巴氏毕赤酵母基因工程菌高密度发酵表达重组人源胶原蛋白
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摘要
英文摘要
目录
1 绪论
1．1 胶原蛋白概述
1．1．1 胶原蛋白的分布
1．1．2 胶原蛋白的类型
1．1．3 胶原蛋白的结构及理化性质
1．1．4 胶原蛋白的功能及应用
1．1．5 胶原、胶原蛋白与明胶
1．2 胶原蛋白的生产方法
1．2．1 动物源胶原蛋白的传统提取法
1．2．2 类胶原蛋白的化学合成法
1．2．3 胶原蛋白的重组表达
1．3 重组人胶原蛋白的优势与发展趋势
1．3．1 重组人胶原蛋白的优势
1．3．2 重组人胶原蛋白的发展趋势
1．4 巴氏毕赤酵母表达系统
1．5 巴氏毕赤酵母高密度发酵
1．5．1 高密度发酵的主要影响因素
1．5．2 高密度发酵工艺——两阶段培养法
1．6 课题的研究思路和研究意义
1．7 课题的主要研究内容
2 重组人源胶原蛋白在巴氏毕赤酵母中的表达形式
2．1 材料和方法
2．1．1 菌株
2．1．2 培养基
2．1．3 培养方法
2．1．4 分析方法
2．2 结果与讨论
2．2．1 表达产物的SDS-PAGE检测分析
2．2．2 表达产物的PAGE检测分析
2．3 本章小结
3 发酵条件优化
3．1 材料与方法
3．1．1 培养基
3．1．2 培养方法
3．1．3 分析方法
3．2 结果与讨论
3．2．1 BBD设计
3．2．2 实验设计安排及结果
3．2．3 因素水平优化
3．2．4 模型适合性检验
3．2．5 优化验证
3．3 本章小结
4 高密度发酵工艺优化
4．1 材料与方法
4．1．1 发酵设备
4．1．2 培养基
4．1．3 培养方法
4．1．4 分析方法
4．2 结果与讨论
4．2．1 初始发酵方案
4．2．2 初始诱导菌体湿重320g／L的优化方案
4．2．3 培养基流加优化方案
4．2．4 模拟细胞循环发酵
4．2．5 半连续发酵
4．2．6 在12．5L发酵罐上的小规模放大
4．3 高密度发酵动力学
4．3．1 菌体生长模型
4．3．2 产物形成模型
4．3．3 基质消耗动力学
4．3．4 模型的验证
4．4 本章小结
5 重组人源胶原蛋白的分离纯化
5．1 材料与方法
5．1．1 试剂
5．1．2 仪器
5．1．3 实验方法
5．1．4 分析方法
5．2 结果与讨论
5．2．1 重组人源胶原蛋白二聚体与单体的分离
5．2．2 重组人源胶原蛋白单体的制备
5．2．3 重组人源胶原蛋白二聚体的制备
5．3 本章小结
6 重组人源胶原蛋白的结构表征及生物活性
6．1 材料与方法
6．1．1 试剂
6．1．2 仪器
6．1．3 方法
6．1．4 生物活性检测
6．2 结果与讨论
6．2．1 重组人源胶原蛋白的结构
6．2．2 重组人源胶原蛋白的水溶性
6．2．3 重组人源胶原蛋白的成膜性能
6．2．4 重组人源胶原蛋白的黏度
6．2．5 重组人源胶原蛋白的生物活性
6．3 本章小结
7 巴氏毕赤酵母基因工程菌的空间生物学效应
7．1 材料与方法
7．1．1 高磁场重力环境(HMGE)诱变
7．1．2 低剪切力模拟微重力环境(LSMMG)的影响
7．2 结果与讨论
7．2．1 高磁场重力环境(HMGE)诱变
7．2．2 低剪切力模拟微重力环境(LSMMG)的影响
7．3 本章小结
8 重组人源胶原蛋白-聚糖复合物的制备与表征
8．1 材料与方法
8．1．1 试剂
8．1．2 主要仪器及设备
8．1．3 实验方法
8．2 结果与讨论
8．2．1 外观及物理性状
8．2．2 重组人源胶原蛋白-壳聚糖复合物的结构
8．3 本章小结
9 结论
9．1 结论
9．2 创新点
9．3 本课题的发展趋势
致谢
参考文献
附录
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