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一种绿豆开花基因VrFT5a及其应用

花匠小妙招
2025-05-10 04:05

摘要：本发明公开了一种绿豆开花基因VrFT5a及其应用，绿豆开花基因VrFT5a包含选自下组的核苷酸序列：(a)序列表Seq ID NO.1所示核苷酸序列；(b)与(a)的核苷酸序列的互补的核苷酸序列；(c)与(a)的核苷酸序列具有至少50％同源性的核苷酸序列；(d)与(a)的核苷酸序列编码相同氨基酸序列的蛋白质、但在序列上不同的核苷酸序列；(e)编码如下氨基酸序列之一的核苷酸序列：序列表Seq ID NO.2中所示的氨基酸序列；(f)(a)‑(e)任何一个的核苷酸序列的活性片段；或(g)与(a)‑(e)任何一个的核苷酸序列互补的核苷酸序列。本发明可促使转基因植物提前开花，缩短生育期，具有调控植物的开花期的生理功能。

主分类号：

C12N15/29(2006.01)(突变或遗传工程；遗传工程涉及的DNA或RNA，载体)

权利要求：

1.一种绿豆开花基因VrFT5a，其特征在于，其包含选自下组的核苷酸序列： (a)序列表Seq ID NO.1所示核苷酸序列； (b)与(a)的核苷酸序列互补的核苷酸序列； (c)与(a)的核苷酸序列具有至少50％同源性的核苷酸序列； (d)与(a)的核苷酸序列编码相同氨基酸序列的蛋白质、但在序列上不同的核苷酸序列； (e)编码如下氨基酸序列之一的核苷酸序列：序列表Seq ID NO.2中所示的氨基酸序列，或者，由于至少一个氨基酸残基的替代、缺失和/或插入而与序列表Seq ID NO.2所示的氨基酸序列不同的氨基酸序列，或者，与序列表Seq ID NO.2所示的氨基酸序列具有至少50％同源性的氨基酸序列； (f)(a)-(e)任何一个的核苷酸序列的活性片段；或 (g)与(a)-(e)任何一个的核苷酸序列互补的核苷酸序列。 2.如权利要求1所述的绿豆开花基因VrFT5a，其特征在于，所述绿豆开花基因VrFT5a通过在植物中进行表达，以调节所述植物的开花时间。 3.一种由如权利要求1或2中所述的绿豆开花基因VrFT5a编码的蛋白质，其特征在于，其氨基酸序列选自： (1)如序列表Seq ID NO.2所示的氨基酸序列； (2)将(1)的氨基酸序列替换、缺失、添加和/或插入至少一个氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。 4.一种含有绿豆开花基因VrFT5a的表达载体，其特征在于，所述表达载体为将如权利要求1或2中所述的绿豆开花基因VrFT5a插入至植物表达载体中所获取的过量表达载体，启动相应目的基因表达的启动子为强启动子35S。 5.一种含有绿豆开花基因VrFT5a过量表达载体的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为将如权利要求4中所述的表达载体转入根癌农杆菌中所获取的宿主细胞。 6.一种如权利要求1或2中所述的绿豆开花基因VrFT5a的编码序列检测方法，其特征在于，其包括以下步骤： (1)取含有所述绿豆开花基因VrFT5a的绿豆的幼嫩叶片至液氮中进行研磨，并通过试剂盒提取总RNA； (2)提取所述总RNA，并反转录为全长cDNA； (3)以所述全长cDNA为模板，通过序列表Seq ID NO.3中的正向引物5'-TGAAGAATCTATTGATGGGACGG-3'以及序列表Seq ID NO.4中的反向引物5'-CATTAAGTGACAGTGGTGTGCTA-3'进行PCR反应扩增； (4)在PCR反应结束后，先对扩增物进行琼脂糖凝胶电泳，再通过凝胶回收试剂盒进行切胶回收并测序。 7.一种如权利要求1或2中所述的绿豆开花基因VrFT5a在绿豆不同器官中表达水平的检测方法，其特征在于，其包括以下步骤： (1)取含有所述绿豆开花基因VrFT5a的绿豆的根、茎、叶、花、幼荚组织，分别提取总RNA并反转录为cDNA； (2)通过序列表Seq ID NO.5中正向引物5'-GCCCAGAACTTCGCCATAAT-3'和序列表SeqID NO.6中反向引物5'-CACGCTCTCTTTGGCAGTTG-3'，对(1)的cDNA进行荧光定量PCR反应，获取所述绿豆开花基因VrFT5a在所述绿豆的根、茎、叶、花、幼荚组织中的表达水平。 8.一种如权利要求4中所述的含有绿豆开花基因VrFT5a的表达载体的构建方法，其特征在于，其包括以下步骤： (1)取含有所述绿豆开花基因VrFT5a的绿豆的幼嫩叶片，提取RNA并反转录为全长cDNA； (2)通过序列表Seq ID NO.7中的正向引物5'-GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTAATGGCACGAGAGGATCCT-3'、序列表Seq ID NO.8中的反向引物5'-GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTATTAGTATCTCCTTCCACC-3'，以所述全长cDNA为模板进行PCR扩增，获取PCR产物； (3)先对所述PCR产物进行凝胶电泳并回收，再将回收产物交换到入门载体中，获得重组入门载体； (4)提取所述重组入门载体的质粒，并将所述质粒中的VrFT5a基因片段交换至所述植物表达载体中，以获取所述过量表达载体。 9.一种拟南芥的遗传转化方法，其特征在于，其包括以下步骤： (1)将如权利要求4中所述的含有绿豆开花基因VrFT5a的表达载体与农杆菌进行冰浴混匀，并通过电击法进行转化； (2)将所述转化物涂布在抗性YEP培养基上，并倒置培养，直至长出单菌落； (3)挑取所述抗性YEP培养基上的菌落至YEP液体培养基中，并在摇床上培养，对形成的菌液进行培养直至OD600大于1； (4)去除盛花期的拟南芥的果荚，将拟南芥整株置于菌液中进行侵染； (5)取出侵染后的拟南芥植株进行遮光生长； (6)将遮光生长后的拟南芥植株置于光照下进行培养，待种子成熟后收获T0代种子； (7)先将收获的T0代种子杀菌消毒后种植在固体培养基内，并进行黑暗春化，再将春化后的植株在人工气候下进行培养，并观察生长状况。 10.一种植物转化体，其特征在于，其基因组上包括含有启动子35S驱动的如权利要求1或2中所述的绿豆开花基因VrFT5a。