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一种利用黄绿木霉发酵制备烟用茉莉花香料的方法

花匠小妙招
2025-08-13 06:52

一种利用黄绿木霉发酵制备烟用茉莉花香料的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于微生物发酵及其应用领域，具体设及一株黄绿木霉新菌株。同时，本发明还设及利用该菌株制备烟用莱莉花香料的方法。
【背景技术】
[0002] 加香加料是卷烟工艺中的关键环节，是有效提升卷烟抽吸品质，形成卷烟特有风格的有效手段之一。目前我国烟草中添加的烟用香料大多是采用传统方法萃取再加 W调配所得，虽然生产操作简单，但也存在香气单调、改善卷烟抽吸效果不明显等缺点。利用微生物对香原料进行发酵可W增加传统提取香料中多种香气物质的含量，提升香气丰富性，进而生产出香气丰富、高品质的卷烟，满足消费者对卷烟品质的要求。
[0003] 莱莉，拉下文名：Jasminum sambaclX. )Ait，木犀科灌木。花期5-8月，果期7-9月。莱莉的花极香，为著名的花茶原料及重要的香精原料;花、叶药用治目赤肿痛，并有止咳化疲之效。
[0004]木霉菌(Trichoderma spp.)广泛分布于自然界，在腐木、种巧、植物残体、有机肥、 ±壤和空气中尤多。木霉菌生长营养要求简单，生长速度快，对于工业化生产十分有利。黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)为木霉属的一种，作为一种重要的生防因子，对植物病原的括抗作用具有广谱性、多制性，还能产生多种酶类分解±壤中的动植物残体，增加±壤肥力。已有对黄绿木霉的报道多集中在±壤改良、生物防治及生物肥料等方面。现有技术中尚未见将黄绿木霉用于莱莉花发酵制备烟用香料的报道。

【发明内容】

[0005] 本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一株黄绿木霉新菌株，该菌株具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。
[0006] 本发明的目的还在于提供一种利用该菌株发酵制备莱莉花烟用香料的方法。
[0007] 本发明的目的通过W下技术方案予W实现。
[000引除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。
[0009] 一种黄绿木霉（Trichoderma aureoviride化LMM-04菌株，CGMCC No. 10839,其具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。
[0010] 利用所述菌株制备烟用香料的方法，包括W下步骤：
[0011] (1)将黄绿木霉HLMM-04 CGMCC No. 10839菌株活化两次后，接种于装有200血PDA 液体培养基的S角瓶中，在20~35 °C，1 SOrpm下发酵培养1~7d;所述的PDA液体培养基：马铃馨200g，葡萄糖20g，补蒸馈水至lL，p册.5~8.5，115°C高压灭菌15min;
[0012] (2)发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸氨至80%饱和度，4°C下静置过夜，离屯、收集沉淀物并溶于2mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液;所述的缓冲液为：0.02mol/L Na2HP〇4-fe也P〇4，pH 7.3;
[0013] (3)将干莱莉花朵进行破碎后，喷洒黄绿木霉HLMM-04粗酶液，发酵，粗酶液添加量为莱莉花朵质量的20%，发酵溫度为30°C，发酵时间化;再加入两倍重量的水，回流提取化，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需烟用香料。
[0014] 进一步的，为防止香料变质，按烟用香料重量的5%添加丙二醇。
[0015] 步骤(1)中最适宜的产香条件为初始抑6.5,培养溫度28°C，培养时间5d。
[0016] 相对于现有技术，本发明具有W下优点：
[0017] (1)本发明首次将黄绿木霉应用于烟用香料制备领域。采用黄绿木霉HLMM-04菌株发酵液处理莱莉花，与未处理对照相比，在原有莱莉花特征香气保持的同时，香气丰富性增加，花香更加突出。
[0018] (2)本发明成本低廉，操作简单，便于实现大规模工业化生产，应用前景良好。
[0019] 保藏生物材料的说明
[0020] 本发明的菌株，已于2015年5月22日，保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、(CGMCG);该中屯、地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。该菌株分类命名为黄绿木霉（Trichoderma aureoViride)HLMM-04，保藏号为 CGMCC No.10839。
【具体实施方式】
[0021] 下面通过实施例对本发明做进一步的详细说明，但实施例并不是对本发明技术方案的限定。
[0022] 实施例1
[0023] 1、黄绿木霉HLMM-04菌株的适宜产酶条件
[0024] 1.1培养基初始抑对HLMM-04菌株产酶的影响
[00巧]将液体培养基的抑分别调到5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5,在28°C、120巧m下振荡培养3天后，测定纤维素酶活，表明最适宜的初始抑为6.5。
[0026] 1.2培养溫度对HLMM-04菌株产酶的影响
[0027] 将接种后的液体发酵培养基分别置于20°C、25°C、28°C、32°C、35°C下，120r/min振荡培养3d后，测定纤维素酶活，表明最适宜的培养溫度为28°C。
[0028] 1.3培养时间对HLMM-04菌株产酶的影响
[0029] 将接种好的液体培养基(pH 6.5)置于恒溫恒湿箱中，281：，120以111111振荡培养，每 24h测定一次纤维素酶活，培养到第5天时纤维素酶活达到最大值。
[0030] 2、黄绿木霉HLMM-04粗酶液制备方法
[0031] 根据W上优化结果，将黄绿木霉HLMM-04菌株活化两次后，接种于装有200mL PDA 液体培养基(pH 6.5)的=角瓶中，在28°C，ISOrpm下发酵培养5d。过滤去除菌体。取上清液缓慢加入硫酸氨至80 %饱和度，4 °C下静置过夜，离屯、收集沉淀物并溶于2mL缓冲液 (0.02mol/L化抽P04-化此P04的缓冲液，pH7.3)中，用同样的缓冲液进行透析，得到粗酶液。
[0032] 3、黄绿木霉HLMM-04菌株发酵制备烟用香料的方法
[0033] 将干莱莉花朵进行适当破碎后，喷洒黄绿木霉HLMM-04粗酶液，发酵，粗酶液添加量为莱莉花质量的20%，发酵溫度为30°C，发酵时间化;再加入两倍重量的水，回流提取化，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得莱莉花发酵烟用香料。
[0034]为防止变质，按发酵香料重量的5 %添加丙二醇。
[0(X3日]4、产品特征及理化性质
[0036] 所得发酵烟用香料为红栋色流状膏体，不澄清。产品理化性质见表1。
[0037] 表1黄绿木霉HLMM-04发酵莱莉花香料的理化指标 [00；3 引

[0039] 5、卷烟加香实验
[0040] 取莱莉花发酵烟用香料0 . Ig，取无菌水稀释50倍后，均匀喷洒在50g未加香叶组中，装入干净的密封袋内，于室溫下放置化后，将烟丝于120°C烘箱中烘干，使水分含量达到 11 %-13 %。将处理后的烟丝及对照放入恒溫恒湿箱中，在溫度22°C、湿度60 %条件下平衡 2地，手工卷制成卷烟，由评吸专家组成的评吸小组进行感官评吸。W未发酵莱莉花提取香料及枯草芽抱杆菌发酵莱莉花香料为对照。加香结果表明，莱莉花黄绿木霉HLMM-04发酵香料与对照区别明显，具有丰富香气的作用，增加卷烟花香效果明显。评价结果见表2。
[0041 ]表2莱莉花发酵香料评吸结果
[0042]

【主权项】
1. 一种黄绿木霉（Trichoderma aureoviride)HLMM_04菌株，CGMCC No. 10839,其具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。2. 利用权利要求1所述菌株制备烟用香料的方法，包括以下步骤： (1) 将黄绿木霉见]/^-04061〇：如.10839菌株活化两次后，接种于装有2001^?0纟液体培养基的三角瓶中，在20~35°C，180rpm下发酵培养1~7d;所述的PDA液体培养基：马铃薯 200g，葡萄糖20g，补蒸馏水至lL，pH5.5~8.5,115°C高压灭菌15min; (2) 发酵液过滤去除菌体，取上清液缓慢加入硫酸氨至80%饱和度，4°C下静置过夜，离心收集沉淀物并溶于2mL缓冲液中，再用缓冲液进行透析，得到粗酶液;所述的缓冲液为： 0.02mol/L Na2HP〇4-NaH2P〇4,pH 7.3； (3) 将干茉莉花朵进行破碎后，喷洒黄绿木霉HLMM-04粗酶液，发酵，粗酶液添加量为茉莉花朵质量的20%，发酵温度为30°C，发酵时间5h;再加入两倍重量的水，回流提取3h，过滤除渣，将上清液减压浓缩，即得所需烟用香料。3. 根据权利要求2所述的制备烟用香料的方法，其特征在于：为防止香料变质，按烟用香料重量的5 %添加丙二醇。4. 根据权利要求2所述的制备烟用香料的方法，其特征在于：步骤（1)中最适宜的发酵培养条件为初始pH 6.5，培养温度28 °C，培养时间5d。
【专利摘要】本发明公开了一种利用黄绿木霉发酵制备烟用茉莉花香料的方法。所述菌株为黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)HLMM?04 CGMCC No.10839，具有产纤维素酶，进而促进纤维素分解成寡糖或单糖的能力。将菌株通过活化、发酵、过滤、透析制得纤维素酶粗酶液，用于发酵茉莉花，再经提取、过滤、减压浓缩制成烟用香料。HLMM?04菌株的最适产酶条件为培养基初始pH为6.5，培养温度为28℃，培养时间为5d。加香结果表明，所制备的香料具有丰富香气、增加卷烟花香的作用。CGMCC No. 1083920150522
【IPC分类】C12N1/14, C12R1/885, C12P1/02, A24B3/12
【公开号】CN105713842
【申请号】CN201610239576
【发明人】陈兴, 段焰青, 者为, 曾熠程, 夏建军, 王文元, 刘亚
【申请人】云南中烟工业有限责任公司