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一种羊肚菌菌种快速繁育方法.pdf

花匠小妙招
2025-04-10 05:56

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610750578.8 (22)申请日 2016.08.30 (71)申请人杨燕地址 638500 四川省成都市广安市广安区苏溪乡洞梁村4组16号 (72)发明人杨燕罗金洲郭建陈小敏 (74)专利代理机构成都行之专利代理事务所 (普通合伙) 51220 代理人谭新民 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称一种羊肚菌菌种快速繁育方法 (57)摘要本发明公开了一种羊肚菌菌种快速繁育方

2、法，该方法通过将传统的先生产原种再生产栽培种用于播种，改进为直接生产原种播种，去掉了原种扩繁为栽培种的环节，大大缩短了菌种制种时间，同时由于减少了种子繁殖代数，保证种子活性，其适应性和抗逆性更强，该方法能够显著缩短羊肚菌菌种的繁育周期，并且能有效提高羊肚菌菌种繁育的产量。权利要求书1页说明书7页 CN 106282034 A 2017.01.04 CN 106282034 A 1.一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种菇选择：选取菇柄长12厘米、菇帽长34厘米、纹路清晰、褶皱紧密的羊肚菌种菇连根拔除，清除杂质后摊晾

3、至含水量为6070%备用；（2）无糖培养基制备：土豆去皮后切成颗粒，称取质量份数为200份的土豆颗粒，加水煮沸1820分钟，趁热过滤取滤液，向滤液中补充热水后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，再趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将步骤（1）中的种菇，无糖培养基和分离器具灭菌后，切开种菇菌盖，铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内， 1618培养46天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝， 78天后待菌丝长到直径1.52cm的菌落时即可提纯；（4）接种：

4、从步骤（3）所得无糖培养基中挑取2块培养基，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上， 1618下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝， 910天菌丝即可长满试管；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，温度1618、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即吃料， 57天菌丝即可封面；（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动810次，使菌丝均匀分布在菌种瓶中，继续培养35天，菌种瓶中有大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量380 410瓶。 2.根据权利要求1所述的

5、一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，步骤（4）中所述提纯培养基的制备方法如下：取20份黄豆打磨成豆浆后加入葡萄糖20份、琼脂粉20份、 KH2P041.5份、 MgSO41.5份、酵母膏1份充分溶解，采用20mm200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，封口灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基。 3.根据权利要求1或2所述的一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，步骤（5）中所述原种培养基的制备方法如下： 1）选用当年无虫优质麦粒60份，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1份，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用； 2）取木屑30

6、份提前备好用水淋透，自然堆放至棕黄色备用； 3）将上述步骤中制备好的麦粒、木屑以及草炭土8份、石膏1份混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口。 4.根据权利要求3所述的一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于：步骤（2）中所述土豆颗粒为0.91.1cm3。 5.根据权利要求3所述的一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于：步骤（4）中挑取的两块无糖培养基体积均为45mm3。 6.根据权利要求3所述的一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于：步骤（5）中切成片段的提纯培养基长度为0.91.1

7、cm。权利要求书 1/1 页 2 CN 106282034 A 2 一种羊肚菌菌种快速繁育方法技术领域 0001 本发明涉及食用菌栽培技术领域，具体涉及到一种羊肚菌菌种快速繁育方法。背景技术 0002 羊肚菌（Morchella）属子囊菌门（Ascomycota）、盘菌纲（Pezizimycetes）、盘菌目（Pezizales）、羊肚菌科（Morchellaceae）。因其表面呈蜂窝状，外形常为圆顶或尖顶，与羊肚颇为相似，故名为羊肚菌。 0003 羊肚菌肉质脆嫩，含有丰富的氨基酸、多糖、脂肪酸，其营养价值较高，是世界公认的珍贵食用真菌。

8、在欧洲各地，羊肚菌以其鲜美的味道被认为是仅次于块菌的美味食用菌，北美人同样认为它是食用菌中的佳品。羊肚菌在我国最早被收载于本草纲目，中医以其子实体入药，因性平味甘，故具有健脾、化痰理气、益肠消食等功效。 0004 近年来，由于国内、国外市场对羊肚菌的需求日益增加，加之分布区域特定、出菇期短、天然产量有限以及过度采摘，呈现产量逐年下降趋势。市场价格也因此居高不下。目前我国已实现部分羊肚菌菌株人工栽培，每亩产量一般在100200公斤，但是由于菌种的获取方法极不规范，菌种生产周期较长，加之对羊肚菌生活史周期尚未完全明了，导致菌种产量不稳定，

9、甚至有绝收的现象出现。发明内容 0005 为了解决上述技术问题，本发明提供一种羊肚菌菌种快速繁育方法，该方法能够显著缩短羊肚菌菌种的繁育周期，并且能有效提高羊肚菌菌种繁育的产量。 0006 本发明通过下述技术方案实现：一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种菇选择：选取菇柄长12厘米、菇帽长34厘米、纹路清晰、褶皱紧密的羊肚菌种菇连根拔除，清除杂质后摊晾至含水量为6070%，以提高组织分离可操作性，降低细菌感染的几率；（2）无糖培养基制备：将土豆去皮后切成0.91.1cm3的颗粒，称取200份，加水煮沸18 20分钟，趁热

10、过滤后取滤液，向滤液中补充热水后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将步骤（1）中的种菇、无糖培养基和分离器具灭菌后，切开种菇菌盖，铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内， 1618培养46天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝， 78天后待菌丝长到直径1.52cm的菌落时即可提纯；（4）接种：从步骤（3）所得无糖培养基中挑取45mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接2030支， 16

11、18下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝， 910天菌丝即可长满试管；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.91.1cm的片段，每片段说明书 1/7 页 3 CN 106282034 A 3 接入1瓶灭菌后的原种培养基内，一支试管能够接68瓶原种，温度1618、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料， 57天菌丝即可封面；（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动810次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养35天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量380410瓶。 000

12、7 其中，步骤（4）中所述提纯培养基的制备方法如下：取20份黄豆打磨成豆浆后加入葡萄糖20份、琼脂粉20份、 KH2P04 1.5份、 MgSO41.5份、酵母膏1份充分溶解，调节PH值为7，采用20mm200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，用试管塞封口，灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基。 0008 步骤（5）中所述原种培养基的制备方法如下： 1）选用当年无虫优质麦粒60份，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1份，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用； 2）取木屑30份提前备好用水淋透，自然堆放至棕黄色备用； 3）将上述步骤中

13、制备好的麦粒、木屑以及草炭土8份、石膏1份混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口。 0009 在原种培养基中，麦粒富含淀粉和灰分营养更易于菌丝吸收，木屑增加培养基透气性，易于菌丝生长，草炭土含大量腐殖酸和微量元素增加菌丝活力，能够有效促进菌核形成，利于羊肚菌菌丝的快速生长。 0010 羊肚菌属于子囊菌，其生长过程较为复杂，且生长过程中，子囊、菌丝体、子实体形态大小会发生较大变化，其次，不同种的羊肚菌菌种具有不同的培养条件，其生长速度、生长习性、菌核发育、菌丝和菌核的颜色等都有

14、明显的差异。目前羊肚菌菌种的获取方法各式各样，如组织分离、孢子分离、菌土分离等导致品种退化非常严重。以上原因导致目前羊肚菌菌种生产的周期长、产量不稳定，甚至绝收，难以满足市场供应。 0011 本发明的菌种生产由传统的先生产原种再生产栽培种用于播种，改进为直接生产原种播种，去掉了原种扩繁为栽培种的环节，菌种繁育时间缩短了2425天，进一步地，改进接种方式，接种方式由1个点位接种改进为2个点位接种，将菌种在试管内的提纯培养基生长的时间由10天缩短到6天，再通过改变原种培养方式，将传统的静置培养改为摇瓶培养，使得原种培养时间缩短5天以上。因此，本发

15、明的羊肚菌菌种繁育方法有效将传统的70 天缩短到3336天，大大提升了菌种制种效率，适合在羊肚菌栽培中推广。 0012 本发明直接采用原种播种，由于减少了种子繁殖代数，避免菌种由于扩繁导致的退化和衰弱，保证了种子活性，其适应性和抗逆性更强，利于羊肚菌播种后的快速生长发育，提高产量。 0013 与传统的分离培养基相比，本发明采用了不含葡萄糖的无糖培养基，由于羊肚菌菌丝由组织块的再生萌发长成，能够快速附着在培养基表面，而杂菌菌丝必须由芽孢萌发长成，芽孢在无糖培养基表面由于养分不够很难萌发，减少了杂菌滋生的机会，因而无糖培养基能够避免菌种被杂菌污染，使羊肚菌

16、更易存活生长，提高菌种分离的成活率，提高羊肚菌菌种的产量，为做羊肚菌品种的分类鉴定及品种选育奠定了基础。 0014 本发明通过将菌种分离容器由试管改进为三角瓶，将菌种繁殖数量由810支增加到2530支，大大提高了原种的产量，利于大范围播种。说明书 2/7 页 4 CN 106282034 A 4 0015 本发明与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：（1）本发明的菌种生产由传统的先生产原种再生产栽培种用于播种，改进为直接生产原种播种，去掉了原种扩繁为栽培种的环节，大大缩短了菌种制种时间，同时由于减少了种子繁殖代数，保证种子活性，其适应性和抗逆性更强；

17、（2）通过改进接种方式、改变原种培养方式有效将菌种培养时间缩短9天以上，同时本发明直接采用原种播种，因而整个菌种繁育方法由传统的70天缩短到3336天；（3）通过将菌种分离容器由试管改进为三角瓶，提纯培养时菌种繁殖数量由810支增加到2530支，大大提高了繁育出的菌种的产量。具体实施方式 0016 为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本发明作进一步的详细说明，本发明的示意性实施方式及其说明仅用于解释本发明，并不作为对本发明的限定。 0017 实施例1 一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种菇选择：

18、采集当地人工种植或野生的羊肚菌，选取菇柄长12厘米、菇帽长34 厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌，采菇时将种菇整连根拔除，去掉多余泥土和杂质，用纸质采样袋密封，摊晾至含水量60%备用；（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成0.9cm3的颗粒，称取200g，加水 1000ml放入锅内煮沸20分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，灭菌方法为，将三角瓶直立放在医用高压锅内密封，通电加热，打开排气阀，待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时，表示锅内

19、冷空气已排尽，关闭排气阀待温度上升至120时开始计时，维持40分钟后断电，灭菌完成后，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中，超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开，利用接种铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内， 16培养4天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝， 8天后待菌丝长到直径1.5cm的菌落时即可提纯；（4）接种：从无糖培养基中挑取4mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三

20、角瓶可接28支， 16下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝， 10天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、 KH2P04 1.5g、 MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解，调节PH值为7，采用20mm200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，用试管塞封口，灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9cm的片段，每片段接入1 瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25，接种在接种箱或接种

21、室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度18、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料， 6天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：说明书 3/7 页 5 CN 106282034 A 5 选用当年无虫优质麦粒60g，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1g，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用，取木屑30g提前备好用水淋透，自然堆放至棕黄色备用，将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高压灭菌设备，压力0.14MPa下灭菌3小时；

22、（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动810次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养5天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量400瓶。 0018 实施例2 一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种菇选择：采集当地人工种植或野生的羊肚菌，选取菇柄长12厘米、菇帽长34 厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌，采菇时将种菇整连根拔除，去掉多余泥土和杂质，用纸质采样袋密封，摊晾至含水量70%备用；（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.

23、1cm3的颗粒，称取200g，加水 1000ml放入锅内煮沸20分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，灭菌方法为，将三角瓶直立放在医用高压锅内密封，通电加热，打开排气阀，待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时，表示锅内冷空气已排尽，关闭排气阀待温度上升至120时开始计时，维持40分钟后断电，灭菌完成后，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中，超净台工作20分钟达到无菌

24、要求后用刀片将种菇菌盖切开，利用接种铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内， 18培养4天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝， 7天后待菌丝长到直径1.5cm的菌落时即可提纯；（4）接种：从无糖培养基中挑取5mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接30支， 18下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝， 9天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、 KH2P04 1.5g、 MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解，调节PH值为

25、7，采用20mm200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，用试管塞封口，灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成1.1cm的片段，每片段接入1 瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25，接种在接种箱或接种室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度16、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料， 5天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：选用当年无虫优质麦粒60g，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1g，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用，取木屑30g提前备好用水淋透，

26、自然堆放至棕黄色备用，将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高压灭菌设备，压力0.14MPa下灭菌3小时；说明书 4/7 页 6 CN 106282034 A 6 （6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动810次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养5天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量380瓶。 0019 实施例3 一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）

27、种菇选择：采集当地人工种植或野生的羊肚菌，选取菇柄长12厘米、菇帽长34 厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌，采菇时将种菇整连根拔除，去掉多余泥土和杂质，用纸质采样袋密封，摊晾至含水量65%备用；（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.0cm3的颗粒，称取200g，加水 1000ml放入锅内煮沸19分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，灭菌方法为，将三角瓶直立放在医用高压锅内密封，通电加热，打开排气阀，待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时，

28、表示锅内冷空气已排尽，关闭排气阀待温度上升至120时开始计时，维持40分钟后断电，灭菌完成后，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中，超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开，利用接种铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内， 17培养5天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝， 8天后待菌丝长到直径1.8cm的菌落时即可提纯；（4）接种：从无糖培养基中挑取5mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上

29、，每个三角瓶可接29支， 17下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝， 9天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、 KH2P04 1.5g、 MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解，调节PH值为7，采用20mm200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，用试管塞封口，灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9cm的片段，每片段接入1 瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25，接种在接种

30、箱或接种室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度17、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料， 7天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：选用当年无虫优质麦粒60g，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1g，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用，取木屑30g提前备好用水淋透，自然堆放至棕黄色备用，将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高压灭菌设备，压力0.14MPa下灭菌3小时；（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握

31、菌种瓶，上下摇动810次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养4天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量390瓶。 0020 实施例4 一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：说明书 5/7 页 7 CN 106282034 A 7 （1）种菇选择：采集当地人工种植或野生的羊肚菌，选取菇柄长12厘米、菇帽长34 厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌，采菇时将种菇整连根拔除，去掉多余泥土和杂质，用纸质采样袋密封，摊晾至含水量70%备用；（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后

32、切成1.1cm3的颗粒，称取200g，加水 1000ml放入锅内煮沸20分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，灭菌方法为，将三角瓶直立放在医用高压锅内密封，通电加热，打开排气阀，待锅内水沸腾持续5分钟排气阀均匀排气时，表示锅内冷空气已排尽，关闭排气阀待温度上升至120时开始计时，维持40分钟后断电，灭菌完成后，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中，超净台工作20分钟

33、达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开，利用接种铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内， 18培养4天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝， 7天后待菌丝长到直径1.5cm的菌落时即可提纯；（4）接种：从无糖培养基中挑取5mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接29支， 18下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝， 10天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、 KH2P04 1.5g、 MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解，调

34、节PH值为7，采用20mm200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，用试管塞封口，灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成1.1cm的片段，每片段接入 1瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25，接种在接种箱或接种室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度18、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料， 5天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：选用当年无虫优质麦粒60g，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1g，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用，取木屑30g提前备

35、好用水淋透，自然堆放至棕黄色备用，将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高压灭菌设备，压力0.14MPa下灭菌3小时；（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动810次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养5天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量385瓶。 0021 实施例5 一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种菇选择：采集当地人工种植或野生的羊肚菌，

36、选取菇柄长12厘米、菇帽长34 厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌，采菇时将种菇整连根拔除，去掉多余泥土和杂质，用纸质采样袋密封，摊晾至含水量70%备用；（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成1.1cm3的颗粒，称取200g，加水 1000ml放入锅内煮沸18分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水至1000ml后加入琼脂说明书 6/7 页 8 CN 106282034 A 8 粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，灭菌方法为，将三角瓶直立放在医用高压锅内密封，通电加热，打开排气阀，待锅内水沸腾持续5分钟排气阀

37、均匀排气时，表示锅内冷空气已排尽，关闭排气阀待温度上升至120时开始计时，维持40分钟后断电，灭菌完成后，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将种菇、无糖培养基和分离器具置于超净工作台中，超净台工作20分钟达到无菌要求后用刀片将种菇菌盖切开，利用接种铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内， 16培养5天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝， 7天后待菌丝长到直径2cm的菌落时即可提纯；（4）接种：从无糖培养基中挑取4mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个

38、三分点上，每个三角瓶可接30支， 18下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝， 9天菌丝即可长满试管，其中，所述提纯培养基的制备方法如下：取20g黄豆打磨成1000ml豆浆后加入葡萄糖20g、琼脂粉20g、 KH2P04 1.5g、 MgSO41.5g、酵母膏1g充分溶解，调节PH值为7，采用20mm200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，用试管塞封口，灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9cm的片段，每片段接入1 瓶灭菌后的原种培养基内，原种培养基温度降到25，接

39、种在接种箱或接种室内进行，一支试管可接8瓶原种，温度17、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料， 6天菌丝即可封面，其中，所述原种培养基的制备方法如下：选用当年无虫优质麦粒60g，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1g，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用，取木屑30g提前备好用水淋透，自然堆放至棕黄色备用，将制备好的麦粒、木屑以及草炭土8g、石膏1g混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口后，采用高压灭菌设备，压力0.14MPa下灭菌3小时；（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内

40、，紧握菌种瓶，上下摇动810次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养5天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量400瓶。 0022 经发明人大量的试验和探索，最终得出上述羊肚菌菌种快速繁育方法，该方法在保证菌种品质、存活率和产量的前提下，大大缩短了羊肚菌菌种繁育周期，满足市场需求。 0023 以上所述的具体实施方式，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施方式而已，并不用于限定本发明的保护范围，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。说明书 7/7 页 9 CN 106282034 A 9