首页 > 分享 > 切花菊组织培养快速繁殖技术初探

切花菊组织培养快速繁殖技术初探

花匠小妙招
2024-11-07 09:01

切花菊组织培养快速繁殖技术

《现代农业科技》２００８年第１４期园艺博览

切花菊组织培养快速繁殖技术初探

祝洪海

张伟＊

（河南省商丘市蔬菜生产办公室，河南商丘４７６０００）

摘要用ＭＳ基本培养基附加不同种类和浓度的激素，以切花菊良种小菊带腋芽的茎段、幼花蕾位外植体，进行切花菊组织培养快速繁殖试验。结果表明：初代培养试验的２种激素６种不同浓度处理，均能诱导外植体分化形成愈伤组织。带腋芽的芽段腋芽分化率最高的

分化率为８３．３％；而花蕾诱导分化率最高的组合为ＭＳ＋６－ＢＡ３．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ。培养４２ｄ组合为ＭＳ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，

后，愈伤组织块的直径超过１．０ｃｍ，丛生芽数达到１２￣１５个。

关键词切花菊；小菊；组织培养；快速繁殖

＋＋

中图分类号Ｓ６８２．１１０４．３文献标识码Ａ文章编号１００７－５７３９（２００８）１４－００１５－０２

菊花原产我国，属于菊科多年生宿根草本植物，是国内十大传统名花之一，也是当今世界“四大鲜切花”之一。小菊是当今花卉市场流行的优良切花菊品种之一。其特点是小分枝多、色彩鲜艳、各色品种俱全、产量高、耐贮运、花期长、适应性广，远观近观效果均佳，深受人们的喜爱。生产上大多数采用脚芽扦插繁殖法，不仅繁殖系数低、周期长，而且细菌感染严重、品质退化。而利用组织培养技术，可在短时间内繁殖大量优质花苗。菊花组织培养快速繁殖技术，国外Ｂｅｎ－Ｊｏａｃｏｖ等最早（１９７２）进行了研究。Ｅａｒｌｅ等又研究了细胞分裂素、生长素不同水平对其生长的影响。国内裘文达（１９８２）、唐巍（１９９３）又开展了这方面的工作，为批量生产开辟了一条新途径。本文旨在为采用生物技术快速繁殖优良品种，并进行大批量生产提供依据。１材料与方法１．１材料

供试材料来自新乡县合河乡温室大棚栽培的植株。取生长健壮的一年生中上部带腋芽的茎段、幼花蕾。１．２方法

１．２．１外植体准备。将采集的带腋芽的茎段、幼花蕾作为外植体，去掉部分叶片及花蕾上的鳞片，用小毛刷仔细地洗刷，在流水中冲洗３０ｍｉｎ，冲去粘附在再用洗衣粉浸泡１０ｍｉｎ，

装入烧杯内，在接种上面的污物，再用无菌水冲洗２￣３次，室内放入７５％的酒精浸泡３０ｓ，而后置于滴入２￣３滴吐温－８０的０．１％ＨｇＣｌ２溶液中浸泡８ｍｉｎ，最后再用无菌水冲洗４￣５次，放在无菌滤纸上吸干表面上水分，以备接种用。１．２．２具体操作。整个接种操作过程是在接种室的无菌环境条件下进行的。在超净工作台（接种前超净工作台应提前２０ｍｉｎ，打开并用紫外灯灭菌）的表面，用７５％的酒精喷洒灭菌。稍等片刻，点燃酒精灯，然后再开始接种。用预先灭过菌的镊子、解剖刀或剪子将其带腋芽的茎段在培养皿上切成１．０￣１．５ｃｍ，花蕾剥去鳞片后纵切成两半。把镊子在７５％的酒精溶液中蘸一下，并在酒精上灼烧，注意时间要适当，不能过长，以免在夹取外植体材料时将其灼伤。接种时，培养皿

作者简介祝洪海（１９５４－），男，大学文化，高级农艺师，现从事蔬菜生

产与科技推广工作。＊通讯作者

收稿日期２００８－０５－１９

的瓶口应倾斜对准酒精灯火焰的方向，距离要适当。外植体要垂直于培养基，接种材料与培养基接触的深度要掌握好，切忌过深。接种时动作要迅速，封口要扎紧。接种用的镊子操作者的手接种前必须用肥皂彻底清每用１次灭１次菌。洗，再用７５％的酒精药棉擦拭干净。１．２．３愈伤组织的诱导与分化。将外植体材料置于不同处理培养基配方中，具体培养基及接种材料情况见表１。

表１切花小菊与激素处理及外植体接种情况

处理Ｗ１

Ｗ２Ｗ３Ｗ４Ｗ５Ｗ６ＣＫ

培养基组成∥ｍｇ／ＬＭＳ＋６－ＭＳ＋６－ＭＳ＋６－ＭＳ＋６－ＭＳ＋６－ＭＳ＋６－ＭＳ

ＢＡ１．０＋ＮＡＡ０．１ＢＡ２．０＋ＮＡＡ０．１ＢＡ３．０＋ＮＡＡ０．１ＢＡ１．０＋ＮＡＡ０．２ＢＡ２．０＋ＮＡＡ０．２ＢＡ３．０＋ＮＡＡ０．２

接种外植体数∥个茎段花蕾６６６６６６６６６６６６６６

共设置７个处理，ＣＫ为空白对照。每个处理６瓶，其中带腋芽的茎段与花蕾各３瓶，每瓶２块材料，重复３次。

培养皿为１００ｍＬ三角瓶，上述各培养基蔗糖３％、琼脂０．８％，ｐＨ值为５．８。接种后将培养基在培养室内培养，温度为２５±２℃，光照时间为８￣１０ｈ／ｄ，光照强度为１８００Ｌｘ。外植

体培养７ｄ后，茎段上的腋芽开始萌动，２１ｄ后萌发许多绿色小芽，同时在其茎段切口处（生物学下端）可以看到长出了浅绿色致密的愈伤组织。继续培养４２ｄ后愈伤组织的直径＞１ｃｍ以上，同时萌发出许多莲座状的丛生芽。２结果与分析

２．１不同处理培养基对带叶芽的茎段诱导分化的影响

初代培养时不同处理培养基对茎段腋芽发生的数量、愈伤组织及丛生芽的生长势等影响是不同的（见表２）。茎段

伴其生长继续腋芽在接种７ｄ后就萌发生长而且速度较快，

培养２１ｄ后，发现茎段切口处已形成愈伤组织，同时腋芽的幼芽叶腋间开始发生绿色小芽，之后渐渐形成丛生芽。由表２可以看出，Ｗ５对茎段腋芽分化率发生的效果最好，分化率达８３．３％。６－ＢＡ的质量浓度过低或过高均不利其腋芽分化，而ＮＡＡ的质量浓度从０．１ｍｇ／Ｌ提高到０．２ｍｇ／Ｌ时，腋芽分化率有上升趋势；在生长势上，表现有所加快，但长势弱。在不加任何激素的情况下只利于生长而不利于或形成少量的愈伤组织。

１５