基因替换
基因替换指，根据研究需要，将小鼠的基因替换为其它物种的基因。可以将基因的部分功能区，或者全基因进行替换。1 kb以下的小片段替换，可以采用CRISPR/Cas9策略。对于大片段的基因替换，需要使用ES，或者EPS制备策略才能成功。
图1. 制作基因替换小鼠示意图
1. 技术流程：
打靶载体设计→ 载体构建→ 显微注射(EPS打靶)→ 小鼠鉴定
2. 技术优势：
-CRISPR用于小片段的基因替换。
-ES/EPS用于大片段基因替换。
3. 成功案例：
案例一：C57和BALb/c背景小鼠PD1免疫检查点人源化小鼠的制备
图2. hPD-1小鼠制作策略 蓝框：小鼠的序列；绿框：人的序列
图3. hPD-1小鼠的药效评价
阳性药物Keytruda在人源化PD-1小鼠上表现出明显的抑瘤效果，而且不存在性别差异（雌性和雄性PD-1人源化小鼠），均为理想的体内药效试验模型。
案例二：hLAG3免疫检查点人源化小鼠的制备
图4. hLAG3小鼠hLAG3基因替换策略
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