实验室条件下，测定到该技术检测的阈值为10<supgt;‑4</supgt;ng/μL(以麦瘟菌菌丝DNA浓度计)，在麦瘟菌接种后的第2天就能鉴定到麦瘟菌。

技术研发人员：康厚祥,彭烨,托法扎尔.伊斯兰
受保护的技术使用者：中国农业科学院植物保护研究所
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15