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利用天麻抗真菌蛋白基因（gafp）培育抗枯、黄萎病陆地棉的研究

花匠小妙招
2024-10-08 05:52

【摘要】： 棉花枯、黄萎病是棉花生产中最重要的真菌病害,已成为制约我国棉花生产的突出问题,实践证明选育和利用抗病棉花品种是最经济有效的方法。天麻抗真菌蛋白(gastrodia antifungal protein简称GAFP)是从我国传统中药天麻(Gastrodia elata Bl.)中分离得到的一种具有广谱抗真菌活性的蛋白质,它对许多植物真菌病的致病菌离体具有很强的抑制作用,因此在植物抗真菌病基因工程上有很重要的应用价值。通过转基因技术可以打破物种间的生殖隔离而充分利用自然界中的基因,为选育新品种提供了全新的和有效的辅助途径。本研究首先通过花粉管通道转化法,将天麻抗真菌蛋白(GAFP)的基因gafp转入3个新疆陆地棉栽培品种(系)中,然后将所获得的转化植株后代在棉花枯、黄萎病混生病圃中进行抗病鉴定,通过筛选试图获得对黄、枯萎病的有显著抵抗能力的棉花新材料。主要研究结果如下: 1、优化了现有的花粉管通道法转化棉花的技术体系。为了提高花粉管通道法转化棉花的频率,研究了影响转化效率因素。发现进行注射的最佳时间为授粉后15～25小时,最适注射部位为棉花子房中座,质粒DNA的注射量为0.02～0.04ug/ul。 2、进行了陆地棉植株抗生素涂抹敏感性实验,确定了筛选的适宜浓度,卡那霉素涂抹筛选浓度为0.75～1.00%(w/v)。将所获得的转化后代在大田种植后经卡那霉素标记基因抗性筛选,获得抗性植株58株。 3、将所得到的抗卡那霉素58株阳性植株经枯、黄萎病混生病圃抗病性调查和鉴定、Southern点杂交及PCR扩增检测,证实得到了2株高抗枯、黄萎病的转基因植株。其后代经过进一步的抗病性筛选和鉴定以及选育利扩繁,发现转基因陆地棉后代具有稳定的、较强抗枯、黄萎病能力。 4、本研究工作为通过植物抗病基因工程的方法防治棉花枯、黄萎病提供了一条新的途径。

【学位授予单位】：中国农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005

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