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一种黄蜀葵花药材、提取物或制剂的薄层色谱检测方法与流程

花匠小妙招
2025-03-26 01:12

1.本发明属于药品质量控制技术领域，具体涉及一种黄蜀葵花药材、提取物或制剂的薄层色谱检测方法。

背景技术：

2.黄蜀葵[abelmoschusmanihot(l.)medicus]，为锦葵科秋葵属植物，始载于《嘉祐本草》，“春生苗叶，颇似蜀葵，而叶尖狭多刻缺，夏末开花浅黄色”。黄蜀葵分布广泛，资源丰富，《本草纲目》记载：“其花味甘、寒、滑、无毒，主治小便淋及催生，治诸恶疮脓水久不瘥者，作末敷之即愈，为疮家要药，消疽肿，浸油涂汤火伤”。研究表明，黄蜀葵花总黄酮主要包括以下10个黄酮醇及其苷类化合物：棉皮素
‑8‑0‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷，棉皮素
‑
3'
‑
o
‑
葡萄糖苷，杨梅素，杨梅素
‑
3'
‑
o
‑
葡萄糖苷，杨梅素
‑3‑0‑
葡萄糖苷，槲皮素，槲皮素
‑
3'
‑
o
‑
葡萄糖苷，异槲皮苷，金丝桃苷，槲皮素
‑3‑
洋槐糖苷。
[0003]
黄葵胶囊由黄蜀葵花提取制备而成，具有清利湿热，解毒消肿作用，用于治疗慢性肾炎，临床疗效显著。黄酮类成分是其主要活性成分，2020版《中国药典》和黄葵胶囊质量标准中仅对槲皮素一种成分进行鉴别。为了保证产品质量，建立一种适合黄蜀葵花药材、黄葵胶囊生产过程中的各工序提取物(包括黄蜀葵花提取液、一次浓缩液、二次浓缩液和干浸膏)及黄蜀葵花制剂中多种黄酮成分的快速鉴别和含量测定方法尤为重要。
[0004]
传统高效液相色谱具有灵敏度高、准确度高等优点，已成为控制中药质量的重要手段之一，但其缺点是仪器昂贵，检测时间长，所用有毒害的有机试剂量较多对环境带来一定影响。薄层色谱法是以涂布于支持板上的支持物作为固定相，以合适的溶剂为流动相，可以快速进行药物成分的定性和定量的一种层析分析技术。由于黄蜀葵花中黄酮类成分复杂，母核结构相似，层析分离难度较大。现有技术中，2020版《中国药典》一部收载的黄蜀葵花质量标准和黄葵胶囊质量标准仅对槲皮素进行了薄层色谱鉴别；张钰等在研究黄酮类化合物的薄层色谱鉴定中以同一薄层方法鉴定出二种黄酮类成分芦丁与槲皮素，但所检识成分少，且检视效果不佳；专利cn103487546b则公开了一种以芦丁、金丝桃苷、槲皮素为对照品或以芦丁、金丝桃苷为对照品，采用冰醋酸为展开剂，鉴别黄蜀葵花药材的方法，其检识成分也较少。
[0005]
因此，提供一种黄蜀葵花药材、提取物及制剂中多种黄酮成分的薄层色谱鉴别和定量方法具有重要的意义。

技术实现要素：

[0006]
为克服以上技术问题，本发明提供了一种黄蜀葵花药材、提取物或制剂中黄酮的薄层色谱检测方法，该方法简单易操作，能够得到准确的鉴别结果，重现性好，同时能够实现一次性检测多种黄酮成分的快速定性和定量分析。
[0007]
为实现以上目的，本发明提供的技术方案如下：
[0008]
一方面，本发明提供了一种黄蜀葵花药材、提取物或制剂的薄层色谱检测方法，以
甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇为展开剂，以聚酰胺为薄层色谱材料，进行黄蜀葵花药材的薄层色谱检测。
[0009]
具体地，所述的展开剂为体积比为6:2
‑
7:10
‑
60的甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇溶液，进一步为6:3
‑
6:12
‑
48，再进一步为6:3
‑
6:10
‑
38，优选为2:1:7。
[0010]
具体地，使用聚酰胺薄膜作为薄层板。
[0011]
具体地，使用三氯化铝试液作为显色剂，置于紫外光灯365nm下检视。
[0012]
具体地，所述的薄层色谱检测方法为：将黄蜀葵花药材、提取物或制剂的任一供试品溶液，对照品溶液分别点于同一薄层板上，以甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇为展开剂展开，取出，晾干，喷以显色剂，至斑点显色清晰，置于紫外光灯365nm下检视。
[0013]
进一步具体地，所述的供试品溶液为黄蜀葵花药材供试品溶液、提取物供试品溶液或制剂供试品溶液。
[0014]
进一步具体地，所述的供试品溶液的制备方法为：取黄蜀葵花药材的提取浸膏、提取物或制剂，按照料液比为1:1.5加水溶解，加乙酸乙酯提取，合并提取液，得到供试品溶液。
[0015]
进一步具体地，所述的黄蜀葵花药材供试品溶液的制备方法为：取黄蜀葵花药材采用水或有机溶剂提取，提取液浓缩得到的浸膏，经水溶解后，加乙酸乙酯提取1
‑
3次，合并提取液，处理成每毫升含有相当于0.08g药材供试品的乙酸乙酯溶液；所述提取物供试品溶液或制剂供试品溶液制备方法为：取提取物或制剂，加水溶解后，加乙酸乙酯提取1
‑
3次，合并提取液，处理成每毫升含有相当于0.08g药材供试品的提取物供试品溶液或制剂供试品溶液。
[0016]
进一步具体地，所述的黄蜀葵花提取物或制剂为黄蜀葵花药材在生产条件下制备。
[0017]
进一步具体地，所述的提取物包括在生产过程中的黄蜀葵花提取液、黄蜀葵花提取液初步浓缩得到的一次浓缩液、黄蜀葵花一次浓缩液进一步浓缩得到的二次浓缩液和干燥后得到的干浸膏。
[0018]
进一步具体地，所述的黄蜀葵花提取物的制备方法为：取黄蜀葵花药材，乙醇加热回流提取，得到提取液，滤过，滤液浓缩得一次浓缩液，冷藏除去油脂，二次浓缩得二次浓缩液，干燥得干浸膏。
[0019]
进一步具体地，所述的黄蜀葵花提取物的制备方法为：取药材黄蜀葵花，按料液比1:12
‑
20加入95％的乙醇，回流提取1
‑
3次，每次0.5
‑
1.5h，过滤，合并滤液，得到提取液，回收乙醇得一次浓缩液，浓缩滤液至比重1.10
‑
1.30，浓缩液冷藏静置，去除冷藏液的油层，再浓缩得到二次浓缩液，真空干燥即得干浸膏。
[0020]
进一步具体地，所述的黄蜀葵花药材、提取物或制剂含有黄酮类成分，所述的黄酮类成分为杨梅素、槲皮素、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、金丝桃苷、异槲皮苷、芦丁中的一种或多种，优选为芦丁、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素。
[0021]
进一步具体地，所述的黄蜀葵花制剂含有黄蜀葵花提取物，为颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液或其他药学上可接受的剂型中的任一种。
[0022]
进一步具体地，所述的对照品溶液的制备方法为：分别取芦丁、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素对照品，加乙醇溶液制成对照品浓度比为4
‑
5:1
‑
2:1.5
‑
2.5:0.5
‑
1.5的混合对照品溶液。
[0023]
进一步具体地，所述的混合对照品溶液中芦丁、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素的浓度比为4.5:1.5:2:1。
[0024]
进一步具体地，所述的乙醇溶液的浓度为50
‑
100％，优选为50
‑
95％，进一步优选为65
‑
75％。
[0025]
进一步具体地，所述的供试品溶液的点样量为1
‑
3μl，所述的混合对照品溶液的点样量为5
‑
15μl。
[0026]
进一步具体地，所述的供试品溶液的点样量为2μl，所述的混合对照品溶液的点样量为10μl。
[0027]
另一方面，本发明提供了一种含有芦丁、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素的组合物的薄层色谱检测方法，以甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇为展开剂，以聚酰胺为薄层色谱材料，进行薄层色谱检测。
[0028]
具体地，所述的展开剂甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇的体积比为6:2
‑
7:10
‑
60，进一步为6:3
‑
6:12
‑
48，再进一步为6:3
‑
6:10
‑
38，优选为2:1:7。
[0029]
具体地，所述的检测方法包括以下步骤：将所述组合物溶液，对照品溶液分别点于同一薄层板上，以甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇为展开剂展开，取出，晾干，喷以显色剂，至斑点显色清晰，置于紫外光灯365nm下检视。
[0030]
进一步具体地，所述的薄层板为聚酰胺薄膜，所述的显色剂为三氯化铝试液。
[0031]
进一步具体地，所述的对照品溶液的制备方法为：分别取芦丁、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素对照品，加乙醇溶液制成对照品浓度比为4
‑
5:1
‑
2:1.5
‑
2.5:0.5
‑
1.5的混合对照品溶液；所述的对照品溶液中芦丁、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素的浓度比为4.5:1.5:2:1；所述的乙醇溶液浓度为50
‑
100％，优选为50
‑
95％，进一步优选为65
‑
75％。
[0032]
进一步具体地，所述的组合物溶液的点样量为0.5
‑
6μl，优选为2μl；所述的混合对照品溶液的点样量为5
‑
15μl，优选为10μl。
[0033]
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0034]
本发明使黄蜀葵花药材提取物或制剂中4种黄酮类成分：芦丁、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素实现薄层色谱法分离，从而可实现一次性对黄蜀葵花药材、提取物和制剂中4种黄酮成分进行快速定性和定量分析，该方法简单易操作，能够得到准确的结果，重现性好。
附图说明
[0035]
图1为实施例1薄层色谱检视图，其中，1为混合对照品溶液，2为制剂供试品。
[0036]
图2为实施例2薄层色谱检视图，其中，1为混合对照品溶液，2为制剂供试品。
[0037]
图3为实施例3薄层色谱检视图，其中，1为混合对照品溶液，2为制剂供试品。
[0038]
图4为各对照品色谱图中定位检视图，其中，1为杨梅素，2为槲皮素，3为棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷，4为金丝桃苷，5为异槲皮苷，6为芦丁，7为混合对照品。
[0039]
图5为实施例4薄层色谱检视图，其中，条带1为混合对照溶液，其他条带依次为制剂供试品溶液0.5μl、1μl、2μl、3μl。
[0040]
图6为实施例5薄层色谱检视图，黄蜀葵花药材、各提取物供试品溶液检视图，其
中，从左到右的色谱点分别为：1.混合对照品、2.黄蜀葵花供试品、3.提取物(提取液)供试品、4.提取物(一次浓缩液)供试品、5.提取物(二次浓缩液)供试品、6.提取物(干浸膏)供试品。
[0041]
图7为实施例6薄层色谱检视图，其中，1为混合对照品溶液，2为制剂供试品。
[0042]
图8为对比例1薄层色谱检视图，其中，1.颗粒制剂供试品溶液。
具体实施方式
[0043]
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0044]
前处理步骤1黄蜀葵花药材、提取物和制剂供试品溶液制备
[0045]
1.1黄蜀葵花药材供试品溶液制备：
[0046]
取4g黄蜀葵花药材经75
‑
95％乙醇提取，提取液浓缩或者浓缩干燥，浓缩液或者干浸膏加水至10g搅拌混匀，加乙酸乙酯提取3次，乙酸乙酯加入比例为(3:1:1)，合并提取液，用乙酸乙酯定容至50ml量瓶中，作为黄蜀葵花药材供试品溶液。
[0047]
1.2提取物供试品溶液制备
[0048]
(1)黄蜀葵花提取物制备
[0049]
取药材黄蜀葵花4000g，用15倍(质量/体积比)95％的乙醇，回流提取2次，每次1h，过滤，合并滤液，得提取液；回收乙醇，得一次浓缩液；浓缩滤液至比重1.20，得二次浓缩液。二次浓缩液在0
‑
4℃静置24h，去除冷藏液的油层，浓缩后缓慢加入真空带式干燥机内，干燥，粉碎，装入洁净双层塑料袋中，即得黄蜀葵花提取物干浸膏。
[0050]
(2)提取物供试品溶液制备
[0051]
取上述步骤(1)制备的相当于4g黄蜀葵花药材的提取液、一次浓缩液、二次浓缩液和干浸膏，分别加入水至10g，加乙酸乙酯提取3次，乙酸乙酯加入比例为(3:1:1)，合并提取液，用乙酸乙酯定容至50ml量瓶中，作为黄蜀葵花各提取物的供试品溶液。
[0052]
1.3制剂供试品溶液制备
[0053]
(1)黄蜀葵花提取物颗粒剂的制备
[0054]
取上述1.2(1)制备得到的黄蜀葵花干浸膏，粉碎过80目筛，取500g提取物加入甘露醇550g、硬脂酸镁4g，干法制粒，制成颗粒，即得。
[0055]
(2)黄蜀葵花颗粒剂供试品溶液制备
[0056]
取相当于4g黄蜀葵花药材的黄蜀葵花颗粒制剂，制成10g的水溶液搅拌混匀，加乙酸乙酯提取3次(3:1:1)，合并提取液，用乙酸乙酯定容至50ml量瓶中，作为制剂供试品溶液。
[0057]
前处理步骤2对照品溶液制备
[0058]
2.1单个对照品溶液制备：分别取芦丁、金丝桃苷、异槲皮素、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素适量，各加70％乙醇适量制成各自对照品溶液(浓度分别为0.225mg/ml、0.570mg/ml、1.330mg/ml、0.877mg/ml、1.315mg/ml、1.080mg/ml)。
[0059]
2.2混合对照品溶液制备：分别取芦丁、金丝桃苷、异槲皮素、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡
萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素对照溶液品溶液适量，混合制成混合对照品溶液(浓度分别为88.906μg/ml、55.425μg/ml、81.790μg/ml、33.235μg/ml、36.088μg/ml、21.496μg/ml)。
[0060]
实施例1
[0061]
取前处理步骤1.3制备的黄蜀葵花颗粒制剂供试品溶液2μl，前处理步骤2.2制备的混合对照品溶液10μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇(2:1:7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝显色剂，至斑点显色清晰，置于紫外光灯365nm下检视。检测结果如图1所示，斑点清晰分离佳。
[0062]
实施例2
[0063]
取前处理步骤1.3制备的黄蜀葵花颗粒制剂供试品溶液2μl，前处理步骤2.2制备的混合对照品溶液10μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇(1:1:8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝显色剂，至斑点显色清晰，置于紫外光灯365nm下检视。检测结果如图2所示，斑点清晰分离较好。
[0064]
实施例3
[0065]
取前处理步骤1.3制备的黄蜀葵花颗粒制剂供试品溶液2μl，前处理步骤2.2制备的混合对照品溶液10μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇(3:2:5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝显色剂，至斑点显色清晰，置于紫外光灯365nm下检视。检测结果如图3所示，斑点清晰分离较好。
[0066]
实施例4不同点样量试验
[0067]
1.各对照品色谱图中定位
[0068]
分别取前处理步骤2制备的单个对照品溶液6μl及混合对照品溶液10μl点于聚酰胺薄膜上，置于展开缸中，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光(365nm)下检视。结果如图4所示。
[0069]
2.黄蜀葵花制剂供试品薄层鉴别
[0070]
取前处理步骤1.3制备的黄蜀葵花制剂供试品溶液0.5μl、1μl、2μl、3μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上；前处理步骤2.2制备的混合对照品溶液10μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇(2:1:7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视，检视结果如图5所示，斑点清晰，供试品溶液点样量0.5
‑
3μl斑点显示结果均良好，选择2μl作为最优点样量。
[0071]
实施例5黄蜀葵花药材提取物薄层鉴别
[0072]
取前处理步骤2.2制备的混合对照品溶液10μl和前处理步骤1.1和1.2制备的黄蜀葵花药材、提取物供试品溶液2μl点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯
‑
丙酮
‑
甲醇(2:1:7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。检视结果如图6所示。由检视结果可知，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，分别显示相同颜色的斑点。表明该方法检测结果全面、准确。
[0073]
实施例6黄蜀葵颗粒剂制剂薄层鉴别
[0074]
取前处理步骤1.3(1)制备的相当于4g黄蜀葵花药材的黄蜀葵颗粒剂，加水至10g搅拌混匀，加乙酸乙酯提取3次(30ml，10ml，10ml)，合并提取液，用乙酸乙酯定容至50ml量瓶中，作为供试品溶液。另分别取芦丁、棉皮素
‑8‑
o
‑
β
‑
d
‑
葡萄糖醛酸苷、杨梅素和槲皮素对照品适量，加70％乙醇制成每1ml分别含90μg、30μg、40μg、20μg的溶液，作为混合对照品溶
液。照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，分别吸取混合对照品溶液10验l和供试品溶液2μl点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯：丙酮：甲醇(2：1：7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中(如图7所示)，在与混合对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，与图6的任一供试品无实质差异。
[0075]
对比例1
[0076]
取前处理步骤1.3制备的黄蜀葵花颗粒剂供试品溶液2μl，点于聚酰胺薄膜上，以甲苯：丙酮：甲醇：甲酸(0.5：0.5：9：3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝显色剂，至斑点显色清晰，置于紫外光灯365nm下检视。检测结果如图8所示，斑点分离效果较差，芦丁的条带接近薄层板的上沿。
[0077]
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。