旋覆花多糖及黄酮药理活性研究
旋覆花多糖及黄酮药理活性研究
作 者: 董满导 师: 洪铁
学 校: 吉林大学
专 业: 药理学
关键词: 旋覆花多糖 总黄酮 急性肝损伤 糖尿病 抗氧化 抗炎
分类号: R285.5
类 型: 硕士论文
年 份: 2013年
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内容摘要
目的：本研究旨在采用小鼠急性肝损伤及糖尿病动物模型，研究旋覆花多糖（IBP）及总黄酮（IBFF）对急性肝损伤及糖尿病的改善作用。主要包括以下两个方面：一、提取分离旋覆花多糖（IBP）及旋覆花总黄酮（IBFF）；①采取四氯化碳（CCL4）、卡介苗联合脂多糖（BCG+LPS）两种急性肝损伤模型，通过对肝组织中相关生化指标的分析探讨IBP对急性肝损伤的保护作用；②复制D-氨基半乳糖（D-Gal）小鼠急性肝损伤模型，通过肝组织相关的生化指标的分析探讨IBFF对D-Gal所致的急性肝损伤的保护作用及相关机制。实验方案：（1）采用CCL4及卡介苗（BCG）联合脂多糖（LPS）诱导小鼠急性肝损伤模型，小鼠予以不同剂量IBP进行干预；进行小鼠血清中谷丙转氨酶（AST）和谷草转氨酶（ALT）检测；小鼠肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）含量测定；（2）采用D-氨基半乳糖（D-Gal）诱导小鼠急性肝损伤模型，小鼠予以不同剂量IBFF进行干预；小鼠血清AST、ALT含量测定；小鼠肝组织中SOD, MDA, GSH-PX及CAT含量测定；小鼠血清TNF-α（肿瘤坏死因子）, COX-2（环氧合酶-2）以及iNOS（诱导型一氧化氮合成酶）水平检测；小鼠肝组织病理学分析；RT-PCR检测小鼠肝组织内TNF-α, COX-2以及iNOSmRNA表达。二、采用四氧嘧啶诱导小鼠糖尿病模型，对小鼠体重、空腹血糖、肝糖原含量、甘油三酯及胆固醇含量相关指标进行检测，探讨IBP对四氧嘧啶诱发糖尿病模型小鼠的改善作用；实验结果：1、IBP、IBFF对急性肝损伤小鼠的改善作用（1）IBP （50,100mg/kg）能显著性降低四氯化碳及卡介苗联合脂多糖所致急性肝损伤的转氨酶含量升高，可降低肝组织中MDA含量，增强小鼠肝组织中SOD活力（p<0.05, p<0.01）；（2）IBFF （250,500mg/kg）能够显著抑制D-Gal所致的肝损伤；①血清转氨酶测定结果表明，IBFF （250,500mg/kg）能够显著的降低急性肝损伤所致的转氨酶含量升高（p<0.05, p<0.01）；②肝组织生化指标检测结果表明，IBFF （250,500mg/kg）能够显著性降低D-Gal肝损伤模型小鼠肝组织内MDA含量，显著性增加小鼠肝组织内SOD、GSH-PX、CAT含量（p<0.05, p<0.01）；③酶联免疫吸附实验结果表明，IBFF （250,500mg/kg）能够显著性降低D-Gal肝损伤模型小鼠体内炎性因子TNF-α、COX-2、iNOS含量（p<0.05, p<0.01）；④肝组织病理结果表明，IBFF （250,500mg/kg）能够显著性降低D-Gal肝损伤所致的肝组织坏死、炎性浸润、胞浆疏松，胞体肿胀及脂肪变性；⑤RT-PCR结果表明，IBFF （250,500mg/kg）能够显著性降低D-Gal肝损伤模型小鼠体内前炎性因子TNF-α、COX-2、iNOS mRNA含量（p<0.05, p<0.01）。2、IBP对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的改善作用IBP（50,100mg/kg）可显著性抵抗糖尿病小鼠体重降低，降低糖尿病小鼠空腹血糖含量，降低血清TC/TG比值（p<0.05, p<0.01），显著性的降低低密度脂蛋白（LDL-C）含量及升高高密度脂蛋白含量（p<0.05, p<0.01）。实验结论：1、IBP及IBFF可增强小鼠肝组织内抗氧化酶活力，降低脂质过氧化物质的水平，减少了自由基对肝细胞的损伤，改善了小鼠肝组织抗氧化能力；同时，IBFF还可通过降低小鼠肝组织内TNF-α、COX-2、iNOS含量来抑制肝脏炎性损伤。2、IBP可以显著抑制糖尿病小鼠体重降低，降低糖尿病小鼠血糖含量、血清TC/TG比值，低密度脂蛋白（LDL-C）及升高高密度脂蛋白（HDL-C）含量；
全文目录
摘要 4-6
Abstract 6-11
第一章 研究概况 11-22
1.1 用于研究急性肝损伤的动物模型 11-17
1.1.1 化学性肝损伤 11-14
1.1.2 免疫性肝损伤 14-15
1.1.3 药源性肝损伤模型 15-16
1.1.4 酒精性肝损伤 16-17
1.2 糖尿病的研究进展 17-19
1.3 旋覆花药理活性研究进展 19-22
1.3.1 抗肝炎活性 19
1.3.2 抗糖尿病活性 19
1.3.3 抗肿瘤作用 19-20
1.3.4 抗增生作用 20
1.3.5 抗氧化作用 20
1.3.6 抗炎、抗菌作用 20-22
第二章 旋覆花对急性肝损伤模型小鼠的影响 22-41
2.1 材料与仪器 22
2.1.1 实验动物 22
2.1.2 实验器材 22
2.1.3 实验药品和试剂 22
2.2 旋覆花多糖的提取以及多糖组成分析 22-23
2.2.1 旋覆花多糖的提取 22-23
2.2.2 旋覆花多糖的红外光谱分析 23
2.2.3 HPLC 测定多糖分子量 23
2.2.4 旋覆花单糖组成分析 23
2.3 旋覆花总黄酮的提取 23-24
2.4 IBP 对 CCL4介导的肝损伤保护作用实验方案 24
2.4.1 分组及给药 24
2.4.2 血清中转氨酶含量测定 24
2.4.3 肝组织 SOD、MDA 含量测定 24
2.5 IBP 对 BCG+LPS 介导的肝损伤保护作用实验方案 24-25
2.5.1 分组及给药 24-25
2.5.2 血清中转氨酶含量测定 25
2.5.3 肝组织 SOD、MDA 含量测定 25
2.6 IBFF 对 D-GAL介导的急性肝损伤保护作用实验方案 25-27
2.6.1 分组及给药 25
2.6.2 血清转氨酶测定 25
2.6.3 肝组织 SOD、GSH-PX、CAT、MDA 含量测定 25
2.6.4 血清中 TNF-alpha、iNOS、COX-2 25-26
2.6.5 病理学检测 26
2.6.6 RT-PCR 检测肝组织中 TNF-alpha、iNOS、COX-2 mRNA 表达 26-27
2.7 结果分析 27-38
2.7.1 IBP 的 IR 结果分析 27
2.7.2 HPLC 测定多糖分子量 27-28
2.7.3 IBP 组成糖分析 28
2.7.4 旋覆花多糖对 CCL4介导肝损伤的保护 28-30
2.7.5 IBP 对 LPS 介导肝损伤的保护作用 30-31
2.7.6 IBFF 对 D-半乳糖介导的肝损伤小鼠转氨酶的影响 31-38
2.8 讨论 38-41
第三章 IBP 对四氧嘧啶介导的高血糖模型小鼠的影响 41-47
3.1 材料与仪器 41
3.1.1 实验动物 41
3.1.2 实验器材 41
3.1.3 实验药品和试剂 41
3.2 旋覆花多糖抗四氧嘧啶诱发糖尿病小鼠的实验研究 41-42
3.2.1 旋覆花多糖的制备 41
3.2.2 分组及给药 41-42
3.2.3 体重评价、空腹血糖及肝糖原测定 42
3.2.4 血清中甘油三酯及胆固醇测定 42
3.3 统计方法 42
3.4 实验结果 42-45
3.4.1 IBP 对糖尿病小鼠体重的影响 42-43
3.4.2 IBP 对糖尿病小鼠空腹血糖的影响 43
3.4.3 IBP 对糖尿病小鼠肝糖原含量的影响 43-44
3.4.4 IBP 对糖尿病小鼠甘油三酯、胆固醇含量的影响 44-45
3.5 讨论 45-47
第四章 结论 47-48
参考文献 48-52
作者简介及科研成果 52-53
致谢 53
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