可可豆高产抗病品种的组织培养反应品种筛选和遗传转化建立,bioRxiv
可可豆高产抗病品种的组织培养反应品种筛选和遗传转化建立
bioRxiv - Plant Biology Pub Date : 2020-10-08 , DOI: 10.1101/2020.10.07.327486
Jesse Jones , Elaine Zhang , Dominick Tucker , Daniel Rietz , Doug Dahlbeck , Michael Gomez , Claudia Garcia , Jean-Philippe Marelli , Donald Livingstone , Ray Schnell , Brian Staskawicz , Myeong-Je Cho
高效的转化方案是开发转基因和基因组编辑作物的前提。在可可中已经测试并改进了一种组织培养系统，该系统涵盖了从花材料的萌芽到小植株向土壤再生的过程。筛选了十四个品种的组织培养反应并通过农杆菌传递了DNA（T-DNA）传递效率。这些关键因素被用来确定各种品种的遗传转化能力。选择了高产，抗病品种INIAPG-038进行稳定转化，并对该方法进行了进一步优化。使用两个同时包含黄色荧光蛋白和新霉素磷酸转移酶II基因的载体产生了多个转基因事件。采取了两种提高T-DNA传递和次生体细胞胚发生率的策略，以提高总体转化频率。农杆菌的使用菌株AGL1和子叶组织来源于不成熟的体细胞胚，大小在4-10 mm之间，导致最高的T-DNA传递效率。此外，在次生愈伤组织生长培养基中使用较高浓度的基础盐和硫酸铜，可使产生十个以上胚胎的外植体百分比分别增加504％和443％。因此，所有这些成分的最佳组合导致INIAPG-038在T0工厂级别成功转换，频率为3.7％。将根尚未发育的转基因接穗嫁接到具有牢固，健康根的野生型幼苗上，有助于使小苗存活并促进向土壤的快速移植。本方法可用于改善其他可可品种的组织培养响应和转化频率。
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更新日期：2020-10-11
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