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Chemical constituents from flowers of Gentiana dahurica

花匠小妙招
2024-11-30 03:59

摘要:目的研究龙胆科龙胆属小秦艽 Gentiana dahurica干燥花的化学成分。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI、反相ODS等色谱材料进行分离纯化，通过理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果从小秦艽花的乙醇提取物中分离得到20个化合物，包括8个三萜类成分：栎瘿酸（1）、3β-乙酰氧基-28-羟基-12-烯-齐墩果烷（2）、28-羟基-α-香树脂醇（3）、28-羟基-β-香树脂醇（4）、α-香树脂醇（5）、β-香树脂醇（6）、熊果酸（7）、齐墩果酸（8）；12个黄酮类成分：1-羟基-3，7，8-三甲氧基酮（9）、山柰酚（10）、柚皮素（11）、芹菜素（12）、木犀草素（13）、（2 S）-5，4'-二羟基-7- O-β- D-葡萄糖-2，3-二氢黄酮（14）、芹菜素-7- O-β- D-吡喃葡萄糖苷（15）、木犀草素-7- O-β- D-吡喃葡萄糖苷（16）、木犀草素-6-C-β- D-吡喃葡萄糖苷（17）、芹菜素-6-C-β- D-吡喃葡萄糖苷（18）、芹菜素-6-C-β- D-葡萄糖-7- O-β- D-葡萄糖苷（19）、木犀草素-6-C-β- D-葡萄糖-7- O-β- D-葡萄糖苷（20）。结论化合物1~11、13~16、19、20均为首次从小秦艽花中分离得到；化合物2~7、9~11、13~16、19、20均为首次从该植物中分离得到。

Abstract:ObjectiveTo investigate the chemical constituents of the flowers of Gentiana dahurica.MethodsAll compounds were isolated and purified by silica gel, Sephadex LH-20, ODS, and MCI column chromatography. Their structures were determined by physicochemical properties and spectral data.ResultsTwenty compounds were isolated from the flowers of G. dahurica. Among them, eight triterpenoids were identified as roburic acid(1), 3β-acetoxy-28-hydroxy-12-ene-oleanane(2), 28-hydroxy-α-amyrin(3), 28-hydroxy-β-amyrin(4), α-amyrin(5), β-amyrin(6), ursolic acid(7), and oleanolic acid(8). Twelve flavonoids were identified as 1-hydroxy-3, 7, 8-trimethoxyxanthone(9), kaempferol(10), naringenin(11), apigenin(12), luteolin(13),(2S)-naringenin-7- O-β- D-glucopyranoside(14), apigenin-7- O-β- D-glucopyranoside(15), luteolin-7- O-β- D-glucopyranoside(16), isoorientin(17), isovitexin(18), saponarin(19), and lutonarin(20).ConclusionSeventeen compounds 1-11, 13-16, 19, and 20 are found from flowers of G. dahurica for the first time; Compounds 2-7, 9-11, 13-16, 19, and 20 are isolated from this species for the first time.

Key words:flowers of Gentiana dahurica terpenoids flavonoids 3β-acetoxy-28-hydroxy-12-ene-oleanane 28-hydroxy-α-amyrin β-amyrin ursolic acid

小秦艽花为龙胆科（Gentianaceae）龙胆属Gentiana (Tourn.) L. 小秦艽Gentiana dahurica Fisch. 的干燥花，广泛分布于内蒙古、陕西、甘肃、新疆等地，多生长于田边、路旁、河滩、水沟边、向阳山坡等地[1]。小秦艽花收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》（蒙药分册），蒙药名为呼和-朱力根-其木格，为蒙医临床常用药，具有清热、解毒、止咳、祛痰的功效，主治肺热咳嗽、咽喉热、咽喉肿痛、毒热、瘟热等症[2]。小秦艽又名达乌里龙胆、达乌里秦艽，与大叶秦艽Gentiana macrophyllaPall.、粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.、麻花秦艽Gentiana straminea Maxim. 作为中药秦艽的基原植物，收载于《中国药典》2015年版[3]。国内外学者对秦艽（药用部位为根）的化学成分和药理活性做了深入的研究，已经揭示的主要次生代谢产物包括环烯醚萜苷类、三萜类、黄酮类以及芳酸类化合物[4-5]；然而，关于小秦艽花化学成分及其生物活性尚缺乏系统的研究报道。为进一步阐明特色蒙药小秦艽花的主要化学成分，本实验对其进行了系统的研究，分离并鉴定了20个化合物，包括8个三萜类成分：栎瘿酸（roburic acid，1）、3β-乙酰氧基-28-羟基-12-烯-齐墩果烷（3β-acetoxy-28-hydroxy-12-ene-oleanane，2）、28-羟基-α-香树脂醇（28-hydroxy-α-amyrin，3）、28-羟基-β-香树脂醇（28-hydroxy-β-amyrin，4）、α-香树脂醇（α-amyrin，5）、β-香树脂醇（β-amyrin，6）、熊果酸（ursolic acid，7）、齐墩果酸（oleanolic acid，8）；12个黄酮类成分：1-羟基-3,7,8-三甲氧基酮（1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone，9）、山柰酚（kaempferol，10）、柚皮素（naringenin，11）、芹菜素（apigenin，12）、木犀草素（luteolin，13）、(2S)-5,4′-二羟基-7-O-β-D-葡萄糖-2,3-二氢黄酮 [(2S)- naringenin-7-O-β-D-glucopyranoside，14]、芹菜素- 7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（apigenin-7-O-β-D- glucopyranoside，15）、木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（luteolin-7-O-β-D-glucopyranoside，16）、木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（isoorientin，17）、芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷（isovitexin，18）、芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷（saponarin，19）、木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖-7-O- β-D-葡萄糖苷（lutonarin，20）。其中化合物1～11、13 ～16、19、20为首次从小秦艽花中分离得到；化合物2～7、9～11、13～16、19、20为首次从该植物中分离得到。研究也揭示了三萜类化合物组成了小秦艽花中的小极性成分，黄酮类化合物主要构成了小秦艽花中的中极性及大极性成分。

1 仪器与材料

IKA RV 10旋转蒸发仪（东京理化器械株式会社）；Bruker AVANCE III 500 MHz核磁共振仪（德国Bruker公司）；GoodSee-II型薄层色谱摄影仪（上海科哲生化科技有限公司）；LCQ Advantage MAX液质联用仪（美国Thermo Fisher公司）；柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；Sephadex LH-20（德国Pharmacia公司）；MCI、ODS、D101型大孔吸附树脂（北京绿百草科技发展有限公司）；所用试剂均为分析纯。

小秦艽花药材购买于河北安国冷背药材公司，由内蒙古医科大学王素巍讲师鉴定为小秦艽Gentiana dahurica Fisch. 的干燥花，标本（201203）保存于内蒙古医科大学药学院。

2 提取与分离

小秦艽花药材4.0 kg，以8～10倍量的95%乙醇和50%乙醇分别回流提取2次，每次2 h，合并提取液减压浓缩得浸膏，用水混悬，依次用石油醚、醋酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，各萃取液经减压浓缩合并得石油醚萃取部位浸膏156.7 g、醋酸乙酯萃取部位浸膏31.9 g、正丁醇萃取部位浸膏382.0 g。

石油醚萃取部位经常压硅胶柱色谱，石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱，共收集227个流分，TLC检识合并相同流分，并将以下组分反复经硅胶、Sephadex LH-20柱色谱纯化，由Fr. 69～74得到化合物1（25 mg）；Fr. 76得到化合物2（40 mg）；Fr. 83～91得到化合物5和6的混合物（85 mg）；Fr. 127～128得到化合物3和4的混合物（105 mg）；Fr. 143～150得到化合物7和8的混合物（92 mg）；Fr. 129～136得到化合物9（8 mg）。

醋酸乙酯萃取部位进行常压硅胶柱色谱，用石油醚-醋酸乙酯梯度洗脱至纯醋酸乙酯，再用醋酸乙酯-丙酮梯度洗脱至纯丙酮，共收集151个流分，经TLC检识合并相同流分。分别将以下组分经Sephadex LH-20、ODS柱色谱反复分离纯化，由Fr. 13～14得到化合物10（13 mg）、11（13 mg）；Fr. 15～19得到化合物12（16 mg）；Fr. 20～24得到化合物13（15 mg）；Fr. 70～76得到化合物14（36 mg）；Fr. 82～87得到化合物15（40 mg）、18（20 mg）。

正丁醇萃取部位经D101型大孔吸附树脂柱色谱，乙醇-水（10%～95%）梯度洗脱，减压回收乙醇，得10%（48.4 g）、30%（50.1 g）和50%乙醇（10.8 g）各部位浸膏。将10%、30%乙醇部位经MCI色谱柱色谱，甲醇-水梯度洗脱，分别收集到61、77个流分，TLC检识合并相同流分。10%乙醇部位流分Fr. 22～24、Fr. 33～39和30%乙醇部位流分Fr. 23～26、Fr. 27～30经Sephadex LH-20柱及ODS柱反复分离纯化，分别得到化合物20（17 mg）、16（22 mg）、19（14 mg）和17（32 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：针簇状结晶（三氯甲烷），ESI-MS m/z: 441 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 7.26 (1H,s,COOH),5.15 (1H,t,H-12),4.88,4.68 (各1H,s,H-24),1.75,1.09,1.07,0.96,0.92,0.81,0.79 (各3H,s,7×CH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) 数据见表 1。以上数据与文献报道[6]一致，故鉴定化合物1为栎瘿酸。

表 1 化合物1～8的13C-NMR数据(125 MHz,CDCl3) Table 1 13C-NMR spectroscopic data for compounds 1—8 (125 MHz,CDCl3)

化合物2：透明片状结晶（三氯甲烷），ESI-MS m/z: 485 [M＋H]+，确定该化合物相对分子质量为484。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 5.19 (1H,brs,H-12),4.50 (1H,m,H-3),3.54,3.20 (各1H,d,J = 11.0 Hz,H-28),2.29 (3H,s,CH3COO),1.25,1.16,0.96,0.94,0.89,0.88,0.87 (各3H,s,7×CH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) 数据见表 1。以上数据与文献报道[7]一致，故鉴定化合物2为3β-乙酰氧基-28-羟基-12-烯-齐墩果烷。

化合物3：白色粉末。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 5.14 (1H,brs,H-12),3.22 (1H,m,H-3),3.55 (2H,m,H-28),0.98 (3H,d,J = 6.0 Hz,H-29),0.81 (3H,d,J = 6.5 Hz,H-30),0.87,0.94,0.97,1.10,1.17 (各3H,s,5×CH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) 数据见表 1。以上数据与文献报道[8]一致，故鉴定化合物3为28-羟基-α-香树脂醇。

化合物4：白色粉末。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 5.19 (1H,brs,H-12),3.22 (1H,m,H-3),3.54 (2H,m,H-28),0.79,0.89,0.93,0.95,0.99,1.10,1.17 (各3H,s,7×CH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) 数据见表 1。以上数据与文献报道[8]一致，故鉴定化合物4为28-羟基-β-香树脂醇。

化合物5：无色油状物。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 5.13 (1H,brs,H-12),3.20 (1H,m,H-3),1.18 (3H,d,J = 6.0 Hz,H-29),0.88 (3H,d,J = 7.0 Hz,H-30),1.13,1.03,0.97,0.94,0.87,0.83 (各3H,s,6×CH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) 数据见表 1。以上数据与文献报道[8]一致，故鉴定化合物5为α-香树脂醇。

化合物6：无色油状物。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 5.18 (1H,brs,H-12),3.24 (1H,m,H-3),1.25,1.07,0.95,0.93,0.91,0.90,0.83,0.76 (各3H,s,8×CH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) 数据见表 1。以上数据与文献报道[8]一致，故鉴定化合物6为β-香树脂醇。

化合物7：白色粉末。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 5.25 (1H,brs,H-12),3.23 (1H,m,H-3),0.95 (3H,d,J = 8.5 Hz,H-29),0.78 (3H,d,J = 8.5 Hz,H-30),0.85,0.91,0.99,1.13,1.25 (各3H,s,5×CH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) 数据见表 1。以上数据与文献报道[9]一致，故鉴定化合物7为熊果酸。

化合物8：白色粉末。1H-NMR (500 MHz,CDCl3) δ: 5.28 (1H,brs,H-12),3.21 (1H,m,H-3),0.76,0.87,0.90,0.93,1.08,1.13,1.25 (各3H,s,7×CH3)；13C-NMR (125 MHz,CDCl3) 数据见表 1。以上数据与文献报道[9]一致，故鉴定化合物8为齐墩果酸。

化合物9：黄色针晶（甲醇）。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 13.26 (1H,s,1-OH),7.34 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-6),7.17 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-5),6.34 (1H,d,J = 2.5 Hz,H-4),6.32 (1H,d,J = 2.5 Hz,H-2),4.00 (3H,s,8-OCH3),3.93 (3H,s,3-OCH3),3.88 (3H,s,7-OCH3)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ: 163.9 (C-l),96.8 (C-2),166.4 (C-3),92.0 (C-4),157.1 (C-4a),151.0 (C-4b),112.8 (C-5),120.4 (C-6),148.9 (C-7),149.3 (C-8),115.8 (C-8a),104.0 (C-8b),181.2 (C=O),61.8 (3-OCH3),57.2 (8-OCH3),55.8 (7- OCH3)。以上数据与文献报道[10]一致，故鉴定化合物9为1-羟基-3,7,8-三甲氧基酮。

化合物10：黄色粉末，ESI-MS m/z: 287 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz,MeOD) δ: 8.09 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.90 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),6.40 (1H,s,H-8),6.18 (1H,d,J = 1.5 Hz,H-6)；13C-NMR (125 MHz,MeOD) 数据见表 2。以上数据与文献报道[11]一致，故鉴定化合物10为山柰酚。

表 2 化合物10～20的13C-NMR数据 (125 MHz,CDCl3) Table 2 13C-NMR spectroscopic data of compounds 10—20 (125 MHz,CDCl3)

化合物11：无色透明针状晶体（甲醇），ESI-MS m/z: 273 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz,MeOD) δ: 5.34 (1H,dd,J = 13.0,3.0 Hz,H-2),2.70 (1H,dd,J = 17.0,3.0 Hz,H-3e),3.13 (1H,dd,J = 17.0,13.0 Hz,H-3a),5.88 (2H,dd,J = 7.5,2.0 Hz,H-6,8),7.31 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.81 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′)；13C-NMR (125 MHz,MeOD) 数据见表 2。以上数据与文献报道[12]一致，故鉴定化合物11为柚皮素。

化合物12：黄色粉末，ESI-MS m/z: 271 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 12.96 (1H,s,5-OH),10.80 (1H,s,7-OH),10.37 (1H,s,4′-OH),6.78 (1H,s,H-3),6.20 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),6.49 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-8),7.93 (2H,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.93 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 见表 2。以上数据与文献报道[13]一致，故鉴定化合物12为芹菜素。

化合物13：黄色粉末，ESI-MS m/z: 287 [M＋H]+。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 12.98 (1H,s,5-OH),10.86 (1H,s,7-OH),9.55 (2H,s,3′,4′-OH),7.40 (2H,m,H-2′,6′),6.89 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5′),6.68 (1H,s,H-3),6.45 (1H,d,J = 1.5 Hz,H-8),6.19 (1H,d,J = 1.5 Hz,H-6)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 见表 2。以上数据与文献报道[13]一致，故鉴定化合物13为木犀草素。

化合物14：黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 12.05 (1H,s,5-OH),9.59 (1H,s,4′-OH),5.50 (1H,dd,J = 13.0,3.0 Hz,H-2),2.75 (1H,dd,J = 17.0,3.0 Hz,H-3e),3.20 (1H,dd,J = 17.0,13.0 Hz,H-3a),6.14 (1H,dd,J = 10.5,2.0 Hz,H-6,8),7.33 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.80 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),5.08 (1H,d,J = 7.0 Hz,H-1″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 见表 2。以上数据与文献报道[14]一致，故鉴定化合物14为(2S)-5,4′-二羟基-7-O- β-D-葡萄糖-2,3-二氢黄酮。

化合物15：淡黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 12.97 (1H,s,5-OH),10.42 (1H,s,4′-OH),6.88 (1H,s,H-3),6.45 (1H,d,J = 2.0 Hz,H-6),6.84 (1H,d,J = 2.5 Hz,H-8),7.97 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.94 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),5.08 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-1″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 见表 2。以上数据与文献报道[15]一致，故鉴定化合物15为芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物16：淡黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 13.00 (1H,s,5-OH),9.98 (1H,s,3′-OH),9.46 (1H,s,4′-OH),6.76 (1H,s,H-3),6.45 (1H,d,J = 2.5 Hz,H-6),6.79 (1H,d,J = 2.5 Hz,H-8),7.44 (2H,m,H-2′,6′),6.91 (1H,d,J = 8.0 Hz,H-5′),5.09 (1H,d,J = 7.0 Hz,H-1″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 见表 2。以上数据与文献报道[15]一致，故鉴定化合物16为木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物17：淡黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 13.57 (1H,s,5-OH),10.60 (1H,s,7-OH),9.94 (1H,s,3′-OH),9.42 (1H,s,4′-OH),7.42 (2H,m,H-2′,6′),6.89 (1H,d,J = 8.5 Hz,H-5′),6.68 (1H,s,H-3),6.48 (1H,s,H-8),4.58 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-1″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 数据见表 2。以上数据与文献报道[16]一致，故鉴定化合物17为木犀草素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物18：淡黄色粉末。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 13.56 (1H,s,5-OH),10.43 (1H,brs,4′-OH),7.93 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.92 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),6.77 (1H,s,H-3),6.49 (1H,s,H-8),4.59 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-1″)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 数据见表 2。以上数据与文献报道[17]一致，故鉴定化合物18为芹菜素-6-C-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物19：黄色无定形粉末。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 13.54 (1H,s,5-OH),10.44 (1H,s,4′-OH),7.98 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-2′,6′),6.95 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-3′,5′),6.91 (1H,s,H-3),6.88 (1H,s,H-8),4.66 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-1″),5.14 (1H,d,J = 7.5 Hz,H-1′′′)；13C-NMR (125 MHz,DMSO-d6) 数据见表 2。以上数据与文献报道[18]一致，故鉴定化合物19为芹菜素-6-C-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷。

化合物20：淡黄色无定形粉末。1H-NMR (500 MHz,DMSO-d6) δ: 13.57 (1H,s,5-OH),10.02 (1H,brs,3′-OH),9.46 (1H,brs,4′-OH),7.42 (2H,m,H-2′,6′),6.92 (2H,d,J = 8.5 Hz,H-5′),6.84 (1H,s,H-3),6.80 (1H,s,H-8),4.67 (1H,d,J = 9.5 Hz,H-1″),5.01 (1H,d,J = 7.5 Hz,H-1′′′)；13C-NMR (125 MHz,DMSO- d6) 数据见表 2。以上数据与文献报道[19]一致，故鉴定化合物20为木犀草素-6-C-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-葡萄糖苷。