* * 2. 培养 (1)培养基的选择: MS+3%蔗糖+0.7%琼脂+激素 (促进腋芽增殖6-BA﹥Kt和Ze ) (2)培养条件: 保持25℃左右,给予充分的光照和光期 第29页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * (3)继代培养: 途径一:促进腋芽的快速生长 优点:不会产生变异,方法简便,每年从一个芽 可增殖10万株以上 途径二:诱导形成大量不定芽。 优点:产生变异。 继代增殖过程注意选用培养基和生长调节剂 第30页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * (4)生根培养 目的:使再生的大量试管苗形成根系,获得完整的植株。 培养基选择:1/2,1/3或1/4的MS,B5培养基或White培养基 附加生长素(浓度NAA0.1-1.0mg/L,IBA和IAA可稍高)而降低或除去细胞分裂素。 最好添加0.3%活性炭,以促进生根 第31页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * 3.移植 移植是一个由异养转变为自养的过程。 试管苗→→炼苗→→取苗→→洗净琼脂→→小心移栽→→苗期管理(初期湿度要大,基质通气湿润,保湿保温) 第32页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * (一)定义: 离体叶培养指包括叶原基、叶柄、叶鞘、叶片、子叶在内的叶组织的无菌培养。 它大多经脱分化形成愈伤组织,再由愈伤组织分化出茎和根。 其中叶片培养是一个典型的代表。 四、离体叶的培养 第33页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * (二)意义: 1. 是繁殖稀有名贵品种的有效手段; 2. 可用于研究形态建成、光合作用、叶绿素形成等理论问题。 第34页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * (三)叶片的离体培养方法 发育方式:叶片培养再生成完整植株有两种方式: ① 是直接诱导形成芽和根→→完整植株; ② 是先诱导形成愈伤组织,再经愈伤组织分化形成芽和根→→完整植株。 其中,以第二种方式最为常见。 第35页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * 叶片离体培养发育方式(成苗途径) 叶原基 叶 鞘 叶 片 子 叶 叶 柄 愈伤组织 茎和根 试管苗 不定芽 第36页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * 1. 材料选择及灭菌 取植物的幼嫩叶片,切割成适当大小(2—3cm),在流水中冲洗干净。再用70%酒精浸泡约10s →→饱和漂白粉液中浸3-15min,或在0.1%升汞中浸3-5min →→无菌水冲洗数次→→无菌的干滤纸上吸干水分→→接种。 注:细嫩与成熟叶片消毒时间不同 第37页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * 2.接种 外植体大小:0.5cm2 薄片(叶柄、子叶) 上表皮朝上接种培养基。最好带叶脉,注意极性 第38页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * 3.培养 (1)培养基: MS、B5、White 、N6;蔗糖3%; 2.4-D利于愈伤组织形成,NAA抑制芽形成,利于根发生,KT、6-BA利于芽形成。 愈伤组织诱导:BA 1-3mg/L,NAA 0.25-1mg/L; 分化培养:CTK 2 mg/L; 生根培养:NAA 0.5-1.0 mg/L 第39页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * (2)培养过程: 培养约2周至4周→→形成愈伤组织→→再分化培养基上(附加6-BA 2mg/L )进行分化培养→→约10d左右,愈伤组织开始转绿出现绿色芽点→→发育成无根苗→→生根培养基(附加 NAA0.5-l mg/L ) →→发育形成完整植株。 第40页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * (3)培养条件: 温度:25±2℃ 光照时间:10-12h, 光照强度:1500-3000 Lx 。 第41页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * 叶的培养比胚,茎尖和茎段培养难度大。 首先要选用易培养成功的叶组织,如幼叶比成熟叶易培养,子叶比叶片易培养。 其次要添加适当的生长素和细胞分裂素,保证利于叶组织的脱分化和再分化。 第42页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * 第二节 生殖器官的培养 一、花器官的培养 二、种子的培养 三、胚胎的培养 四、胚珠培养 五、子房培养 六、胚乳培养 第43页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * 一、花器官的培养 第44页,共81页,编辑于2022年,星期一 * * 1. 定义: 花器官培养指整个花器及其
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