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茄子花青素合成相关基因及其编码蛋白的制作方法

花匠小妙招
2025-06-17 16:30

茄子花青素合成相关基因及其编码蛋白的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种生物【技术领域】的茄子花青素合成相关基因及其编码蛋白，所述基因为SmTTG1基因、或SmGL3基因、或SmTT8基因；所述SmTTG1基因编码的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；所述SmGL3基因编码的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.4所示；所述SmTT8基因编码的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.6所示。利用本发明的茄子SmTTG1,SmGL3,SmTT8基因，可筛选出受其调控的与花青素合成密切相关的下游基因，以及与其相互作用的其他转录因子基因，从而探究茄子花青素合成路径调控机制。利用茄子SmTTG1,SmGL3,SmTT8基因也可以通过对基因进行位点突变，改变茄子中的基因序列，从而对茄子果实性状进行改变，达到提高其观赏价值和产量，实现更高的经济价值。
【专利说明】茄子花青素合成相关基因及其编码蛋白

【技术领域】
[0001] 本发明属于生物【技术领域】，具体涉及一种茄子花青素合成相关基因及其编码蛋白。

【背景技术】
[0002] 花青素是一类重要的水溶性天然植物色素，属于类黄酮物质，广泛存在于植物表皮细胞的液泡中、呈现橙色、红色至蓝色。花青素根据其基本结构分类很多，其中以矢车菊色素、天竺葵色素以及花翠素这三种最为普通。花青素是迄今为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有抗氧化衰老、预防心血管疾病、抗肿瘤、抗突变、调节免疫活性功能；此外，花青素还是一种安全、无毒的天然食用色素。花青素在园艺、食品、保健品等方面具有广泛的应用，对人类健康具有巨大的潜在价值，因此花青素一直是研究的热点领域。
[0003] 植物中的花青素生物合成由两类基因的共同控制，一类是结构基因，编码花青素苷生物合成途径中的关键酶；另一类是调控基因，调控花青素苷生物合成基因的表达强度和模式，并且控制花青素苷在时空表达的变化。目前已分离和鉴定了三类花青素合成的转录因子：R2R3-MYB蛋白、MYC家族的bHLH蛋白和WD40蛋白。这些转录因子通过与结构基因启动子中相应的顺式作用元件结合，从而调节花色素苷生物合成途径中基因的表达。在这个过程中一般是由MYB转录因子、bHLH转录因子和WD40转录因子构成一个蛋白复合体 (简称MBW蛋白复合体），直接调控结构基因转录的。
[0004] 目前，已经从拟南芥、矮牵牛、紫苏、玉米、葡萄、金鱼草、苹果等植物中分离克隆了大量与花青素生物合成代谢相关的结构基因和调控基因，但是在这方面对茄子的研究鲜少有报道。本研究中分离克隆了茄子花青素合成相关的WD40转录因子基因 SmTTGl，bHLH转录因子基因 SmGL3和SmTT8,研究了它们在茄子不同组织的表达特异性，并且利用酵母双杂交系统，检测这几个翻译的蛋白与MYB转录因子基因 SmMYB形成的蛋白两两之间的互作情况，为进一步探究茄子花青素生物合成调控机制提供基础。经对现有技术文献的检索，尚未发现与本发明相同或者相似的技术主题。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种茄子花青素合成相关基因及其编码蛋白。本发明针对目前对茄子研究基础薄弱的现状，克隆出茄子花青素合成相关转录因子SmTTGl，SmGL3, SmTT8的基因序列，进而可通过对该基因表达的调控及干扰等操作，提商爺子的品质。
[0006] 本发明是通过以下的技术方案实现的，本发明涉及一种茄子花青素合成相关基因，所述基因为SmTTGl基因、或SmGL3基因、或SmTT8基因；
[0007] 所述SmTTGl基因编码的氨基酸序列如SEQ ID N0. 2所示；
[0008] 所述SmGL3基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 4所示；
[0009] 所述SmTT8基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示。
[0010] 优选地，所述SmTTGl基因的序列如SEQ ID NO. 1所示。
[0011] 优选地，所述SmGL3基因的序列如SEQ ID NO. 3所示。
[0012] 优选地，所述SmTT8基因的序列如SEQ ID NO. 5所示。
[0013] 本发明根据Genebank数据库，运用生物信息学手段，通过同源序列比较设计出简并引物，用分子克隆的方法，克隆出紫色茄子中SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因；经过序列分析，确定是茄子的相关基因；组织表达分析发现，SmTTGl，SmGL3和SmTT8基因各组织荧光半定量检测值，结果显示，三个基因在根、茎、也、花、果皮、果肉中均有表达，但在不同组织中表达量不同。SmTTGl基因在叶片中表达水平最高，显著高于其他各组织；在其他组织中表达量相当，无显著性差异。SmGL3基因在茎中表达量最高显著高于其他各组织，其次是花和果肉，在根和叶中表达量很低。SmTT8在果皮中的表达量最高，在茎中也有显著表达，在根、叶、花、果肉中表达量低，且无显著性差异。
[0014] 本发明具有如下有益效果：本发明的SmTTGl, SmGL3, SmTT8都是转录因子基因为茄子花青素合成的关键调控基因，该基因通过结合顺式元件调节下游基因的表达，从而调控花青素合成。利用本发明的茄子SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因，可筛选出受其调控的与花青素合成密切相关的下游基因，以及与其相互作用的其他转录因子基因，从而探究茄子花青素合成路径调控机制。利用茄子SmTTGl, SmGL3, SmTT8基因也可以通过对基因进行位点突变，改变茄子中的基因序列，从而对茄子果实性状进行改变，达到提高其观赏价值和产量，实现更高的经济价值。

【专利附图】

【附图说明】
[0015] 通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
[0016] 图1为本发明的SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因的cDNA琼脂糖凝胶电泳图；
[0017] 图2为本发明基因 SmTTGl组织表达分析图；
[0018] 图3为本发明基因 SmGL3组织表达分析图；
[0019] 图4为本发明基因 SmTT8组织表达分析图；
[0020] 图5为本发明SmTTGl, SmGL3, SmTT8与SmMYB蛋白之间的酵母双杂交验证图。

【具体实施方式】
[0021] 下面结合具体的实施例和附图，进一步阐述本发明的【具体实施方式】。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等（1989)编著的分子克隆克隆实验手册（New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0022] 本发明涉及的RNA提取、PCR纯化、质粒回收等试剂盒通过公开市售的商业渠道获得，够买于生工生物（上海）股份有限公司，大肠杆菌（Escherichia coli)菌株DH-5ci由本实验室保存，Taq DNA聚合酶、限制性核酸内切酶、AMV反转录酶、凝胶回收试剂盒及合成引物购自生工生物公司，PrimeSTAR? Max DNA高保真酶、pMD19-T载体、RACE扩增试剂盒购自大连宝生物公司（TaKaRa)。
[0023] 图1为本发明的SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因的cDNA琼脂糖凝胶电泳图；SmTTGl基因片段（A)、SmGL3基因片段、⑶SmTT8基因片段（C)和SmMYB基因片段（D);图2为本发明基因 SmTTGl组织表达分析图；图3为本发明基因 SmGL3组织表达分析图；图4为本发明基因 SmTT8组织表达分析图；图5为本发明SmTTGl, SmGL3, SmTT8与SmMYB蛋白之间的酵母双杂交验证图。
[0024] 实施例1、茄子花青素合成相关SmTTGl, SmGL3, SmTT8的克降及纟目织表汰特件分析
[0025] 本实施例涉及茄子花青素合成相关SmTTGl，SmGL3, SmTT8的克隆及组织表达特性分析，包括如下步骤：
[0026] 步骤一，茄子花青素合成相关SmTTGl, SmGL3, SmTT8基因的克隆
[0027] 1、茄子实验材料取材
[0028] 本实验所用的植物材料为本课题组保存的茄子优良种质资源YZ14(邵文婷，刘杨，韩洪强2013.茄子花青素合成相关基因 SmMYB的克隆与功能研究.园艺学报 40 (3) : 467 - 478)，YZ14表型为无刺，紫茎，紫花，紫色果实。实验材料栽培于上海市闵行区浦江镇航天育种基地的人工塑料大棚中。在自然条件下育苗，生长并结实。取紫茄的根、紫色茎、紫色叶片、紫色花瓣、紫色果实。
[0029] 2、TRIzol法提取商品成熟期紫色果皮中的总RNA ;
[0030] (1)称取0. 5g紫长茄的商品成熟期紫色果皮，用液氮速冻后，迅速研磨成细粉，分装于1. 5ml的eppendorf离心管中；
[0031] (2)加入1ml TRIzol，用力摇动使混合均匀，25°C，放置5min ;
[0032] (3)每管加 0· 2ml 氯仿，用力振荡 15sec,室温放置 2min_3min, 4°C，12, 000g,离心 15min ;
[0033] (4)将上清液600ul吸入1. 5ml的新eppendorf离心管中，加与上清等体积异丙醇，颠倒混匀，_2〇°C冰箱中放置30min ;
[0034] (5)4°C，12, 000g，离心 15min，弃上清，收集 RNA 沉淀，加 lml75% (V/V)乙醇洗涤沉淀1-2次，洗涤具体为：加 lml75% (V/V)乙醇，4°C离心，12000g，10min-15min，弃上清，收集RNA沉淀；
[0035] (6)沉淀 25°C下干燥 15min_20min，溶于 30 μ 1-50 μ 1 的 RNase-free water 中；
[0036] (7)用甲醛变性胶电泳鉴定总RNA质量，然后在分光光度计上测定RNA含量。
[0037] 3、SmTTGl, SmGL3, SmTT8基因 cDNA全长的克隆与SmMYB基因的扩增
[0038] 根据拟南芥中与花青素合成相关的基因 TTG1，GL3, TT8的序列信息，在NCBI中进行BLAST比对后，挑选其中与茄子亲缘关系近的植物的同源蛋白序列，并获得其相应的编码序列（CDS)，针对两端的保守区设计能够扩增出全长的简并引物（表7)并以茄子cDNA 为模板，采用LA酶扩增中间序列，产物纯化后连接到T载体上，经多次测序，得到完整的编码序列。参照邵文婷等设计特异引物（表1)，扩增得到SmMYB编码序列。PCR反应条件为： 94°C 4min ;94°C 30s, 55°C 45s, 72°C lmin (或 2min), 32 个循环；72°C 8min。
[0039] 将测序得到的核苷酸序列用NCBI的BLASTn方法与Genbank中已登陆的TTG1，GL3 和TT8基因序列进行比对，结果表明SmTTGl与马铃薯TTG1基因序列同源性达到94%，番茄 TTG1基因同源性为92%，SmGL3与马铃薯GL3基因序列同源性达到94%，番茄GL3基因同源性为93%，SmTT8与马铃薯GL3基因序列同源性达到85%，番茄GL3基因同源性为83%。特异引物扩增得到的片段大小与SmMYB的大小一致。
[0040] 表1茄子和马铃薯TTG1基因核苷酸的序列比对
[0041] eggplant ATGGATAATTCAAGTCAAGAATCGCATCTTCGATCTGAAAATTCCGTTACATATGACTCC 60 potato ATGGAGAATTCAAGTCAAGAATCGCATCTCCGGTCTGAAAATTCCGTTACATATGACTCC 60 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * eggplant TCTTATCCTATCTATGCCATGGCTGTTTCCTCCTTCCCTTCTTCCGTCCCGAGTCGCCGC 120
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[0043] eggplant TGGTCTGCTGCACAACGTGATTGGATTGCGATTGCGTTTTCTAACAAGTTGCAGCTGCTT 1020 potato TGGTCTGCTGCACAACGTGATTGGATTGCCATTGCGTTTTCTAACAAGTTGCAGCTGCTT 1020 ι^? ?|ν ι^? eggplant AAAGTATAA 1029 potato AAAGTATAA 1029
[0044] potato :马铃薯TTG1基因核苷酸序列（NCBI登录号为XM_006347458)
[0045] eggplant :爺子TTG1基因核苷酸序列
[0046] 表2茄子和马铃薯TTG1基因编码的氨基酸序列比对
[0047] eggplant MDNSSQESHLRSENSVTYDSSYPIYAMAVSSFPSSVPSRRRRIAVGSFIEEFNNRVDILC 60 potato MENSSQESHLRSENSVTYDSSYPIYAMAFSSFTSSIPSRRRRLAVGSFIEEFNNRVDILS 60 氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺* 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺 eggplant FDEDTLTLKPVPNLSFEHPYPPTKLMFHPNPSASLKSKDILASSGDYLRLWEVGDTSIEP 120 potato FDEDTLTLKPVPNLSFEHPYPPTKLMFHPNPSASLKTNDILASSGDYLRLWDVRETSIEP 120 氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺5^氺氺 eggplant LFTLSNNKTSEYCAPLTSFDWNEVEPRRIGTSSIDTTCTIWDVEKGAVETQLIAHDKEVY 180 potato LFTLSNNKTSEYCAPLTSFDWNEVEPRRIGTSSIDTTCTIWDVEKGVVETQLIAHDKEVY 180 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺 eggplant DIAffGEAGVFASVSADGSVRIFDLRDKEHSTIIYESPKPDTPLLRLAffNKQDLRYMATIL 240 potato DIAffGEAGVFASVSADGSVRIFDLRDKEHSTIIYESPKPDTPLLRLAffNKQDLRYMATIL 240 eggplant MDSNKVVILDIRSPAMPVAELERHQASVNAIAWAPQSCRHICSAGDDGQALIWELPTVAG 300 potato MDNNKIVILDIRSPAMPVAELERHQASVNAIAWAPQSCRHICSAGDDGQALIWELPTVAG 300 氺* 氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺 eggplant PNGIDPMSMYSAGAEINQIQWSAAQRDIIAIAFSNKLQLLKV 342 potato PNGIDPMSMYSAGAEINQIQWSAAQRDflAIAFSNKLQLLKV 342 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺
[0048] potato :马铃薯TTG1基因编码氨基酸序列（NCBI登录号XP_006347519)
[0049] eggplant :爺子TTG1基因编码氨基酸序列
[0050] 表3茄子和马铃薯GL3基因核苷酸的序列比对
[0051] eggplant ATGGCTATGGGACACCAAGACCAAGATGGAGTCCCAGATAACTTGAGAAAGCAGCTTGCT 60 potato ATGGCTATGGGACATCAAGATCAAGATGGAGTCCCAGGCAACTTGAGAAAGCAACTTGCT 60 eggplant CTTGCTGTTAGAGGCATTCAATGGAGCTATGCTATCTTTTGGTCAATTCCATTTACAGAA 120 potato CTTGCTGTTAGAGGCATTCAATGGAGCTATGCAATCTTCTGGTCAACTCCAGTTACACAA 120 氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺* 氺氺氺氺氺 *氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺;^氺氺氺 eggplant CCAGGCGTGTTGAAATGGAGTGATGGGTACTATAATGGGGATATCAAGACCAGGAAGACT 180 potato CCAGGGGTGTTGAAATGGATTGATGGGTACTATAATGGGGATATCAAGACCAGGAAGACT 180
[0052] eggplant CTTCAGGCAGGGGAAGTTAATGAAAACCAGCTGGGGCTGCAGAGAACTGAGCAATTGAM 240 potato GTTCAGGCGGGGGAAGTTAATGAAGACCAGCTGGGGTTGCAGAGAACTGAGCAATTGAAA 240 eggplant GAACTTTATAGTTCCCTCTTAACAGGTGyAyGTGAAGACG/CATACAACQCAGGCCAAA 300 potato GAACTTTATAGTTCCCTCTTAACAGGTGAAAGTGAAGAAGACCTACAGCCACAGGCCAAA 300 eggplant AGGCCGTCGGCTTCATTATCTCCGGAGGATCTCACTGATACAGACxTGGTATTTCTTAGTA 360 potato AGGCCGTCGGCCTCATTATCTCCAGAAGATCTCACTGATACAGAGTGGTATTTCCTAGTA 360 eggplant TGCATGTCATTCGTCTTCAGTGTTGGCCAAGGGTTGCCAGGGAAGACCTTCGTAACAAAT 420 potato TGCATGTCATTTGTCTTCGATGTTGGCCAAGGGTTGCCAGGGAAGACCTTAGCAACAAAT 420 *}|〇|<氺^:氺>jo|<5j<氺氺氺氺氺氺水冰冰承氺>|ο}<--?氺氺 eggplant GAAACAATCTGGCTTTGCAACGCTCACCAAGCCGAGAGTAGAGTCTTCTCTCGTTCTTTG 480 potato GAAACAGTCTGGCTATGCAACGCTCACCAAGCCGAGAGTAGAGTCTTTTCTCGTTCTTTG 480 eggplant CTAGCAAAGAGTGCATCTATCCAGACTGTTGTATGCTTTCCCTATTTAGGAGGCGTTATT 540 potato CTAGCAAAGAGTGCATCTATCCAGACTGTTGTATGCTTTCCCTATTTAGGAGGCGTAATT 540 * 本* * * * 本伞 * * 木承木伞氺:ij< >|<本 * * 木 >J?J< ^ojoji 木 * * * 氺氺 $ :^ojoj? * 木本 ** >{< 木:|ο|〇-- 木木 * 伞 * sj< * 申* eggplant GAGCTAGGAGTCACCGAGCTTGTCATAGAAGATCCCAACCTCATTCAGCAAATAAAAAAT 600 potato GAGCTGGGAGTCACCGAGCTTGTCACGGAAGATCCTAACCTCATTCAGCAAATAAyAAAT 600 *本冰* * >J?J<氺承承本木* * * * *容本木* * $ * **木$ *氺木*本* *伞$ * * *木*-本* *伞木本冰*承* eggplant TATTTTCTAGTGGTTGATCACTCCATTATTTCGAAGAAGCCTAATTATGTCTCCAATGAT 660 potato TCCTTTCTAGAGGTTGATCACTCCGTTATTTCGAAGAGGCCTAATTATGTCTCCAACGAT 660 氺氺本氺氺氺氺氺本氺氺伞*氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺氺本氺氺氺氺氺氺氺氺氺伞本本氺氺氺sj<本氺氺本:氺氺氺氺 eggplant GCAAAATATGACACAAATGTCGTTTTCCAAAAGCCTGATCATAATGCACTTGGAAGTGAT 720 potato GCAAAAAATGACACGAATATCGTTAGCCAAAAGCCTGATCATAATGCACTTGAAAATGAT 720 氺?|<氺氺氺氺氺氺氺氺本本氺氺本本氺氺水本本氺氺氺氺氺氺氺氺步:伞;氺氺氺氺氺氺氺氺本本本氺氺氺伞本氺氺氺氺氺氺 eggplant GCTTATCCAGTTGAAAACAACTACAGTTCACCTCATGATAGTTCAAATGGTTTTGTTGCC 780 potato GCTTATCCAGTTGAAA-----TA-AATTCACCTCATGATAGTTCAAATGGTTTTGTCGCC 774 eggplant AATCAAGAGGCAGAAGATTCATTGATGGTGGTAGACGTTATTGGGGAAACTTCACMGCT 8 potato AATCAAGAGGCAGAAGATTCACTGATGGTGGTAGACGGTATTGGGGAAACTTCACAAGCT 834 eggplant CAAAGCTGGAAGTTCATGGATGATAATATGAGTAATGAAGCGAATAATTCTTTCAATTCC 900 potato CAAAGCTGGAGGTTCATGGATGATAATATGAGTAATGGTGCGAATAATTCCTTGAATTCC 894 eggplant AGTGACTGCATCTCTCAAAACAATGCAAATTGTGAAAAGTTGTCCCCTCTTTCGAGTGGA 960 potato AGTGACTGCATCTCTCAAAACAATGCMATTGTGAAAAGTTGTCCCCTCTTTCGAGTGGA 954 eggplant GAGAAGGMACTAAGTTTCGTCTACTAGACCGGCAAGAGAATGATCAGAAGAAACCGCAT 1020 potato GAGAAGGMACTAAGCCTTGCCCACTAGACCATCAAGAGAACGATCAGAAGAAACCGCAT 1014 本中;承本本* $ 承本本氺本本本承* 冷:本本:氺本本*>!<氺本氺本*啦斗本本承$
[0053] eggplant CTTTTAGATCACCAAAGAGATGATGCTCAATATCMGCTGTCCTTTCTATCCTTCTAAAG 1080 potato CTTTTAGATCACCAAAGAGATGATGCTCAATATCMGCTGTCCTTTCTACTCTTCTAAAG 1074 eggplant AGT'lt.lOACCAAl'TMCTTTGGGACCACATl'Tl'AGAAATAl'TMCAAAAAGTCAACTl'Tl' 1140 potato AGTTCTGACCAATTMCTTTGGGACCACATTTTAGTAATATGMTAMAAGTCAAGTTrr 1134 eggplant GTTGGTTGGAAGAACGATATTCAGATGCCGCGATTAGGAACTGCACAAAAACTATTGAAG 1200 potato GCTGGTTGGAAGACCGATATTCAGATGCCGAGATTTGGAACTGCACAAAAACTATTGAAG 1194 eggplant AAAGTACTTCTTGAAGTTCCTAGAATGCATGGTGGTGTTGTACATCAATTCAGCAGAGAA 1260 potato AAGGTACTTCTTGAAGTACCTAGAATGCATGCTGGTGTTATACATAAATTCAGCAGAGAA 1254 eggplant AATGGTAAAAAGAACAGCCTTTGGAGACCAGAAGTTGATGACATTGATAGGAACTGTGTT 1320 potato AATGGTAAAAAGAACAGCCTTTGGAGACCAGAAGTTGATGACATTGATAGAAACCACGTT 1314 eggplant Al'Tl'CAGAGAGAAGGCGAAGAGAAAAGAl'AAAl'GAGAGATTTATGCAl'CTTGCTTCCATT 1380 potato ATTTCAGAGAGAAGGCGAAGAGAAAAGATAAATGAGAGATTTATGCATCTTGCATCGATG 1374 eggplant CTGCCAACTGGTAGCAAGGTTGACAAAATATCACTACTCGATGAGACAATAGAACACATG 1440 potato CTGCCGACTAGTAGCAAGGTTGACAAAATATCATTACTCGATGAGACAATAGAATACATG 1434 eggplant AAAGAGCTTGAAAGGAGAGTTCAAGAGCTGGAGGCTAGATCAGCAAGACGATCAAATGAT 1500 potato AAAGAGCTTGAAAGGAGAGTTCAAGAGCTGGAGGCCAGATCAGCAAGACGATCAAATGAT 1494 eggplant ACTGCAGAGCAGACATCTGATAATTGTGGCACTAGCAAATTCMTGACATCAGGGGATCA 1560 potato ACTGCAGAGCAGACATCTGATAATTGTGGCACTAGCAAATTCAATGACATCAGGGGATCA 1554
[0054] eggplant CTACCGAACAAACGGAAGGCATGTGATATGGATGAGATGGAACCTGAAAGCTGCAATGGA 1620 potato CTACTGAACAAAAGAAAGGCATGTGATATGGATGAAATGGAACCTGAAAGCTGCAATGGA 1614 eggplant TTATTGAAACGTAGTTCAGCTGATMTATTGTCATCAATATGATCGATAAGGAAGTCTCG 1680 potato TTACTGMACGTAGTTCAGCTGATAGTATTGTCATCAATATGATCGATAAGGAAGTCTCG 1674 * 氺 * * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 木 eggplant ATCAAGATGAGTTGTCTTTGGAGCGAGAGCTTGTTGCTTAAAATTATGGAGGCGCTGACT 1740 potato ATCAAGATGAGTTGTCTTTGGAGCGAGAGCTTGTTGCTTAAAATTATGGAGGCACTGACT 1734 eggplant GACCTACAAATGGATTGCCATACAGTTCAGTCTTCCAACATTGATGGGATTCTATTCATT 1800 potato GACCTACATATGGATTGCCATACAGTTCAGTCTTCCAACATTGATGGGATTCTATCCATT 1794 * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * * 氺 * 氺 * sji * * 氺 * 木 eggplant GCTATTGAATGCAAGTCGAGTAGATCGAAAACAGTAGCAGTTGGAACAATTAGAGAAGCA 1860 potato GCTATTGAATCCAAGTCAACTGGATCGAAAACAGTAGCAGTCGGAACAATTAGAGAAGCA 1854 eggplant CTTCAGAGAGCAGTTTGGAAATCTTGA 1887 potato CTTCAGAGAGTAGTTTGGAAATCTTGA 1881 氺氺*氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺*氺*氺氺氺氺氺*氺*
[0055] potato :马铃薯GL3基因核苷酸序列（NCBI登录号为XM_006343915)
[0056] eggplant :爺子GL3基因核苷酸序列
[0057] 表4茄子和马铃薯GL3基因编码的氨基酸序列比对
[0058] eggplant MAMGHQDQDGVPDNLRKQLALAVRGIQWSYAIFWSIPFTEPGVLKWSDGYYNGDIKTRKT 60 potato MAMGHQDQDGVPGNLRKQLALAVRGIQWSYAIFWSTPVTQPGVLKflDGYYNGDTKTRKT 60 氺氺*氺氺氺* 氺氺*氺氺*氺氺*氺氺氺 * >jc 氺*氺氺*氺氺氺* eggplant VQAGEVNENQLGLQRTEQLKELYSSLLTGESEDDIQPQAKRPSASLSPEDLTDTEWYFLV 120 potato VQAGEVNEDQLGLQRTEQLKELYSSLLTGESEEDLQPQAKRPSASLSPEDLTDTEWYFLV 120 eggplant CMSFVFSVGQGLPGKTFVTNETIWLCNAHQAESRVFSRSLLAKSASIQTVVCFPYLGGVI 180 potato CMSFVFDVGQGLPGKTLATNETVWLCNAHQAESRVFSRSLLAKSASIQTVVCFPYLGGVI 180 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺 eggplant ELGVTELVIEDPNLIQQIKNYFLVVDHSIISKKPNYVSNDAKTOTNVVFQKPDHNALGSD 240 potato ELGVTELVTEDPNLIQQIKNSFLEVDHSVISKRPNYVSNDAKNDTNIVSQKPDHNALEND 240
[0059] 乐! 乐! 乐！乐！乐! 乐! 乐! !^C eggplant AYPVENNYSSPHDSSNGFVANQEAEDSLMVVDVIGETSQAQSWKFMDDNMSNEANNSFNS 300 potato AYPVEINSP-HDSSNGFVANQEAEDSLMVVDGIGETSQAQSWRFMDDNMSNGANNSLNS 298 ?|χ ^Ji ^|c^|c^|c^|c^|c?Jc^> eggplant SDCISQNNANCEKLSPLSSGEKETKFRLLDRQENDQKKPHLLDHQRDDAQYQAVLSILLK 360 potato SDCISQNNANCEKLSPLSSGEKETKPCPLDHQENDQKKPHLLDHQRDDAQYQAVLSTLLK 358 ι^? eggplant SSDQLTLGPHFRNINKKSTFVGWKNDIQMPRLGTAQKLLKKVLLEVPRMHGGVVHQFSRE 420 potato SSDQLTLGPHFSNMNKKSSFAGWKTDIQMPRFGTAQKLLKKVLLEVPRMHAGVIHKFSRE 418 eggplant NGKKNSLWRPEVDDIDRNCVISERRRREKINERFMHLASILPTGSKVDKISLLDETIEHM 480 potato NGKKNSLWRPEVDDIDRNHVISERRRREKINERFMHLASMLPTSSKVDKISLLDETIEYM 478 氺氺氺木本木氺木氺氺氺木本木氺木氺氺木本木氺木氺氺氺木本木氺木氺氺氺木本木氺氺氺氺本木氺木氺氺氺木本木氺木氺氺 $ eggplant KELERRVQELEARSARRSNDTAEQTSDNCGTSKFNDIRGSLPNKRKACDMDEMEPESCNG 540 potato KELERRYQELEARSARRSNDTAEQTSDNCGTSKFNDIRGSLLNKRKACDMDEMEPESCNG 538 ι^? eggplant LLKRSSADNIVINMIDKEVSIKMSCLWSESLLLKIMEALTDLQMDCHTVQSSNIDGILFI 600 potato LLKRSSADSIVINMIDKEVSIKMSCLWSESLLLKIMEALTDLHMDCHTVQSSNIDGILSI 598 氺$氺氺氺氺氺氺 *氺氺氺氺氺氺氺$氺氺氺氺氺氺氺$氺氺氺氺氺氺氺$氺氺氺氺氺氺氺$ 氺氺氺氺氺氺$氺氺氺氺氺氺氺$ 氺 eggplant AIECKSSRSKTVAVGTIREALQRAVWKS 628 potato AIESKSTGSKTVAVGTIREALQRVVWKS 626 氺氺氺本木氺氺氺木本木氺木氺氺氺木本木氺氺氺氺$
[0060] potato :马铃薯GL3基因编码氨基酸序列（NCBI登录号NP_001275132)
[0061] eggplant :爺子GL3基因编码氨基酸序列
[0062] 表5茄子和马铃薯TT8基因核苷酸的序列比对
[0063] eggplant ATGGAGATTATACAGCCTAATAGCCTGCAGCTACAAACCATGTTGCGGGATTCCGTCCAG 60 potato ATGGAGATTATACAGCCTAATAGCCTGCAGTTACAAAACATGTTGCAGAATTCCGTCCAG 60 氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺* $氺氺氺*氺氺^:氺氺氺*氺* $ 氺氺*氺冷：本*氺氺氺* eggplant TCGATTAAATGGACGTATAGTCTTTTCTGGCAATTTTGTCCAAAACAAGGGGTGTTAGTG 120 potato TCGGTTAAATGGACTTATAGTCTTTTTTGGCAATTTTGTCCAAAACAAGGGGTGTTAGTG 120 eggplant TGGAGAGATGGATATTACAATGGGGCTATAAAGACTAGAAAGACTGTGCAGCCAATAGAA 180 potato TGGAGAGATGGATATTATAATGGAGCTATAAAGACAAGGAAAACTGTGCAGCCAATGGAA 180 ijc?|x?|x?|x ^|x^|x^|x eggplant GTTACTGCTGAAGAAGCTTCTCTTCATAGAAGCCAACAACTTAAAGAACTTTATGAATCA 240 potato GTTACTGCTGAAGAAGCTTCTCTTCATAGAAGCCAACAACTTAGAGAACTTTGTGATTCA 240 氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺*氺冷：本*氺氺氺氺冷：本*氺氺氺* 冷：本* 氺氺* eggplant CTTTCTGCCGGAGACTCAAATCAGCCGTCCAGAAGGCCGTCGGCTGCCTTGTCACCGGAG 300 potato CTTTCTGCCGGCGACTCAAATCCGCCGGCGAGAAGGCCGTCCGCAGCCTTGTCGCCAGAG 300 氺$5|<木氺木氺氺氺$氺氺木氺氺氺$5|<木氺木氺氺^:氺氺氺氺氺$5|<木氺木氺氺氺氺木木氺氺氺$5|<木氺氺氺 $5|<木 eggplant GACTTGACGGAATCCGAATGGTTTTATCTCATGTGTGTTTCTTTCTCTTTTCCTCCACCC 360 potato GATTTGACGGAATCCGAGTGGTTTTATCTCATGTGTGTTTCTTTCTCTTTTCCTCCACCT 360
[0064] 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺求氺氺氺氺氺氺氺氺本氺氺氺氺氺氺氺本氺氺氺氺氺沴氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺:氺氺氺氺氺:氺氺氺氺氺 eggplant ATTGGATTACCAGGGAAGGCTTATTCAAAGAAACATCACATATGGATAGTGGGCGCAAAC 420 potato TTTGGATTACCAGGCAAGGCTTATTCAAAGAAACATCACATATGCATAATGGGTGCAAAT 420 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺:氺氺氺氺氺氺氺氺水氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺本氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺;氺氺氺氺氺氺氺 eggplant GAGGTTGACAGTAAAGTCTTCTGTAGAGCTATTCTTGCAAAGAGTGCCCGCATACAGACT 480 potato GAGGTTGATAGCAAAGTCTTCTGTAGAGCTATTCTTGCTAAGAGTGCCCGCATACAGACT 480 ^ 5? !r|c eggplant GTCGTTTGTATTCCTCTATTGGACGGTGTAGTGGAACTGGGAACTACAGAAAGGGTTGAA 540 potato GTCGTTTGTATTCCTCTCTTGGACGGTGTAGTGGAACTGGGAACTACAGAAAGGGTTCAA 540 eggplant GAAGACATTGGATTCATACATCATATAAAAAGCTTCTTCACTGACxCAACCAC--------592 potato GAAGACATTGGATTCATACATCATGTMAAAGCTTCTTCAATGAGCAACAACAAGCTCAG 600 eggplant -CACCTAAGCCAGCTTTATCTGAGCACTCTACCTCCAATCCCACCGCCTTCTCGGAGCCA 651 potato CCACCAAAGCCAGCTTTATCTGAGCACTCCACTTCGGATCCCGCTGCCTTTTCGGAGCCA 660 eggplant TGTTTTTACTCCGGCAGTACTCCGTCATCCATTGATATTTGCCCAG---------ACGGT 702 potato CATTTTTACTCCAGCAATACTCCGTCATCCGCTGGTATTTGTCCAGCGGATCAAGACGGT 720 eggplant AGAACTGCTAGAGAAGAAGAAAATGAGGACGAGGACGAGGAAGAAGATGA-------------752 potato AGAATTGCTGGAGAAGAAGAAAATGAGGATGAGGATGAGGACGAGGATGAGGATGACGM 780 eggplant ------------TGATGAAGCTGAATTAGGCTCGAATGGTATAGCAGTTCAAAGTGGGCxTTGGG 804 potato GAAGAAAATGATGAAGTTGAATTAGACTCGGATGGTATAGCAATTCAAAGTGTTGCTGGG 840 氺氺氺氺氺氺氺ijc氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺：氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺:氺氺氺 eggplant TCGGCT---------------GAGGCTAGTGAGCTCATGCAGCTTGATATGTCTGAAGCT 849 potato GCGGCTAATCCTATAGCGGCTGAGGCTAGTGAGCTCATGCAGCTTGATATGTCTGAAACT 900 eggplant ATACGGCTTGGCTCCCCGGATGATGGCTCTAATAATATGGACTCTGATTTTCATTTGGTT 909 potato ATACGGCTCGGCTCGCCGGATGATGGGTCTAATAATATGGATACTGATTTATATTTGGAT 960 eggplant GGGGTTAGCCAAGCTGGAAATACAGCTGAAl'CTTTCAAAGCTGAGACTGCAATTAGTTGG 969 potato GGTATTAGCCAAGCTGGAAATACGGCTGACTCTTTCAAAGCTGAGACTGCAATTAGTTGG 1020 eggplant GCTAACTTCCAAGACCTTCAACATGTACCAGGTGTCCCTATTTATGATAAATTATCACAA 1029 potato GCl'AACTl'CCAAGACCTl'CAACAT'rTAACAGGl'GTCCCTAGl'TA'rGATGAATTATCACAA 1080 eggplant GAAGATAACCATTAl'TCCCAAACAGTATCAGCCGTTCTGGAACACCTCTCAAACACMGC 1089 potato GAAGATGCACATTATTCTCAAACAGTTTCAGCTGTACTTGAACACCTCTCAAACACAAGT 1140 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺球氺本本本氺氺本氺氺氺氺本本氺氺氺尜氺氺氺氺氺氺:氺氺氺尜氺氺氺氺本氺氺氺本本氺
[0065] eggplant --------- ACTACCGTAATGGGCTGTATTTCTCATGACTCAGCCCAATCC 1131 potato TCCAAATTTGCCTCTTCTACTACCATACTGGGCTCTATTTCTCCTGATTCAGCCCAATCC 1200 eggplant GCCTTCACATCATGGCCTACCAT'nOCAGCCCAAATCiXTCtX---------GCCACGAT 1182 potato GCTTTCACATTATGGCCCATCATTTGTAGCCCAAATCCCTCCCACTGCCATCGCCAAGAC 1260 氺氺本水氺氺氺氺氺氺jfc本氺氺氺本 5氺氺*氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺5K氺木氺氺氺氺氺氺氺氺氺 eggplant AATGGCGGGGGCAGCCGG CAGTGGCTGCTCAAAAGCATACTCTTCACTGTC 1233 potato GGCGGCGACGGCAGTGGGACCAGCTCCCAGTGGCTGCTCAAAAGCATACTATTCACTGTC 1320 eggplant CCATTTCTCCACAATAATAAATTACACCAATCAACTGAAGCTGAATCTCCAAAGTTG 1290 potato CCATTTCTCCACACTACTAAAAAATTACACCAATTACCAGAAGCTCTTTCTCCAAAGTCG 1380 eggplant CGTGAGATGGCGGTCGACTCATCGGCCACCGCTTCTCMTTCCAGAAAG-------- 1339 potato CGAGACGCTGCGGCCGATTCTTCAGCCGCAGCGTCTCGGTTCGGCAAAGGATGTACGATA 1440 eggplant -------------AGCAAGAAGAGCCGAGCGGGAATCATGTClTAGCX^AACGACX^rCGT 1386 potato AATAGTAGTACACAACAAGAAGAGACGAATGGGAACCATGTACTAGCGGAACGACGTCGT 1500 eggplant AGAGAGAAGCTGAACGAGCGTTTTATAATTTTAAGGTCTTTAGTCCCGTTCGTTACGAAA 1446 potato AGAGAGAAGCTGAATGAGCGTTT'rAri'ATTTTAAGGTCai'AGTACCGTTCGTTACGAAA 1560 eggplant ATGGATAAAGCATCGATACTTGGTGATACCATAGAGTATGTGAAGCAGTTACGTAAGAAA 1506 potato ATGGATAAAGCATCGATACTTGGTGATACAATAGAGTATGTGAAGCAGTTACGTAAGAAA 1620 eggplant GTTCACGATCTTGAAGCGCGTGCTCGTCACACACAGGCCATCACAGATGCAGATGAAAAC 1566 potato GTTCAGGATCTTGAAGCGCGTGATCGTCACGCGGAAACCACAAAAAATGCAGATGAAAAG 1680
[0066] eggplant AGTGGTACAGCAACAGTGAAGGGG---------------AAGAGGAGAATG--------- 1602 potato AGTGGTACAGCAACAGTGAAGGCGTTTTCGGGGAAGGATAAGAGGAGAATGAAGAGTGCG 1740 eggplant ―-GAGGAAAGTACTGGCGGAGGGGC---------------------------GGATGAG 1632 potato GTGGAGGGAAGTATAGGCGGAGCACCAACAAAGATCACCGCGTCTCCACCTATGGATGAG 1800 氺氺氺* 氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺 eggplant GAGGTTTTGCAAGTACAAGTTTCGATTATCGAGAACGATGCACTGGTGGAGCTCCGGTGT 1692 potato GAAGTTTTGCAAGTGGAAGTCTCAATCATCGAAAACGATGCACTGGTGGAGCTCCGGTGT 1860 eggplant CCGTACAAAGAAGGGTTGTTGTTAGATATAATGCAAATGCTAAGGGAACTCAAAGTTGAA 1752 potato CCGTACAAAGAAGGGTTGTTGTTAGATGTAATGCAAATGCTAAGGGAACTAAAAGTGGAA 1920 *氺氺冰:氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺 eggplant GTTGTAGCCATCCAGTCATCTCTTAATACCGGCATCTTAGTGGCTGAGTTAAGAGCCAAG 1812 potato GTTGTAGCAATCCAATCATCTCTTAATACTGGCCTCTTATTGGCTGAGTTAAGAGCTAAG 1980 eggplant GTAAAAGAAAATATATATGGAAGGAAAGCAAGCATTTTGGAAGTGAAAAAGTCAATACAT 1872 potato GTAAAAGAAGATATATATGGAAGGAAAGCAAGCATTTTGGAAGTGAAAAAGTCAATACAT 2040 eggplant CAGATAATCCCTAGAGTTAATTAA 1896 potato CAGATAATCCCTAGAGCTAATTAA 2064 木氺氺>j< * $氺$木氺氺>j< * $氺$ 氺氺>j< * $氺$
[0067] potato :马铃薯TT8基因核苷酸序列（NCBI登录号为NM_001288169)
[0068] eggplant :爺子TT8基因核苷酸序
[0069] 表6茄子和马铃薯ΤΤ8基因编码的氨基酸序列比对
[0070] eggplant MEIIQPNSLQLQTMLRDSVQSIKffTYSLFWQFCPKQGVLVWRDGYYNGAIKTRKTVQPIE 60 potato MEIIQPNSLQLQNMLQNSVQSVKWTYSLFffQFCPKQGVLVWRDGYYNGAIKTRKTYQPME 60 氺氺氺氺氺氺氺*氺氺氺氺氺氺氺氺氺>}< 氺*氺*氺氺氺氺氺*氺*氺氺氺氺氺*氺*氺氺氺氺氺*氺*氺氺氺氺氺*氺* 氺 eggplant VTAEEASLHRSQQLKELYESLSAGDSNQPSRRPSAALSPEDLTESEWFYLMCVSFSFPPP 120 potato VTAEEASLHRSQQLRELCDSLSAGDSNPPARRPSAALSPEDLTESEWFYLMCVSFSFPPP 120 氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺氺氺木氺氺木氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺氺氺氺木氺氺氺氺木 eggplant IGLPGKAYSKKHHIWIVGANEVDSKVFCRAILAKSARIQTYVCIPLLDGVVELGTTERVE 180
[0071] potato FGLPGKAYSKKHHIWIMGANEVDSKVFCRAILAKSARIQTVVCIPLLDGVVELGTTERVQ 180 eggplant EDIGFIHHIKSFFTEQPPP--KPALSEHSTSNPTAFSEPCFYSGSTPSSIDICPDGRT- 236 potato EDIGFIHHVKSFFNEQQQAQPPKPALSEHSTSDPAAFSEPHFYSSNTPSSAGICPADQDG 240 eggplant -AREEENEDEDEEED------DDEAELGSNGIAVQSGVGSAE-----ASELMQLDMSEA 283 potato RIAGEEENEDEDEDEDEDDEEENDEVELDSDGIAIQSVAGAANPIAAEASELMQLDMSET 300 eggplant IRLGSPDDGSNNMDSDFHLYGVSQAGNTAESFKAETAISWANFQDLQHVPGVPIYDKLSQ 343 potato IRLGSPDDGSNNMDTDLYLDGISQAGNTADSFKAETAISWANFQDLQHLTGVPSYDELSQ 360 ^|xi<|> ?|> ?|x?|x?|^?|>?{>?|x?|^?|>?{><|^?|> eggplant EDNHYSQTVSAYLEHLSNTSTTVMGCI------SHDSAQSAFTSWPTICSPNPSRHDNGG 397 potato EDAHYSQTVSAVLEHLSNTSSKFASSTTILGSISPDSAQSAFTLWPIICSPNPSHCHRQD 420 eggplant GSRQ------WLLKSILFTVPFLHNNKL-HQSTEAESPKLREMAVDSSATASQFQKEQEE 450 potato GGDGSGTSSQWLLKSILFTVPFLHTTKKLHQLPEALSPKSRDAAADSSAAASRFGKGCTI 480 木氺木木jji氺本木jjc木木木jji氺氺木 ** 水木木木氺木木氺本木木木木氺 eggplant PSGN--------HVLAERRRREKLNERFIILRSLVPFVTKMDKASILGDTIEYVKQLRKK 502 potato NSSTQQEETNGNHVLAERRRREKLNERFIILRSLVPFVTKMDKASILGDTIEYVKQLRKK 540 ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> ?|χ ?|^ ?|> ?{> eggplant VHDLEARARHTQAITDADENSGTATVK-GKRRMEESTGGG----------------ADE 544 potato VQDLEARDRHAETTKNADEKSGTATVKAFSGKDKRRMKSAVEGSIGGAPTKITASPPMDE 600 ^|c eggplant EVLQVQVSIIENDALVELRCPYKEGLLLDIMQMLRELKVEVVAIQSSLNTGILYAELRAK 604 potato EVLQVEVSIIENDALYELRCPYKEGLLLDVMQMLRELKVEVVAIQSSLNTGLLLAELRAK 660 eggplant VKENIYGRKASILEVKKSIHQIIPRVN 631 potato VKEDIYGRKASILEVKKSIHQIIPRAN 687 ^|c ^|c
[0072] potato :马铃薯TT8基因编码氨基酸序列（NCBI登录号NP_001275098)
[0073] eggplant :爺子TT8基因编码氨基酸序列
[0074] 步骤二，茄子SmTTGl，SmGL3, SmTT8基因组织表达分析；
[0075] 分别取等量已进行浓度和质量检测的茄子的根、茎、叶、花、果皮和果肉，RNA反转录成cDNA后稀释成引物工作的最佳倍数，按照Takara试剂盒SYBK?> Premix Ex TagTM(Tli RnaseHPlus)步骤进行荧光半定量PCR反应。以茄子Actin作为内参，设计特异引物 SmAction-F和SmAction-R (附表1)，对茄子各器官进行荧光半定量PCR检测。利用Funglyn 公司FTC-3000型荧光定量PCR仪进行反应，程序如下：
[0076] Running Parameters: Stage: 1 Total Cycles: 1
[0077] Stepl 94.0°C for 30. Os Stage: 2 Total Cycles: 40 Stepl 94.0°C for 8. Os Step2 6Q. 0°C for 34.0s
[0078] 荧光定量PCR设置在stage2的st印2进行信号采集。定量PCR的方法采用相对定量法，通过与内参基因 ACTIN的Ct值之差计算基因表达差异，即2_Δ 法定量。定量PCR 弓丨物序列见表7。结果显示，三个基因在根、茎、也、花、果皮、果肉中均有表达，但在不同组织中表达量不同。SmTTGl基因在叶片中表达水平最高，显著高于其他各组织；在其他组织中表达量相当，无显著性差异。SmGL3基因在茎中表达量最高显著高于其他各组织，其次是花和果肉，在根和叶中表达量很低。SmTT8在果皮中的表达量最高，在茎中也有显著表达，在根、叶、花、果肉中表达量低，且无显著性差异。
[0079] 表7定量PCR引物序列
[0080]

【权利要求】
1. 一种茄子花青素合成相关基因，其特征在于，所述基因为SmTTGl基因、或SmGL3基因、或SmTT8基因；所述SmTTGl基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 2所示；所述SmGL3基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 4所示；所述SmTT8基因编码的氨基酸序列如SEQ ID NO. 6所示。
2. 如权利要求1所述的茄子花青素合成相关基因，其特征在于，所述SmTTGl基因的序列如SEQ ID NO. 1所示。
3. 如权利要求1所述的茄子花青素合成相关基因，其特征在于，所述SmGL3基因的序列如 SEQ ID NO. 3 所示。
4. 如权利要求1所述的茄子花青素合成相关基因，其特征在于，所述SmTT8基因的序列如 SEQ ID NO. 5 所示。
【文档编号】C07K14/415GK104059926SQ201410289033
【公开日】2014年9月24日申请日期:2014年6月24日优先权日:2014年6月24日
【发明者】陈火英, 刘新宇, 张国刚, 葛海燕, 韩洪强, 周腾夏, 高莉洁, 蒋明敏申请人:上海交通大学