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一种确定蒙药诃子制草乌最佳炮制工艺的质量评价方法

花匠小妙招
2025-05-05 07:28

本发明涉及中药分析检测，具体涉及一种确定蒙药诃子制草乌最佳炮制工艺的质量评价方法。

背景技术：

1、草乌aconitμm kusnezoffiireichb.为毛莨科一年生草本植物北乌头的干燥块根，质地较硬，别称有“鸭头”、“药羊蒿”、“鸡头草”、“百步草”等，与川乌作为药材入药时，可统称为“乌头”。草乌在传统中医药领域的应用具有悠久的历史。最早记载于《神农本草经》中，具有祛风除湿，温经止痛的功效，因其治疗效果与毒性作用共存，临床使用前必须进行减毒处理。蒙药属于我国特色民族医药，在炮制草乌方面具有丰富的经验，且独具特色，蒙药诃子草乌的炮制方法中因其减毒效果显著、且有效保留了草乌中的成分，在多种蒙药方剂中被广泛应用。然而，诃子制草乌在不同医籍中具体炮制方法不尽相同，且缺乏一套完整的质量评价体系，因此借助现代检测手段对蒙药诃子制草乌的炮制减毒工艺进行规范化研究，构建质量评价体系具有重要意义。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题是提供一种确定蒙药诃子制草乌最佳炮制工艺的质量评价方法，该质量评价方法研究内容全面，对蒙药制草乌构建质量评价体系具有重要意义。

2、为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：

3、本发明提供一种确定蒙药诃子制草乌最佳炮制工艺的质量评价方法，包括以下步骤：

4、步骤一：建立诃子制草乌正交优化试验，得到不同炮制方法的诃子制草乌；

5、步骤二：应用aobitrap lc-ms检测器，比较不同炮制方法的诃子制草乌中生物碱及鞣质性成分的变化；

6、步骤三：参照《中国药典》2020版一部中制草乌杂质、水分、总灰分及薄层色谱的鉴别方法，对不同炮制方法的诃子制草乌进行试验；

7、步骤四：采用高效液相色谱方法对诃子制草乌中所含的乌头类生物碱含量进行测定；

8、步骤五：建立诃子制草乌指纹图谱，对质量进行评价，即可确定蒙药诃子制草乌最佳炮制工艺。

9、在上述技术方案中，优选的：所述步骤一的一种具体实施方式为：

10、取生草乌净制后，以炮制时间、炮制温度、诃子粒径、汤的用量为因素，每天按生草乌：诃子＝10:1比例进行煮诃子汤，每天更换诃子汤后，用清水清洗一次，并适当翻动，再加入新的诃子汤进行浸泡，取出，干燥；得到不同炮制方法的诃子制草乌。

11、在上述技术方案中，优选的：所述步骤二中生物碱成分变化的检测方法如下：

12、取不同炮制方法的诃子制草乌粉末1.0g，精密称定置具塞锥形瓶中，加氨试液1ml，精密加入乙醚30ml，超声处理30min，提取两次，合并提取液，滤液置于蒸发皿中，自然挥干后，用5ml 50％甲醇溶液超声复溶，过0.22μm 无菌滤膜，作为供试品溶液，应用aobitrap lc-ms检测器正谱分析；分析过程参数如下：

13、esi源，正离子扫描模式，毛细管温度270℃，毛细管电压30v，喷雾电压5kv，鞘气(n2)流速49psi(1psi≈6.895kpa)，辅助气(n2)流速10psi；色谱柱(c18色谱柱为waters-c18，4.6mm*100mm，1.7μm；)，甲醇：乙腈＝50:50 为流动相a，0.35mol/l乙酸铵氨水ph＝10.5为流动相b，柱温30℃，流速0.3 ml/min，进样量10μl，进行洗脱；

14、洗脱条件为：0～15min，10％～45％a；15～45min，45％～60％a；45～ 55min，60％～85％a，55～65min，85％～90％a；65～71min，90％～10％a； 71～75min，10％a。

15、在上述技术方案中，优选的：所述步骤二中鞣质性成分变化的检测方法如下：

16、取不同炮制方法的诃子制草乌粉末0.5g，精密称定置具塞锥形瓶中，精密加入含有0.2％甲酸的50％甲醇水溶液20ml，放置过夜，超声处理60min，过 0.22μm无菌滤膜，作为供试品溶液，应用orbitrap lc-ms检测器负谱分析；分析过程参数如下：

17、esi源，负离子扫描模式，质谱条件、色谱柱同正谱条件；乙腈为流动相a， 0.1％甲酸水为流动相b，柱温30℃，流速0.3ml/min，进样量5μl，进行洗脱；

18、洗脱条件为：0～3min，5％a；3～12min，5％～13％a；12～20min，13％～ 25％a；20～30min，25％～30％a；30～38min，30％～60％a；38～48min， 60％～95％a；48～49min，95％～5％a；49～52min，5％a。

19、在上述技术方案中，优选的：所述步骤四中乌头类生物碱含量测定方法如下：

20、取生草乌、不同炮制因素得到的诃子制草乌粉末1.0g，精密称定置具塞锥形瓶中，加氨试液1ml，精密加入乙醚50ml，称定重量，超声处理30min，提取两次，合并提取液，滤液置于蒸发皿中，自然挥干后，用5ml含0.1％盐酸的甲醇溶液超声复溶，作为供试品溶液，测定其中乌头类生物碱的含量。

21、在上述技术方案中，优选的：所述步骤五的一种具体实施方式为：

22、以高效液相色谱法对待测液进行检测，色谱参数为：流动相a：50mmol·l-1的乙酸胺溶液；流动相b：乙腈；c18色谱柱为sunniest-c18(4.6mm*250mm， 5μm)；检测波长为235nm；流速为1m l·min-1；柱温为30℃；进样量为20μl；进行梯度洗脱；

23、根据获得色谱图的出峰时间对有效成分进行定性；根据获得的色谱图的封面及对有效成分进行定量；检测波长为235nm获得的色谱图中：出峰时间为 13.720±0.2min的为苯甲酰新乌头原碱；出峰时间为16.607±0.2min的为苯甲酰乌头原碱；出峰时间为18.587±0.2min的为苯甲酰次乌头原碱；出峰时间为 35.127±0.2min的为新乌头碱；出峰时间为38.313±0.2min的为次乌头碱；出峰时间为39.340±0.2min的为乌头碱。

24、本发明提供的确定蒙药诃子制草乌最佳炮制工艺的质量评价方法，其还适用于生草乌。

25、应用上述含量测定色谱条件，得到九批不同炮制品指纹图谱叠加图，分析生物碱成分的稳定性及质量一致性。

26、本发明的有益效果是：

27、本发明的确定蒙药诃子制草乌最佳炮制工艺的质量评价方法，以诃子制草乌中诃子、生物碱的含量变化为评价指标，建立正交优化试验确立诃子制草乌的最优炮制方法；建立一种多方位评价诃子制草乌质量的方法，该方法也同时适用于生草乌，通过多种检测手段对制草乌质量进行评价，包括杂质、水分、总灰分、薄层、涉及高效液相色谱法的含量测定以及指纹图谱。通过试验例证明，该方法稳定可靠，能够较为全面的对诃子制草乌质量进行评价，同时由该评价方法优选出的蒙药诃子制草乌炮制方法适用于科学研究及生产实践。

28、本发明的确定蒙药诃子制草乌最佳炮制工艺的质量评价方法，其是一种较为全面的诃子制草乌质量评价方法。在《中国药典》2020版一部的基础上对杂质、水分、总灰分及薄层色谱进行鉴定，并建立新的乌头类生物碱hplc含量测定方法，应用orbitrap lc-ms检测器对炮制品中的生物碱、鞣质性成分进行分析、分析不同炮制因素其含量变化的影响。与现行《药典》评价方法对比，该发明的含量测定方法可同时测乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱六种生物碱，且该方法分离度更好，无假阳性及干扰峰存在，且具有进液质的基质，综合上述结果，确定最优的诃子制草乌炮制工艺。对于诃子制草乌用药具有深远意义。