科学网—[转载]土壤过氧化氢酶（S
一、产品简介：
土壤过氧化氢酶（S-CAT）是土壤微生物代谢的重要酶类，因能降低土壤中过度累积的过氧化氢对植物根系的危害，所以在H2O2清除系统中具有重要作用。
H2O2在240nm下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可反应S-CAT活性的高低。
二、试剂盒组分与配制：
试剂名称
规格
保存要求
备注
试剂一
液体15mL×1瓶
4℃避光保存
试剂二
液体1mL×1支
4℃保存
如出现结晶析出，60℃-90℃水浴溶解后使用
试剂三
液体1.5mL×2支
4℃保存
三、需自备的仪器和用品：
酶标仪、96孔板（UV板）、台式离心机、恒温水浴锅/培养箱、研钵、天平、可调式移液器、30-50目筛和蒸馏水。
四、操作步骤：
建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！
1、预实验样本制备
新鲜土样自然风干或37℃烘箱风干，过30-50目筛。
【注】：土壤风干，减少土壤中水分对于实验的干扰；
2、预实验上机操作：
① 酶标仪预热30min以上，调节波长至240nm。
② 操作表：
试剂名称（μL）
测定管
无基质管
无土管
土样(g)
0.03
0.03
-
试剂一
260
-
260
蒸馏水
-
260
-
充分混匀，室温震荡培养20min
试剂二
10
10
10
混匀，8000g常温离心5min，取上清液于1.5mL EP管中待测
试剂三
30
30
30
充分混匀，于240nm处读取吸光值A，分别记为A测定、A无基质、A无土。（注：每个样本需做一个无基质管，无土管只需做1-2次）
4、正式实验：
① 确定好最适实验条件后，正式实验样本制备同预实验样本制备；
② 正式实验按照预实验上机操作步骤进行（空白管预实验已做，正式实验可选做）。
五、结果计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下:
按土壤质量计算：
单位的定义：每天每g风干土样催化1mmol H2O2降解定义为一个酶活力单位(U)。
S-CAT（U/g土样）=[(A无土-A测定+A无基质)×V ÷（ε×d）×103]÷W÷T
=16.5×（A无土-A测定+A无基质）
V：反应总体积，3×10-4L； ε：过氧化氢摩尔消光系数，43.6L/moL/cm；
d：比色皿光径，1cm T：反应时间，20min=1/72d；
W：土壤样本实际取样量，0.03g。
b.用 96 孔板测定的计算公式如下:
按土壤质量计算：
单位的定义：每天每g风干土样催化1mmol H2O2降解定义为一个酶活力单位(U)。
S-CAT（U/g土样）=[(A无土-A测定+A无基质)×V ÷（ε×d）×103]÷W÷T
=33×（A无土-A测定+A无基质）
V：反应总体积，3×10-4L； ε：过氧化氢摩尔消光系数，43.6L/moL/cm；
d：96孔板光径，0.5cm； T：反应时间，20min=1/72d；
W：土壤样本实际取样量，0.03g。
注意事项：
如果吸取的上清仍有部分浑浊，可以在加入试剂三后统一再次进行离心。
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