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转基因创建矮牵牛、烟草早花种质资源的研究

花匠小妙招
2024-10-30 09:01

转基因创建矮牵牛、烟草早花种质资源的研究

【摘要】： 当前,植物花发育机制已成为植物分子生物学研究的热点之一。烟草、矮牵牛作为研究花发育的模式植物,同时矮牵牛又是一种在园林中广泛应用的花卉植物,对其开花转换的研究以及通过转基因获得变异植株,无论对植物花发育机制研究还是植物育种均具有重要的意义。本试验选用野生型矮牵牛、烟草及其不同转基因突变株系为材料,以叶盘为外植体,将NT、PaFT基因通过根癌农杆菌EHA105介导,进行遗传转化,获得转基因植株,并从形态、解剖和分子等水平,分析它们的异源表达对转基因植物生长发育的影响,为NT、PaFT基因功能及后期的调控机理研究奠定基础,同时创造更多新的早花烟草、矮牵牛种质资源。主要结果如下:1.通过农杆菌介导的遗传转化获得花期显著提前的NT转基因烟草和矮牵牛突变株。与对照相比,转基因植株株型矮小,开花转换时叶数显著减少,分枝数增多,且每一个分枝都能发育转变成花序枝而开花结实。另外,转基因植株茎细,质感硬,石蜡切片初步显示其木质化程度比对照高。2.以转NT基因获得的早花烟草的叶片为外植体,确定了其作为遗传转化受体系统的二次转化选择压力。结果表明,30 mg/L的潮霉素即可导致早花烟草叶片失去分化能力,还可导致试管苗失去分化不定根的能力。300 mg/L的头孢霉素做为抑菌剂,对不定芽和不定根的分化能力均影响不大。3.以转NT基因获得的含nptⅡ选择标记基因的早花烟草叶片为外植体,摸索了其根癌农杆菌介导的二次遗传转化体系。通过导入含hpt选择标记基因的GUS报告基因,经检测得到了GUS稳定表达的抗性芽。与烟草单基因转化相比,二次转化耗时长,且转化率相对较低。4.以课题组前期获得的转单基因突变株白花烟草和重瓣烟草为转化受体,二次转化PaFT基因,获得了部分早花白花烟草和早花重瓣烟草突变株。PCR检测及形态分析鉴定表明PaFT基因已成功导入上述材料当中。另外,重瓣烟草经二次转化,大部分抗性植株重瓣性状回复,出现早花单瓣表型。

【学位授予单位】：华中农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009

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