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长春花是原产于非洲东海岸的野生花卉,其所含的长春碱具有良好的抗肿瘤作用。基因tms的编码产物能促进生长素的合成,科研人员利用基因tms构建重组Ti质粒,对愈伤组织进行遗传改造,解决了长春碱供不应求的问题。操作流程如下图所示,请回答下列问题

1.

在体内,人胰岛素基因表达可合成出一条称为前胰岛素原的肽链,此肽链在内质网中经酶甲切割掉氨基端一段短肽后成为胰岛素原,进入高尔基体的胰岛素原经酶乙切割去除中间片段C后,产生A、B两条肽链.再经酶丙作用生成由51个氨基酸残基组成的胰岛素.目前,利用基因工程技术可大量生产胰岛素、回答下列问题:

(1)

人体内合成前胰岛素原的细胞是,合成胰高血糖素的细胞是;

(2)

可根据胰岛素原的氨基酸序列,设计并合成编码胰岛素原的序列,用该序列与质粒表达载体构建胰岛素原基因重组表达载体.再经过细菌转化、筛选及鉴定,即可建立能稳定合成的基因工程菌;

(3)

用胰岛素原抗体检测该工程菌的培养物时,培养液无抗原抗体反应,菌体有抗原抗体反应,则用该工程菌进行工业发酵时,应从中分离、纯化胰岛素原,胰岛素原经酶处理便可转变为胰岛素.

2.

在荧光素酶中加入正确的荧光素底物就可以放出荧光。荧光素酶及其合成基因在生物研究中有着广泛的应用。请回答下列问题:

(1)

荧光素酶基因可以从基因文库中获取,也可以通过方法得到,再利用PCR技术扩增即可,扩增荧光素酶基因利用的原理是。

(2)

限制酶是切割DNA的工具酶,主要从中分离纯化出来。DNA连接酶可以分为两类,一类是从中分离得到的,称为E·coliDNA连接酶;另一类是从中分离得到的。

(3)

将目的基因导入植物细胞,目前常用的目的基因载体是农杆菌的Ti质粒,目的基因需插入到该基因载体的上,然后再转移至受体细胞中。将目的基因导入动物细胞的技术中,应用最多的是。

3.

现代生物科技日新月异,请据图回答:

(1)

图中的PrG、生长激素基因都是目的基因,可从基因文库或cDNA文库获得后,常用技术扩增。扩增后,如何鉴定其化学本质,请简要写出实验设计思路。。

(2)

获得转生长激素基因牛的核心步骤是,过程通常用法把目的基因导入受精卵;过程③若要得到两头基因型一样的牛,可在阶段采用胚胎分割技术获得。

(3)

将PrG导入浆细胞制备单克隆抗体,应进行多次专一性抗体检测,Ⅰ到Ⅱ间检测筛选的目的是。

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