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北美兰云杉体胚发生关键技术优化及体胚分化阶段生理机制研究

北美兰云杉(Picea pungens var.glauca)原产自北美,树形优美,针叶终年呈现美丽的蓝色,是园林中珍稀的彩叶树种,具有极高的观赏价值。近年来,北美兰云杉种苗市场需求量逐渐增大,但是北美兰云杉种子繁殖存在子代性状不稳定等问题,使育苗质量受到限制,不利于规模化生产。体细胞胚胎发生技术是一种高效的无性繁殖技术,利用同一种子产生大量胚性无性系,在短时间内增殖出大量基因型相同的植株,保证了植株遗传性状一致,对于北美兰云杉扩繁具有重要的研究价值。本研究以北美兰云杉成熟合子胚作为外植体,对北美兰云杉体细胞胚胎发生环节中的关键技术进行优化,包括EC诱导、EC增殖与保持、体胚分化、体胚萌发与植株再生以及EC超低温保存技术的研究;并且以4个具有不同体胚分化能力的细胞系为试验材料进行体胚成熟试验,从细胞学形态结构、储藏物质、抗氧化酶活性、内源激素水平层面,揭示具有不同体胚发生能力的细胞系在体胚发生过程中的动态生理变化及差异,找到引起愈伤组织体胚发生能力差异的关键因素。主要研究结果如下:(1)在北美兰云杉EC诱导培养过程中,最佳2,4-D浓度为4.0 mg/L,最佳6-BA浓度为2.0 mg/L,最佳蔗糖浓度为10 g/L,EC诱导率最高57.16%。(2)在北美兰云杉EC增殖与保持过程中,最佳2,4-D浓度范围为1.0-3.0 mg/L,最佳6-BA浓度范围为0.5-1.0 mg/L,最佳蔗糖浓度为10 g/L,增殖阶段的培养条件对愈伤组织细胞学结构以及体胚发育和成熟有影响,增殖率最佳的培养条件不一定能够提高体胚发生产量,需要综合考虑。(3)在北美兰云杉体胚分化培养过程中,最佳基本培养基为DCR培养基,最佳ABA浓度为10 mg/L,最佳碳源及浓度为30 g/L蔗糖,最佳Gelrite浓度4-6 g/L,最佳细胞密度50-80 mg每皿。(4)在北美兰云杉EC超低温保存过... (共95页)

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所属分类:花卉
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