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一种秃疮花中木兰花碱的提取分离方法与流程

花匠小妙招
2024-11-25 01:53

本发明涉及植物提取技术领域，尤其涉及一种秃疮花中木兰花碱的提取分离方法。

背景技术：

秃疮花(dicranostigmaleptopodum)，又名红茂草、秃子花，为罂粟科秃疮花属植物，主要分布于我国秦岭以北，甘肃和陕西黄土高原地区，全草有清热解毒、消肿止痛、杀虫等功效(柳军玺，秃疮花生物碱类化学成分研究，中草药，2011，8，1505-1508.)。紫金龙(dactylicapnosscandens(d.don))hutch，又名串枝莲、碗豆七等，为罂粟科紫金龙属植物，主要分布于云南、四川、广西、西藏等地，其根入药有镇痛、止血、消炎、降压之功效，可治疗多种疼痛，是我国云南白族传统习用中草药(钱金栿，白族草药紫金龙成分的研究，西北药学杂志，2000，15，57-58.)。广西地不容(stephaniakwangsiensish.s.lo)为防己科千金藤属植物，主要分布于广西中部至西南部、贵州南部及云南文山地区；块根主治感冒头痛、胃痛、咽喉痛、痢疾、疮痈肿痛、外伤疼痛。

木兰花碱又称唐松草碱，玉兰碱，洋玉兰碱等。其碘化物结晶体(由甲醇+丙酮中)，分解点248～249℃。旋光度+220.1°(甲醇)。已有研究中证实，木兰花碱在保护心血管系统，调节免疫功能和抗氧化等方面具有良好的功效。因此木兰花碱的药用及保健价值研究，逐渐成为国内外研究的热门领域。

中国发明专利cn106565724a公开了一种秃疮花提取物及其提取方法，但该提取方法得到的是含有以木兰花碱为主的多个有效成分的混合物，而不是高纯度的木兰花碱，故有必要对秃疮花中木兰花碱的提取分离技术做进一步的研究。

技术实现要素：

本发明提供了一种秃疮花中木兰花碱的提取分离纯化技术路线，采用乙醇超声提取法，防止高温改变物质的结构和性质，简化提取工艺，减少环境污染，纯化率高。

一种秃疮花中木兰花碱的提取分离方法，包括以下步骤：

a、秃疮花全草药材干燥粉碎，取其干粉，用乙醇溶液超声波提取3-4次，温度为42-48℃，每次45-75min，过滤，合并滤液，60-70℃减压回收溶剂，制得乙醇提取物；

b、充分混悬后，再依次用极性由小到大的不同溶剂萃取：首先用等量石油醚溶剂连续萃取3-4次，混合萃取液，并减压蒸馏除去石油醚溶剂，得石油醚萃取相浸膏；剩余水相，加入1.5-2.5％盐酸进行酸化，并调节至ph为1-2，然后用等量氯仿溶剂萃取3-4次，合并萃取液，并减压除去氯仿溶剂，得酸化氯仿相浸膏；将剩余酸水溶液用20-30％氨水碱化，调至ph为9-10，再用等量氯仿溶剂萃取，合并氯仿萃取液，得碱化氯仿相；余下碱水溶液再用等量的正丁醇溶剂萃取3次，再次合并萃取液，并减压除去正丁醇溶剂，得正丁醇相浸膏；

c、取正丁醇相浸膏，干法上样，硅胶柱层析，依次用洗脱剂chcl3:ch3oh＝6：1、4：1、1：1、1：2的比例梯度洗脱，tcl检测，碘化铋钾试剂检测生物碱，分得原阿片碱、小檗碱、木兰花碱、黄连碱。

优选的，所述的步骤a中，所述的乙醇溶液为体积分数为95％的乙醇溶液。

优选的，所述的步骤a中，所述的乙醇溶液的质量为药材的4-6倍量，即在常压下固液比(g/ml)为1：(4-6)。

本发明的有益之处在于：本发明的秃疮花中木兰花碱的提取分离方法，采用95％乙醇超声提取法，防止高温改变物质的结构和性质，简化提取工艺，减少环境污染，纯化率高。本发明的秃疮花中木兰花碱的提取分离方法，分离后分别得到木兰花碱，而不是含有以木兰花碱为主的多个有效成分的混合物，纯化率高。同时，本发明还首次发现木兰花碱具有抗植物病原真菌的活性。

具体实施方式

实施例1：

一种秃疮花中木兰花碱的提取分离方法，包括以下步骤：

a、秃疮花全草药材干燥粉碎，取其干粉400g，用95％乙醇溶液2000ml超声波提取3次，温度为45℃，每次60min，过滤，合并滤液，65℃减压回收溶剂，制得乙醇提取物；

b、充分混悬后，再依次用极性由小到大的不同溶剂萃取：首先用等量石油醚溶剂连续萃取3次，混合萃取液，并减压蒸馏除去石油醚溶剂，得石油醚萃取相浸膏；剩余水相，加入2.0％盐酸进行酸化，并调节至ph为1.5，然后用等量氯仿溶剂萃取3次，合并萃取液，并减压除去氯仿溶剂，得酸化氯仿相浸膏；将剩余酸水溶液用25％氨水碱化，调至ph为9.4，再用等量氯仿溶剂萃取，合并氯仿萃取液，得碱化氯仿相；余下碱水溶液再用等量的正丁醇溶剂萃取3次，再次合并萃取液，并减压除去正丁醇溶剂，得正丁醇相浸膏；

所述的步骤a中，所述的乙醇溶液的质量为药材的5倍量，即在常压下固液比(g/ml)为1：5。

实施例2：

一种秃疮花中木兰花碱的提取分离方法，包括以下步骤：

a、秃疮花全草药材干燥粉碎取其干粉400g，用95％乙醇溶液2000ml超声波提取3次，温度为48℃，每次45min，过滤，合并滤液，70℃减压回收溶剂，制得乙醇提取物；

b、充分混悬后，再依次用极性由小到大的不同溶剂萃取：首先用等量石油醚溶剂连续萃取3次，混合萃取液，并减压蒸馏除去石油醚溶剂，得石油醚萃取相浸膏；剩余水相，加入2.5％盐酸进行酸化，并调节至ph为1.0，然后用等量氯仿溶剂萃取4次，合并萃取液，并减压除去氯仿溶剂，得酸化氯仿相浸膏；将剩余酸水溶液用20％氨水碱化，调至ph为10.0，再用等量氯仿溶剂萃取，合并氯仿萃取液，得碱化氯仿相；余下碱水溶液再用等量的正丁醇溶剂萃取4次，再次合并萃取液，并减压除去正丁醇溶剂，得正丁醇相浸膏；

所述的步骤a中，所述的乙醇溶液的质量为药材的4倍量，即在常压下固液比(g/ml)为1：4。

实施例3：

一种秃疮花中木兰花碱的提取分离方法，包括以下步骤：

a、秃疮花全草药材干燥粉碎，取其干粉400g，用95％乙醇溶液2000ml超声波提取3-4次，温度为42℃，每次75min，过滤，合并滤液，60℃减压回收溶剂，制得乙醇提取物；

b、充分混悬后，再依次用极性由小到大的不同溶剂萃取：首先用等量石油醚溶剂连续萃取4次，混合萃取液，并减压蒸馏除去石油醚溶剂，得石油醚萃取相浸膏；剩余水相，加入1.5％盐酸进行酸化，并调节至ph为2.0，然后用等量氯仿溶剂萃取3次，合并萃取液，并减压除去氯仿溶剂，得酸化氯仿相浸膏；将剩余酸水溶液用30％氨水碱化，调至ph为9.0，再用等量氯仿溶剂萃取，合并氯仿萃取液，得碱化氯仿相；余下碱水溶液再用等量的正丁醇溶剂萃取3次，再次合并萃取液，并减压除去正丁醇溶剂，得正丁醇相浸膏；

所述的步骤a中，所述的乙醇溶液的质量为药材的6倍量，即在常压下固液比(g/ml)为1：6。

经检测，本发明实施例1中，木兰花碱占正丁醇相0.6％。

本发明中，木兰花碱也是首次发现具有抗植物病原真菌的活性。经检测，木兰花碱的抗菌ec50，其中，木兰花碱对番茄早疫病原菌(9.28μg/ml；27.09μm)和玉米弯孢病原菌(16.18μg/ml；47.24μm)的ec50均低于阳性对照噻菌灵(78.91μg/ml，391.60μm；81.1μg/ml，403.40μm)的ec50。尽管木兰花碱对小麦赤霉(3.25μg/ml，9.49μm)和苹果腐烂(12.27μg/ml，35.82μm)的ec50高于噻菌灵(0.60μg/ml，2.96μm；2.40μg/ml，11.66μm)，但也分别低于本实验室所测的血根碱(16.4μg/ml，35.8μm)和白屈菜红碱(11.1μg/ml，23.4μm)。

经检测，木兰花碱对小麦赤霉、马铃薯干腐、番茄早疫3种植物病原真菌的抑菌率超过90％，对小麦赤霉病原菌的抑菌率达到100％，这是首次发现木兰花碱具有对植物病原真菌的杀灭活性。

依此，木兰花碱作为秃疮花植物抗植物病原真菌的天然活性物质之一，有待进一步研究和开发，期望成为绿色、天然、环境友好型的新型抗菌植物药。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。