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一种白莲花类酯提取物的制备方法与流程

花匠小妙招
2025-11-21 18:05

本发明涉及生物技术领域，具体是指一种白莲花类酯提取物的制备方法。

背景技术：

自古代起白莲花便有水中灵芝之美称，白莲花亦是被子植物中起源最早的植物之一。白莲花“出淤泥而不染，濯清涟而不妖”的高尚品格，历来被诗人墨客歌咏。但其生物活性成分在国内外的研究及报告却不多见。传统植物提取方式大多采用溶剂提取，其本质上已经污染提取物，长期使用，或多或少会对肌肤造成过敏，甚至影响天然活性成份影响护肤品的效用。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是，针对以上问题提供一种白莲花的类酯提取物的提取方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种白莲花类酯提取物的制备方法，其制备方法包括以下步骤：

(1)白莲花鲜花6月底采摘，将带雄蕊的鲜花置于4℃冷藏24h；

(2)将冷藏24h的的鲜花取出剥去萼片，贴进花托基部切去花梗，称取2000g；

(3)加入3倍体积100℃蒸馏水，浸泡5-6h，纱布初滤，药渣同法还原再浸提2次，合并三次清液；

(4)将清液和药渣加入蒸馏装置中，直接加热蒸馏，收集500ml蒸馏液，补加500ml蒸馏水，继续收集500ml蒸馏液，合并蒸馏液；

(5)将提取的蒸馏清液经旋转蒸发70℃减压浓缩至原清液的体积的六分之一；

(6)将浓缩后的清液液进行离心，沉淀，有大量絮状沉淀物出现，静置24h，进行脱水，得到白莲花类酯提取物。

本发明与现有技术相比的优点在于：白莲花类酯提取物中富含植物多糖，黄铜，生物碱等活性成份。本发明属于生物技术领域，公开了一种水灵芝白莲花类酯提取物的制备方法，初步测试了其滋养修复，激励血液循环，消除过敏因子，强化肌肤自然保健排毒功能，清除自由基，抗氧化，美白，有效改善肌肤老化肤质。

附图说明

图1是实施例1的蛋白标准曲线如图。

图2是实施例1的酶反应进程曲线如图。

具体实施方式

下面结合附图对本发明做进一步的详细说明。

本发明在具体实施时，一种白莲花类酯提取物的制备方法，其制备方法包括以下步骤：

(1)白莲花鲜花6月底采摘，将带雄蕊的鲜花置于4℃冷藏24h；

(2)将冷藏24h的的鲜花取出剥去萼片，贴进花托基部切去花梗，称取2000g；

(3)加入3倍体积100℃蒸馏水，浸泡5-6h，纱布初滤，药渣同法还原再浸提2次，合并三次清液；

(4)将清液和药渣加入蒸馏装置中，直接加热蒸馏，收集500ml蒸馏液，补加500ml蒸馏水，继续收集500ml蒸馏液，合并蒸馏液；

(5)将提取的蒸馏清液经旋转蒸发70℃减压浓缩至原清液的体积的六分之一；

(6)将浓缩后的清液液进行离心，沉淀，有大量絮状沉淀物出现，静置24h，进行脱水，得到白莲花类酯提取物。

实施例：

实施例1

白莲花类酯提取物对酪氨酸酶活性影响的实验

在人体中，酪氨酸酶主要存在于皮肤表皮细胞的黑色素细胞中。黑色素细胞合成黑色素是机体的一种自稳定肌肤保护机制。在皮肤黑色素生物合成过程中，若无络氨酸酶参与合成反应则变得非常缓慢，所以酪氨酸酶的活性于黑色素的形成成正相关，本测试以酪氨酸酶为底物，从马铃薯中制备粗液，以熊果苷为阳性对照。

1.酪氨酸酶液制备

将马铃薯去皮洗净，于4℃预冷4h左右，去皮切成丁保鲜膜覆盖置于-15℃冷冻24h陈重，按1:19(w：v)的比例加入4℃预冷的磷酸钠缓冲液，用组织捣碎机制成匀状，2层纱布过滤。滤液于400r/min离心20min上清夜即为所得酪氨酸酶液4℃保存，2h内用完。

2.马铃薯酪氨酸酶活力及比活力测定

取2个玻璃比色皿(光程为1cm)，向测定皿中以此加入0.5ml磷酸盐缓冲液，0.5ml酶液；空白对照皿中依次加入2.5ml磷酸盐缓冲液，0.5ml酶液。30℃水浴10min后，向测定皿中加入2.0ml浓度为7.5mmol/l的酪氨酸溶液，立即记时。以空白对照参比，每隔1min测定475nm波长处的吸光值，连续测定9-25min.以反应时间为横坐标，以475nm处的吸光值为纵坐标，绘制反应进程曲线。由直线斜率求的酶活力，进而求的酶的比活力酶活力单位＝δa.v/ε.l

其中，“δa”为每分钟光吸收变化值，即直线斜率，酶反应初速度；“v”为酶促反应体积(ml)；“ε“为产物消光系数，“l”为比色皿光程。

各样品对酪氨酸酶活性的抑制

总反应体系为5ml.

注；用分光光度计测量吸光值时，受试液，标准对照，阳性对照分别以阴性对照1，阴性对照2，阴性对照3凋零。

根据该实验体系，得各试剂的终浓度，见下表

5ml实验体系中各试剂的终浓度

实验时，向试管中依次加入磷酸盐缓冲液，受试液(包括阳性对照)，酶液，于30℃水浴10min.然后加入酪氨酸，立即开始计时。测定反应20min时475nm波长下的吸光值。测定时以相应的阴性对照为参比，用下列公式计算受试液对酪氨酸酶的抑制率，并依据浓度-酶抑制率曲线估计半数抑制浓度的近似值。

抑制率(％)＝(a-b)/a＊100％

其中，a为标准对照的吸光值，b为受试液(或阳性对照)的吸光值。

每一个实验做3个平行，抑制率高表明其对酪氨酸酶活性的抑制强度高。

马铃薯酪氨酸酶酶液中的蛋白含量

所提取的酶液的吸光值为0.703，根据标准曲线求的蛋白浓度为335.524μg/ml马铃薯酪氨酸酶的酶活力及比活力

样品对酪氨酸酶活性抑制率

白莲花类酯提取物对酪氨酸酶活性的抑制率

由以上实验结果可以看出：

白莲花类酯提取物对酪氨酸酶活性的抑制不亚于熊果苷阳性对照组。

各组实验数据的相对指标偏差均小于10％，可以认为本实验的精密度符合要求，结果可信。

酪氨酸酶抑制剂就是通过抑制酪氨酸酶活性从而抑制黑色素生成，目前，果酸，维c，曲酸，熊果苷等酪氨酸抑制剂作为美白剂应用于护肤品中，但是果酸由于刺激性比较大已经逐渐被淘汰；维c，曲酸易氧化，保质期端，熊果酸是1988年从杜鹃花科植物熊果果实中分离到的。虽然能够快速深入肌肤，有效地抑制皮肤中的酪氨酸酶活性，通过自身与酪氨酸酶直接结合，加速黑色素的分解和排泄，而且对黑色素细胞不产生毒性，目前运用广泛，因此也作为本实验的阳性对照，无疑能够对白莲花类酯提取物对酪氨酸酶活性抑制作用作出对比，使得其功效更有客观的说服力。

实施例2

白莲花类酯提取物抗氧化活性研究

对自由基清除能力的测定

取1支10ml比色管，依次加入ph7.4磷酸盐缓冲溶液2ml1.5默mmol/l的邻二氮菲溶液1.5ml7.5mmol/l硫酸亚铁铵溶液1ml，摇匀，室温下避光反应60min，在400-600nm范围内连续测定吸光度，确定最大吸收波长。

清除自由基的测定方法

取9支10ml比色管，依次加入ph7.4磷酸盐缓冲溶液2ml，1.5mmol/l的邻二氮菲溶液1.5ml，7.5mmol/l硫酸亚铁铵溶液1ml，分别加入不同浓度白莲花类酯提取物1ml，再各加入0.01％过氧化氢溶液1ml用蒸馏水定容至刻度。在37℃下恒温反应60min在最大吸收波长处测其吸光度，其吸光值称为a样品同前步，不加提取液和过氧化氢，可看出具有清除自由基的效果。

精油的抗氧化活性研究，对●oh清除能力的测定，最大吸收波长的选择。

取1支10ml比色管，依次加入ph7.4磷酸盐缓冲溶液pbs)2ml，1.5mmol/l的邻二氮菲溶液1.5ml，7.5mmol/l硫酸亚铁铵溶液1ml，摇匀，室温下避光反应6omin，在400-600nm范围内连续测定吸光度(a)，确定最大吸收波长。

清除●oh的测定方法

方法，稍有改动。取9支10ml比色管，依次加入ph7.4磷酸盐缓冲溶液(pbs)2ml，1.5mmol/l的邻二氮菲溶液1.5ml，7.5mmol/l硫酸亚铁铵溶液1ml，分别加入不同浓度金莲花精油无水乙醇溶液1ml，再各加入0.01％过氧化氢h2o2)溶液1ml，用蒸馏水定容至刻度。在379c下恒温反应6omin，在最大吸收波长处测其吸光度，其吸光值称为a样品。同前步，不加精油溶液和h2o2的吸光值称为a未损伤，不加精油的吸光值称为a损伤。取磷酸盐缓冲溶液2.0ml和8.0ml.蒸馏水于试管中，混匀作空白管。平行测定三次，取其平均值。用vc作比较。清除率计算式如下:用下式计算对●oh的清除率，并计算出半数抑制率ic50值。

此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征，在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具本的限定。

在本发明中，除非另有明确的规定和限定，术语“安装”、“相连”、“连接”、“固定”等术语应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

在本发明中，除非另有明确的规定和限定，第一特征在第二特征之“上”或之“下”可以包括第一和第二特征直接接触，也可以包括第一和第二特征不是直接接触而是通过它们之间的另外的特征接触。而且，第一特征在第二特征“之上”、“上方”和“上面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度高于第二特征。第一特征在第二特征“之下”、“下方”和“下面”包括第一特征在第二特征正上方和斜上方，或仅仅表示第一特征水平高度小于第二特征。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”，“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。