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一种基于UPLC

花匠小妙招
2026-01-04 18:04

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本发明涉及中药制剂分析领域，具体来说，涉及一种基于uplc-q-tof-ms的火把花根片化学成分分析鉴定及其uplc指纹图谱的建立方法。

背景技术：

1、火把花为卫矛科雷公藤属植物昆明山海棠tripterygium hypoglaucum(lévl.)hutch.。“火把花”一词始载于《本草纲目》，李时珍集解曰：“生滇南者花红，呼为火把花”。该植物药用历史悠久，药用部位主要为根，具有祛风除湿、活血止血、舒筋接骨等功效。现代药理研究显示，火把花根具有较强的抗炎和免疫抑制活性，对自身免疫性疾病疗效显著，但同时毒性较大，服用后容易对肝、肾、泌尿、生殖等系统造成损害，其主要成分为二萜、三萜、生物碱和黄酮类等成分。

2、火把花根片是一种单方制剂，以火把花去皮的根芯为单一原料，经水煎醇沉后与辅料按特定比例混合压片而成。该制剂的临床主要适应症为类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等，近年来发现其对iga肾病、糖尿病肾病、银屑病、慢性荨麻疹等多种其他自身免疫性疾病也具有较好疗效。毒性方面，该制剂的毒性小于火把花根药材，但仍存在性腺抑制、骨髓抑制、胃肠道刺激等多种不良反应。

3、火把花根片作为一种疗效和毒性并存的制剂，批次间质量一致性对于保证临床用药的安全有效具有重要意义，而指纹图谱结合相似度分析是目前中药质量一致性评价的重要手段。迄今，仅有1篇文献报道了火把花根片中间体的高效液相色谱(hplc)指纹图谱研究，分析时间长，同时前处理方法较为繁琐。另一方面，虽然目前有关火把花根药材的成分研究较多，但对于采用水提醇沉工艺制得的火把花根片中的成分报道则非常少，因此制剂的物质基础尚不明确。因此，需要提供一种新的火把花根片化学成分分析鉴定方法以及火把花根片超高液相(uplc)指纹图谱建立方法，可有效反应出火把花根片整体的质量特征，进而对火把花根片药品的质量进行整体控制和评价。

4、针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。

技术实现思路

1、针对相关技术中的问题，本发明提出一种基于uplc-q-tof-ms的火把花根片化学成分分析鉴定及其uplc指纹图谱的建立方法，结合相似度分析评价火把花根片不同批次样品间的质量一致性，同时对火把花根片中的主要成分进行鉴定，以明确其物质基础，为后期该制剂的质量控制研究提供依据和参考，以克服现有相关技术所存在的上述技术问题。

2、为此，本发明采用的具体技术方案如下：

3、根据本发明的一个方面，提供了一种基于uplc-q-tof-ms的火把花根片化学成分分析鉴定及其uplc指纹图谱的建立方法，该基于uplc-q-tof-ms的火把花根片化学成分分析鉴定及其uplc指纹图谱的建立方法包括以下步骤：

4、s1、制备火把花根片供试品；

5、s2、制备火把花根片对照品；

6、s3、采用梯度洗脱法确定uplc色谱条件；

7、s4、确定质谱条件；

8、s5、通过所述uplc色谱条件对所述火把花根片供试品及所述火把花根片对照品进行色谱分析，得到火把花根片uplc指纹图谱；

9、s6、通过所述质谱条件对所述火把花根片供试品进行分析，并结合所述火把花根片对照品进行化学成分鉴定。

10、进一步的，所述制备火把花根片供试品包括以下步骤：

11、s11、取火把花根片研细后的粉末进行精密称定；

12、s12、将精密称定后的粉末放入具塞锥形瓶中，并加入10％～50％甲醇水溶液10～50ml，称定重量后并进行超声提取10～60min；

13、s13、将s12得到的溶液放冷后，利用10％～50％甲醇水溶液补足减失的重量，并摇匀、取续滤液，得到供试品溶液。

14、进一步的，所述制备火把花根片对照品包括以下步骤：

15、称取预设质量的儿茶素对照品，并加入30％甲醇水制成浓度为1.02mg/ml的溶液，得到火把花根片对照品。

16、进一步的，所述采用梯度洗脱法确定uplc色谱条件包括以下步骤：

17、以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂，乙腈为流动相a，0.05％～0.2％甲酸水溶液为流动相b进行梯度洗脱处理，得到检测波长为210～400nm、流速为0.2～1.0ml/min及柱温为25～40℃。

18、进一步的，所述确定质谱条件包括以下步骤：

19、利用电喷雾离子源的正、负离子进行扫描，并设定高低能量通道交替采集数据；

20、其中，所述电喷雾离子源的温度为100～120℃，毛细管电压为正离子3.0kv，负离子2.5kv，锥孔电压为40v，脱溶剂温度为450℃，脱溶剂气流n2的流量为1000l/h，扫描范围为50～1200da，扫描时间为0.2s，碰撞气体为高纯氩气；

21、所述高低能量通道包括低能量通道和高能量通道，所述低能量通道的碰撞能量为6v，所述高能量通道的碰撞能量为20～45v的梯度能量。

22、进一步的，所述通过所述uplc色谱条件对所述火把花根片供试品及所述火把花根片对照品进行色谱分析，得到火把花根片uplc指纹图谱包括以下步骤：

23、s51、按照uplc色谱条件对预设批数的火把花根片供试品和火把花根片对照品进行色谱分析，得到色谱图；

24、s52、利用色谱图采用预设软件进行对比分析，得到由样品共有特征峰构成的火把花根片uplc指纹图谱。

25、进一步的，所述通过所述质谱条件对所述火把花根片供试品进行分析，并结合所述火把花根片对照品进行化学成分鉴定包括以下步骤：

26、s61、按照所述质谱条件对火把花根片供试品进行分析，并根据低碰撞能量通道下得到的精确分子量信息在本地建立的中药成分数据库中进行搜索；

27、s62、比较高碰撞能量通道下得到的碎片信息与理论碎片的匹配程度，并结合文献报道以及火把花根片对照品的比对进行化学成分鉴定，得到相应数量的化合物；

28、其中，所述化合物包括黄酮类4个、酚苷类5个、二萜2个及7个其他类成分。

29、进一步的，所述色谱柱包括waters cortecs t3色谱柱或waters hss t3色谱柱；

30、所述waters cortecs t3色谱柱的规格为2.1mm×100mm，1.6μm，所述waters hsst3色谱柱的规格为2.1mm×100mm，1.7μm。

31、根据本发明的另一方面，提供了一种火把花根片uplc指纹图谱，该火把花根片uplc指纹图谱包括27个共有峰，其中16号峰为儿茶素。

32、根据本发明的又一方面，提供了一种基于uplc-q-tof-ms的火把花根片的质量鉴别方法，该基于uplc-q-tof-ms的火把花根片的质量鉴别方法包括以下步骤：

33、取若干批次的火把花根片，并利用所述基于uplc-q-tof-ms的火把花根片化学成分分析鉴定及其uplc指纹图谱的建立方法得到火把花根片uplc指纹图谱，并将该若干批次的火把花根片uplc指纹图谱按照中位数法生成得到火把花根片对照uplc指纹图谱；

34、取待测样品制备供试品溶液，并利用所述基于uplc-q-tof-ms的火把花根片化学成分分析鉴定及其uplc指纹图谱的建立方法获取待测样品uplc指纹图谱；

35、将待测样品uplc指纹图谱与火把花根片对照uplc指纹图谱进行相似度比较，若相似度不低于0.990，则可判断待测样品的质量合格。

36、本发明的有益效果为：

37、1、本发明通过首次建立了火把花根片的uplc指纹图谱，结合相似度分析，评价了不同批次样品间的一致性，建立的指纹图谱与已有方法比较，灵敏度高，重现性好，简单方便，前处理更加简便，同时缩短了分析时间。通过对比火把花根片待测样品与火把花根片uplc指纹图谱共有峰的相似度，可对火把花根片的质量进行整体描述和评价，并确保产品质量的均一性。

38、2、本发明首次采用uplc-q-tof-ms技术对火把花根片中的主要成分进行鉴定，以儿茶素为参比峰，确定了27个共有峰为构成火把花根片uplc指纹图谱的共有峰，并从共有峰中鉴定出黄酮类4个、酚苷类5个、二萜2个及7个其他类成分等18个化学成分，可对火把花根片的质量进行全面评价，有效地保证了成品的质量。