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一株野生鸡腿菇菌株及其栽培方法与流程

花匠小妙招
2025-09-02 19:50

本发明属于微生物技术领域，涉及一株野生鸡腿菇菌株及其栽培方法。

背景技术：

鸡腿菇，学名毛头鬼伞(coprinascomatus)，属真菌门、担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、鬼伞科、鬼伞属，是新近推出的珍稀食用菌之一，被世界卫生组织(who)及联合国粮农组织(fao)确定为集“天然、营养、保健”三种功能于一体的珍稀食用菌。鲜鸡腿菇味道鲜美，营养丰富，每100g干菇中含粗蛋白质25.4g，脂肪3.3g，总糖58.9g(其中无氮碳水化合物51.1g)，纤维素7.3g，灰分12.5g。鸡腿菇含有20种氨基酸(包括8种人体必需的氨基酸)，菌盖中的氨基酸以天门冬氨基酸、天门冬酰胺、谷氨酸为主，菌柄中的氨基酸以谷氨酰胺、甘氨酸、苏氨酸、鸟氨酸、缬氨酸、异亮氨酸和赖氨酸等为主。具有增强机体免疫、降血糖、降血压和改善心律、抑制肿瘤的作用。

鸡腿菇是一种分布广泛易于栽培的草腐土生菌类，即可用熟料栽培、也可用发酵料栽培。目前鸡腿菇产品主要采用罐藏、腌制和干制来延长供应期，鲜销较少，主要原因是贮运过程中易出现开伞、褐变、自溶等现象，失去商品价值。一般鸡腿菇菌株保鲜时间为3～7天，限制了鸡腿菇产业发展。

技术实现要素：

本发明的目的是提供一株野生菌株鸡腿菇及其栽培方法，该菌株抗杂能力强、菌柄粗壮、产量高、颜色洁白、鳞片少、不易开伞，而且保鲜期长，适时采收1～3℃可保鲜10天左右。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一株野生菌株鸡腿菇(copyindscomatus(muii.fr)gray)，菌号为鸡腿菇2008，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年7月6日，保藏编号为cgmccno.11004。

一种上述野生菌株鸡腿菇的栽培方法，采用稻草二次发酵法，棚内层架式栽培。

本发明的鸡腿菇2008在cpda培养基上25℃暗光培养，气生菌丝强、呈绒毛状，长势强，边缘整齐，爬壁能力强，菌丝长速快，平均日长速在0.69cm/d。

本发明的鸡腿菇2008菇体较大，菌柄粗大，菌盖不易开伞，子实体颜色洁白，鳞片少呈浅褐色。

本发明的鸡腿菇2008经拮抗试验、dna指纹(issr)图谱分析与相比对的15个试验菌株有差异，而且菌株菌柄粗壮，保鲜期长，适时采收1～3℃可保鲜10天左右。

保藏信息：

分类命名：毛头鬼伞copyindscomatus；

保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；

保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；

保藏日期：2015年7月6日；

保藏编号：cgmccno.11004。

附图说明

图1为鸡腿菇2008菌丝生长情况。

图2为鸡腿菇2008出菇子实体形态。

图3为鸡腿菇2008与其他鸡腿菇菌株拮抗试验结果，a-鸡腿菇2008与供试菌株4号(鸡腿5l0460)、5号(鸡腿5l0761)有拮抗现象；b-鸡腿菇2008与供试菌株1号(鸡腿1号)、8号(鸡腿30)有拮抗现象；c-鸡腿菇2008与供试菌株3号(鸡腿5l0459)、5号(鸡腿5l0761)有拮抗现象；d-鸡腿菇2008与供试菌株2号(山东鸡腿)、9号(鸡腿201)有拮抗现象；e-鸡腿菇2008与供试菌株7号(北京鸡腿)、11号(鸡腿2160)有拮抗现象；f-鸡腿菇2008与供试菌株12号(鸡腿cc180)、13号(co003)有拮抗现象；g-鸡腿菇2008与供试菌株14号(co006)、15号(co009)有拮抗现象；h-鸡腿菇2008与供试菌株16号(co0013)、17号(福建鸡腿菇)有拮抗现象。

图4为引物6((ag)8yt)扩增鸡腿菇dna指纹图谱，从左至右第1泳道：dnamarkerdl2000；第2泳道：鸡腿1号；第3泳道：山东鸡腿；第4泳道：鸡腿5l0459；第5泳道：鸡腿5l0460；第6泳道：鸡腿5l0761；第7泳道：鸡腿2008；第8泳道：北京鸡腿；第9泳道：鸡腿30；第10泳道：鸡腿201；第11泳道：鸡腿2160；第12泳道：鸡腿cc180；第13泳道：co003；第14泳道：co006；第15泳道：co009；第16泳道：co0013；第17泳道：福建鸡腿菇。

图5为引物9(hvh(tg)7)扩增鸡腿菇dna指纹图谱，从左至右第1泳道：dnamarkerdl2000；第2泳道：鸡腿1号；第3泳道：山东鸡腿；第4泳道：鸡腿5l0459；第5泳道：鸡腿5l0460；第6泳道：鸡腿5l0761；第7泳道：鸡腿2008；第8泳道：北京鸡腿；第9泳道；鸡腿30；第10泳道：鸡腿201；第11泳道：鸡腿2160；第12泳道：鸡腿cc180；第13泳道：co003；第14泳道：co006；第15泳道：co009；第16泳道：co0013；第17泳道：福建鸡腿菇。

具体实施方式

下面结合附图对本发明的技术方案作进一步的说明，但并不局限于此，凡是对本发明技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的保护范围中。

具体实施方式一：本实施方式提供了一株野生菌株鸡腿菇2008，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2015年7月6日，保藏编号为cgmccno.11004。

由图1可知，鸡腿菇2008在cpda培养基上25℃暗光培养，气生菌丝强、呈绒毛状，长势强，边缘整齐，爬壁能力强，菌丝长速快，平均日长速在0.69cm/d。

由图2可知，鸡腿菇2008菇体较大，菌柄粗大，菌盖不易开伞，子实体颜色洁白，鳞片少呈浅褐色。

拮抗试验：

拮抗试验是鉴定菌株间遗传差异的传统方法，菌丝之间的拮抗反应是不同菌株间遗传特性的重要表现。供试菌株之间在平板交界处正面是否有隆起、背面是否产生褐色拮抗线是判定菌株间是否具有拮抗反应的标准，产生褐色拮抗线的两菌株为不同的菌株，无拮抗线菌株有可能是同一菌株。

本实施方式的拮抗试验操作如下：将野生鸡腿菇2008与其它15个供试菌株(表1)分别取2×2mm2活化纯培养物成对接入cpda平板培养基中(相距2cm)，重复3次。25℃培养15天观察拮抗现象。通过对供试各菌株拮抗反应分析(图3)，确定野生鸡腿菇2008与其他供试15个菌株间都有隆起的褐色拮抗线，拮抗现象显著。确认野生鸡腿菇2008的独特性，与供试的其他15个菌株非是同一个菌株。

表1对峙试验和issr对比试验使用的鸡腿菇菌株

dna指纹图谱(issr)分析：

本实施方式所用issr引物由上海生工合成，引物编号及其序列见表2。

表2issr引物编号及其序列

菌丝体制备及dna提取：取cpda液体培养基80ml装入250ml三角瓶，121℃灭菌30min，冷却后接入菌株适龄菌丝，25℃静止培养2～3d，再130r/min摇床培养3～5d，菌球圆润，无色素产生即可。使用tiangen新型植物基因组dna提取试剂盒提取dna。

issr扩增反应总体积25μl：其中包括1×buffer，0.1mmol/lmgcl2，0.1mmol/ldntps，15ngissr引物，15～25ng模板dna，0.5utaqdna聚合酶。以无菌双蒸水代替模板dna作阴性对照。

反应程序为：94℃预变性5min，然后94℃变性45s，53℃复性40s，72℃延伸70s，进行35个循坏，最后72℃延伸7min。pcr产物用1.2％琼脂糖凝胶电泳，gel-dye染色，凝胶成像扫描记录结果。

共使用19个issr引物，对野生鸡腿菇2008和其它15个供试鸡腿菇菌株进行扩增，有11个引物可扩增出差异性谱带，对issr扩增dna指纹图谱进行人工比对分析，有条带记为1，无条带记为0，构建初始0、1数据矩阵，使用ntsys聚类分析软件进行聚类分析，16个菌株间相似系数在82～100％，取相似系数90％可将供试的16个鸡腿菇菌株分为以下3个类群：

第一类群：1号、4号、5号、7号、8号、9号、11号、13号、15号、17号菌株；

第二类群：2号、3号、12号、14号、16号菌株；

第三类群：6号菌株。

同时，6号引物和9号引物可扩增到鸡腿菇2008的特异性dna谱带a和b，而其它供试菌株未扩增到特异性dna谱带a和b，说明野生鸡腿菇2008(6号菌株)与其他鸡腿菇之间亲缘关系较远，非同一菌株，结果见图4～5。

具体实施方式二：本实施方式提供了一种鸡腿菇2008的栽培方法，该方法使用鸡腿菇2008，采用稻草二次发酵法，棚内层架式栽培，采收5潮，生物转化率达150％以上。具体要求如下：

1)栽培季节

鸡腿菇2008是中低温型品种，出菇温度范围在18～22℃，自然气候以春、秋季栽培较为适宜，工厂化生产可以周年栽培。

2)原种生产

母种只用于移植扩繁原种，一支母种扩繁原种6～8瓶(袋)；采用谷粒，以500～750ml玻璃菌种瓶。原种培养基为：麦粒100kg、碳酸钙1kg。制作过程：将小麦粒用水浸泡12小时后，煮至麦粒熟而不开花，滤去水分，滤液可制母种培养基或栽培时拌料用。摊在通风处晾30～40分钟，使麦粒表皮不湿为宜，加碳酸钙拌匀后装瓶，高压灭菌1.5小时。接种后，25℃下恒温培养，长满备用。

3)发酵料栽培法

发酵料配方：稻草240kg(干重)，干牛粪160kg(干重)，饼肥10kg，尿素2kg，硫酸铵3.5kg，石灰10kg，石膏5kg。配方中碳酸比为30～33：1。

采用二次发酵法，发酵第6d料心温度达75℃时进行第一次翻堆，以后每隔3d、3d、2d当料心温度达70℃时翻堆；二次发酵5d，料温维持在60℃左右，从建堆到发酵完毕一般需要24d。发酵好的料呈咖啡色，有酱香味而无酸臭味，含水量在65％左右(指缝有水泌出)，ph6.5左右。室内层架式床栽，当发酵料温降到30℃以下时，应及时趁热播种，铺料、播种、铺料、播种(3层料，3层种)，料总厚度15-20cm，用种量约15％，适当压实，盖薄膜。

4)发菌管理

培养温度20～25℃，培养湿度70％左右，暗光培养，培养后期加大通风，约20天左右菌丝长满。

5)覆土管理

覆土时机是菌丝长满。选择黏性的菜园土，拌入2％的石灰，0.2％的磷酸二氢钾，用石灰水调湿度，比常规湿度偏大些，使土能搓圆捏扁，装入一个带盖大桶，用木棍戳洞到底，倒入少许杀虫剂，然后点燃一袋气雾消毒剂，放入洞内，密封3天后使用。覆土厚度约3cm厚，覆土后保持土壤湿润，光线暗、空气新，气温20～26℃，气湿80％。

6)出菇管理

出菇温度保持在18～22℃，提高空气湿度85～90％，创造温差，加强光照及通气条件。覆土后15～20天现蕾。一般9～10天进入采菇期。勿向菇体直接喷水(易变色)，防喷水不当致菇体变黄，最好用较细的水管浇注于菇丛缝隙中。喷水后要注意通风，勿形成闷湿环境。适宜的喷水通风应根据天气及菇的生长情况而灵活掌握。

7)鸡腿菇的采收

鸡腿菇采收必须在菌盖含苞未放、菌环未松动、5～6成熟时采收，采收时用手握住菌柄轻轻旋转就可以采下来。然后用竹片刮净菇脚泥土和菇盖鳞片，处理后，鸡腿菇置于1～3℃保鲜或直接进行深加工处理。