使用 TMT 标记和信号增强，通过灵敏度增强质谱策略在生物制药中进行全面的宿主细胞蛋白分析,Analytica Chimica Acta
背景
宿主细胞蛋白 （HCP） 是生物制药生产过程中在宿主细胞中表达的杂质。可能会影响产品质量，并可能导致免疫原性反应或其他不良反应。基于质谱 （MS） 的策略越来越被认为是一种很有前途的 HCP 分析方法，因为它能够在一次测试中同时定量数千种蛋白质。然而，考虑到系统中存在大量过量的生物制药产品蛋白和 HCP 的极低丰度，HCP 分析迫切需要高灵敏度的 MS 方法。
结果
在这项工作中，我们引入了一种新方法，该方法利用宿主细胞裂解物作为增强通道，使用同量异位 TMT 标记来增强生物制药产品中残留 HCP 的 MS 信号，从而将低丰度 HCP 提升到当前 MS 的可检测和可定量水平，而无需使用富集或去除方法，以避免干扰 HCP 的原始浓度。我们的方法超越了以前的基准，在 RM8671 NIST 单克隆抗体 （mAb） 中鉴定出的 HCP 分析数量（3475 种蛋白质中有 23844 条独特肽）明显高于现有记录（848 种蛋白质中有 4541 条独特肽），显示出无与伦比的灵敏度和稳定性。此外，我们的工作流程在单克隆抗体 （mAb） 中成功鉴定了 48 种 UPS1 蛋白中的 44 种，浓度范围为 0.32 至 4.15 ppm，证明了其在生物制药中深入分析 HCP 的有效性。
意义
即使以亚 ppm 水平存在，HCP 也可能损害产品蛋白的稳定性和安全性，并改变药代动力学或中和治疗效果。我们的 MS 信号增强方法展示了 HCP 分析的进步，将更高的灵敏度和更大的 HCP 规模与简化和稳定的工作流程相结合。该方法允许在 <1 ppm 水平上定量 HCP，而不会干扰原始 HCP 浓度，这在现场仍然很少见。
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