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花药培养方法.ppt

花匠小妙招
2025-11-11 09:06

2021/5/4 * 花药培养应注意的问题而花药“竖放”时,只有一个药爿接触培养基,上部的一个药爿完全曝露于空气中,使其中的花粉处于良好的通气环境中。当花药“竖放”时,不但绝大多数的花粉愈伤组织都发生在上部药爿的两个药室中,而且这种愈伤组织的质量好,有较强的胚胎的发生能力。 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题（2）培养条件:包括温度、湿度和光照温度:离体培养的花药对温度很敏感。早期的培养温度一般为25～28度,最近发现较高的温度有利于愈伤组织的诱导和绿苗的分化,一般在30～32度之间。诱导愈伤的温度要比分化时的温度要高点好。 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题光照:离体花药对光照的反应在烟草和曼陀罗上是不同的,连续光照可明显增加烟草花粉胚的产量,但却强烈抑制曼陀罗的花粉胚胎的发生。对禾本科植物来说,一般主张愈伤组织的诱导期间进行暗培养或给以弱光或散射光处理效果较好。 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题愈伤组织的分化原则上都应在光照下进行,但光照长度和给光时间不同植物要求不同。“先暗后光”是常用的方法之一,即愈伤组织转入分化培养基之后,先在暗中培养3～5天,在愈伤组织适应天低生长素、高细胞分裂素的分化培养,并开始增长之后,再给每天14小时1000～2000lx的光照。 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题 7.花药培养中的花粉发育过程（1）营养细胞发育途径?? 在花药离体培养中,花粉第一次有丝分裂形成不均等的营养核和生殖核。生殖核较小,一般不分裂或只分裂1-2次,就逐步退化。而体积大的营养核经多次分裂且形成了细胞壁,最后变成了多细胞团,迅速生长,很快突破细胞壁,细胞团不断分裂,穿破药壁,可以产生胚状体或愈伤组织。?? 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题（2）生殖细胞发育途径?? 在这种途径下,营养核只分裂1-2次就退化了,而生殖核经多次分裂发育成多细胞团。 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题（3）营养细胞和生殖细胞同时发育的途径?? 花粉第一次有丝分裂形成的营养核和生殖核同时进行多次分裂,因此最后形成的多细胞团包括两部分,一部分细胞较大的是营养细胞分裂而来;另一部分细胞较小的是由生殖细胞分裂而来。?? 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题（4）花粉均等分裂途径?? 花粉进行均等分裂形成两个均等的子核,以后二核间产生壁,形成两个子细胞,由两个子细胞形成多细胞团,迅速生长,穿破药壁而形成胚状体或愈伤组织。 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题 8　花粉植株的倍性及染色体加倍技术（1）花粉植株的倍性:由花粉发育成的花粉植株,并不象所期望的那样完全是单倍体,其中不但有二倍体,还有多倍体和非整倍体。花粉植株自然加倍主要是通过核内有丝分裂进行的。已经查明,核内有丝分裂与接种花粉的发育时间、培养基中激素的种类和水平、花粉植株发生的方式以及愈伤组织继代培养时间的长短有直接关系。 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题以烟草为例,接种二核期花粉比单核期花粉能获得更多的二倍体;在含有细胞分裂素的培养基上产生的愈伤组织比在不加激素的基本培养基上产生的愈伤组织的形成的二倍体比率显著增高;通过胚状体途径产生的花粉植株几乎都是单倍体,而经过由愈伤组织产生的花粉植株有不少是二倍体;愈伤组织继代培养的时间越长,二倍体的比例就越高。 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题（2）染色体加倍技术:为了得到更多的纯合二倍体,要通过人工的方法,使单倍体植株的染色体加倍,成为纯合的二倍体。染色体人工加倍最有效的方法是用一定浓度的秋水仙素处理单倍体植物的生长点或分蘖节。对烟草来说,将具有3～4片真叶的试管苗置于灭过菌的0.4%秋水仙素溶液中浸泡24～48小时,用无菌水洗净后再接种于新鲜培养基上,可使单倍体幼苗有25%左右加倍成为二倍体。 2021/5/4 * 花药培养应注意的问题禾本科植物加倍的方法是:在分蘖盛期,从土壤中取出植株,洗净泥土,将分蘖节浸泡在加有助渗剂二甲基亚砜（1～2%）秋水仙素溶液中,时间在视植物而异,小麦是用0.04%秋水仙素处理8小时,水稻是0.2%的秋水仙素处理24小时。花粉植株的鉴定最可靠的方法是对茎尖和根尖细胞进行染色体计数。 2021/5/4 * 花粉培养的优越性: 虽然已经证明花药培养对诱导单倍体十分有效,但花药培养存在的主要问题是:植株不仅来自花粉,也有来自花药的其它不同部分,结果得到不同倍数性水平的植株群体。而花粉人工培养可克服这个困难。此外还有以下的优越性: 2021/5/4 * 花粉培养的优越性: 1. 消除了药壁和其它组织不能控制的影响,并能较好地调节支配发育的各种因素。 2. 可观察到由单个细胞开始雄核发育的全过