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免疫学技术第九讲ppt课件.ppt

花匠小妙招
2024-11-20 12:49

免疫学技术第九讲ppt课件

主要细胞免疫技术（一）E玫瑰花环试验 1、原理：人、猪、牛、羊等的T细胞膜上的CD2是绵羊红细胞受体，马、猪的T细胞膜上的CD2是豚鼠红细胞的受体。 2、用途：区分T淋巴细胞主要细胞免疫技术（二）淋巴细胞转化试验 1、原理： PHA+T细胞（有PHA受体）转化大的淋巴母细胞显微镜观察计算转化率转化率=(过渡型细胞+母细胞)/200个淋巴细胞×100% 2、用途：淋巴细胞计数，监测免疫机能 3、特点：简便、准确性差形态学法 3H胸腺嘧啶核苷（3H-T）掺入法原理：试验管对照管 PHA+T细胞+3H-TdR PHA+T细胞转化转化淋巴母细胞淋巴母细胞（掺入3H-TdR）（无3H-TdR掺入） ? 液体闪烁仪测掺入测CPM 3H-T的脉冲数CPM ? 计算转化刺激指数SI=试验管CPM/对照管CPM 特点：准确，需昂贵的闪烁仪原理：PHA、ConA+T细胞（受体） ? 转化分裂、增殖 ? 脱氢酶甲氮唑盐（MTT） ? 甲簪（formazan） ? 酶标仪（595nm）测OD值特点：敏感、准确 MTT比色法主要细胞免疫技术（三）酸性α醋酸萘酯酶测定 1、原理：T淋巴细胞浆内含有的酸性α醋酸萘酯酶，在弱酸性条件下，能使底物酸性α醋酸萘酯水解成醋酸和α萘酚，后者与六偶氮副品红偶联，生成不溶性的红色沉淀物，沉积在T淋巴细胞胞浆内酯酶所在的部位，经甲基绿复染，反应呈现单一或散在的颗粒或斑块，显棕红色。B淋巴细胞则无此种反应。 2、用途：可作为鉴别T淋巴细胞的一种非特异性方法。课堂总结一免疫血清学技术二主要血清学技术三细胞免疫技术四主要细胞免疫技术　　免　疫　学　技　术主讲：李影动物科学技术学院预防兽医学教研室免疫学技术：利用抗原、抗体特异性反应的原理建立的各种检测与分析技术，以及建立在这些技术之上的各种制备方法。一般将涉及到抗原、抗体、免疫细胞、细胞因子等相关技术都称为免疫技术。分类 1、免疫血清学技术 2、细胞免疫技术 3、免疫制备技术 4、分子免疫学技术免疫学技术的应用 1、疾病诊断。 2、生物活性物质的超微定量。 3、物种鉴定（血清型、亚型分析等）。 4、微生物检测。 5、开发研制免疫增强药物、饲料添加剂、疫苗等。 6、分子生物学领域。主要内容一免疫血清学技术二主要血清学技术三细胞免疫技术四主要细胞免疫技术　　专题一：免疫血清学技术一、免疫血清学技术 1、血清学技术：简单地说指体外的抗原与抗体反应，由于抗体多来自于血清故称血清学。 2、分类：（1）凝聚性反应：凝集反应；沉淀反应（2）标记抗体技术：荧光抗体，本酶标抗体，　　　　放射性标记抗体（3）补体参与的反应：补体结合反应；（4）中和反应：病毒中和试验（5）免疫转印：Westen Blotting 一、免疫血清学技术 3、特点：（1）特异性和交叉性　　　如猪瘟病毒抗体只能与猪瘟病毒结合，说明具有特异性；牛痘病毒来预防人的天花和猪瘟疫苗预防牛的病毒性腹泻病的例子说明具有交叉性。一、免疫血清学技术 3、特点：（2）最适比和带现象　　　带现象指因抗原或抗体过多而出现的抑制可见反应的现象，抗体过多易出现前带反应；抗原过多易出现后带现象。一、免疫血清学技术 3、特点：（3）反应的两阶段性　　　第一阶段为抗原与抗体的特异性结合，反应快，几秒钟至几分钟；第二阶段为抗原与抗体的可见现象阶段。一、免疫血清学技术 3、特点：（4）反应的可逆性　　抗原与抗以弱的非共价键结合，受物理化学热力学法则制约。在0-40度内，PH4-9范围易结合；如果温度超过60度或PH降至3度以下，抗原抗体复合物又可重新解离。一、免疫血清学技术 3、特点：（5）反应的敏感性　　　可用于定性，还可以检测极微量的抗原或抗体，其灵敏度大超过了常规的化学方法。一、免疫血清学技术 4、影响血清学反应的因素电解质：一般用NaCl作