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茄子紫色果皮基因的鉴定方法

花匠小妙招
2025-06-17 16:37

1.本申请属于生物分子检测及育种领域，具体涉及茄子紫色果皮基因的鉴定方法。

背景技术：

2.茄子（solanum melongena）是全球广泛种植的蔬菜，被全世界人民所喜爱；茄子果皮颜色影响消费者购买欲望，因此值得深入研究。
3.花青素的合成直接影响茄子果皮、花萼颜色，茄子基因影响花青素植物细胞的液泡中的分布以及表现，但并不是果色的完全性决定因素，环境因素也能影响花青素的合成，所以完全依靠样本的表皮颜色进行选种，并不完全可靠；鉴定茄子果皮颜色基因，能够为茄子果品培育选种提供严谨的科学依据；国内外学者在控制茄子紫色果皮基因做了大量研究；但是紫色果皮基因检测精准度、可靠性存在改进空间。
4.

技术实现要素：

5.茄子紫色果皮基因的鉴定方法，其特征在于：步骤1、准备检材；步骤2、对检材进行pcr扩增，引物对的核苷酸序列为：正向引物为：wz-1f：5
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cttgtcaaagactgattacacgata-3’；反向引物为：wz-1r：5
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cctatcacacctaattgttaaactg-3’；步骤3、观察扩增结果是否含有199bp的片段，如果不含则说明检材不含紫色果皮基因。
6.进一步的，步骤4、对199bp的片段进行测序，如果199bp的片段的dna序列为：ctcgtcaaagactgattacacgataataaaccaaaaaacataaaaaactttagacctcatacacccaactacttgtgacgtgtgatttgcagtggctattttaggctgaaattaaaaggttattaagttagtttaaaaaaaaaaaaaaaaaaaacttgaaaagtaaggtatggtcagtttaacaattaggtgtgatagg，则说明检材含有紫色果皮基因。
7.进一步的，pcr反应体系（12μl）。
8.进一步的，pcr反应体系中，dna工作液2μl。
9.进一步的，pcr反应体系中，2xes taqmastermix 5ul。
10.进一步的，pcr反应体系中，正向引物和反向引物各1μl（10um/l）。
11.进一步的，pcr反应体系中，用3μl ddh2o将总体积补齐至12μl。
12.有益效果：本发明紫色果皮基因的检测结果更精准、更稳定、更可靠。
附图说明
13.图1为实施例1的扩增结果。注：a：sm524；b：sm518。
14.图2为实施例1的样本sm524的照片。
15.图3为实施例1的样本sm518的照片。
16.图4为实施例2的样本表。
17.图5为实施例2的扩增结果。
具体实施例
18.实施例1、茄子紫色果皮基因的检测试验，茄子基因组dna的提取采用改良ctab法；步骤1：获取紫红色外皮茄子sm524和花绿色外皮茄子sm518为试验材料，样本可从广西农业科学院蔬菜研究所获得；步骤2：对上述供试材料进行基因型检测，模板为上述供试材料的基因组dna；步骤3：进行pcr扩增pcr反应体系（12μl）为：dna工作液2μl、2xes taqmastermix 5ul、正向引物和反向引物各1μl（10um/l），用3μl ddh2o将总体积补齐至12μl；正向引物为：wz-1f：5
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cttgtcaaagactgattacacgata-3’；反向引物为：wz-1r：5
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cctatcacacctaattgttaaactg-3’。
19.pcr扩增反应程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸5 min；扩增产物用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察照相。并对pcr扩增产物进行测序；得到如图1所示的扩增结果；对199bp的片段进行测序，其dna序列为：ctcgtcaaagactgattacacgataataaaccaaaaaacataaaaaactttagacctcatacacccaactacttgtgacgtgtgatttgcagtggctattttaggctgaaattaaaaggttattaagttagtttaaaaaaaaaaaaaaaaaaaacttgaaaagtaaggtatggtcagtttaacaattaggtgtgatagg对193bp的片段进行测序，其dna序列为：cttgtcaaagactgattacacgataataaaccaaaaaacataaaaaactttagacctcatacacccaactacttgtgacgtgtgatttgcagtggctattttaggctgaaattaaaaggttattaagttagtttaaaaaaaaaaaaaacttgaaaagtaaggtatggtcagtttaacaattaggtgtgatagg实施例2、果皮紫色基因的检测1.试验材料本发明利用如图4所示的8份紫皮茄子自交系及品种和8份非紫皮茄子自交系及品种，对分子标记wz-1进行验证。所用自交系及品种可从广西农业科学院蔬菜研究所获得。
20.2.试验方法对上述供试材料进行基因型检测，模板为上述供试材料的基因组dna。
21.pcr反应体系（12μl）为：dna工作液2μl、2xes taqmastermix 5ul、正向引物和反向引物各1μl（10um/l），用3μl ddh2o将总体积补齐至12μl。
22.pcr扩增反应程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸5 min；扩增产物用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察照相。并对pcr扩增
产物进行测序。
23.3.试验结果电泳结果如图5所示，泳道1：sm524；泳道2：sm167；泳道3：sm623；泳道4：sm005；泳道5：sm047；泳道6：sm011；泳道7：sm021；泳道8：sm613；泳道9：sm006；泳道10：sm279；泳道11：sm503；泳道12：sm544；泳道13：sm545；泳道14：sm530；泳道15：sm518)；泳道16：sm546。验证材料对应的果皮颜色表型见表1，泳道1~10为紫皮材料，11~20为非紫皮材料。分子标记wz-1在紫皮品种（sm524；sm167；sm623；sm005；sm047；sm011；sm021；sm613）的pcr扩增产物均含有大小为199bp的片段且不含有大小为193bp的片段；分子标记wz-1在非紫皮品种（sm006；sm279；sm503；sm544；sm545；sm530；sm518；sm546）的pcr扩增产物均含有大小为193bp的片段且不含有大小为199bp的片段，供试品种的基因型与果色表型鉴定结果一致，说明本发明的分子标记wz-1有较强特异性，可用于茄子果色表型的鉴定筛选。

技术特征：
1.茄子紫色果皮基因的鉴定方法，其特征在于：步骤1、准备检材；步骤2、对检材进行pcr扩增，引物对的核苷酸序列为：正向引物为：wz-1f：5
’‑ꢀ
cttgtcaaagactgattacacgata-3’；反向引物为：wz-1r：5
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cctatcacacctaattgttaaactg-3’；步骤3、观察扩增结果是否含有199bp的片段，如果不含则说明检材不含紫色果皮基因。2.如权利要求1所述的茄子紫色果皮基因的鉴定方法，其特征在于：步骤4、对199bp的片段进行测序，如果199bp的片段的dna序列为：ctcgtcaaagactgattacacgataataaaccaaaaaacataaaaaactttagacctcatacacccaactacttgtgacgtgtgatttgcagtggctattttaggctgaaattaaaaggttattaagttagtttaaaaaaaaaaaaaaaaaaaacttgaaaagtaaggtatggtcagtttaacaattaggtgtgatagg，则说明检材含有紫色果皮基因。3.如权利要求1所述的茄子紫色果皮基因的鉴定方法，其特征在于：pcr反应体系（12μl）。4.如权利要求1所述的茄子紫色果皮基因的鉴定方法，其特征在于：pcr反应体系中，dna工作液2μl。5.如权利要求1所述的茄子紫色果皮基因的鉴定方法，其特征在于：pcr反应体系中，2xes taqmastermix 5ul。6.如权利要求1所述的茄子紫色果皮基因的鉴定方法，其特征在于：pcr反应体系中，正向引物和反向引物各1μl（10um/l）。7.如权利要求1所述的茄子紫色果皮基因的鉴定方法，其特征在于：pcr反应体系中，用3μl ddh2o将总体积补齐至12μl。

技术总结
茄子紫色果皮基因的鉴定方法，其特征在于：步骤1、准备检材；步骤2、对检材进行PCR扩增，引物对的核苷酸序列为：正向引物为：Wz-1F：5

技术研发人员：王鹏王益奎甘桂云杨其洪蒋雅琴李文嘉何小艳
受保护的技术使用者：广西壮族自治区农业科学院
技术研发日：2022.12.05
技术公布日：2023/3/2