延缓牡丹花衰老的PsLTP基因、载体、重组菌及应用
本发明涉及基因领域，具体涉及延缓牡丹花衰老的 psltp基因、载体、重组菌及应用。
背景技术：
1、牡丹（ paeoniasection moutan dc.）原产于中国，具有很高的观赏、药用和油用价值（wang et al., 2019）。牡丹有两千多个栽培品种，以其硕大的花朵、多样的色彩、浓郁的香气和富贵繁荣的象征而著称，素有“花中之王”的美誉。牡丹常用在庭院、盆栽以及特色牡丹园中，吸引着世界各地的游客，极具观赏和经济价值。然而，牡丹自然花期较短，单花寿命只有3~5天，严重制约着其直接和间接经济效益。
2、然而，牡丹为多年生木本植物，常规杂交育种效率很低；牡丹开花的遗传基础和分子调控机制缺乏研究，难以通过育种和栽培技术解决牡丹开花时间短的问题（guo et al.,2022; zhang et al., 2019a）。因此，延缓花瓣衰老和延长开花期已成为突破限制牡丹经济效益的关键；挖掘花瓣衰老相关基因，揭示花瓣衰老的调控机制，对于加快牡丹长花期新品种选育具有重要指导意义，已成为观赏园艺界的焦点之一。
3、非特异性脂质转移蛋白（nsltp）是一种小型碱性蛋白质家族，在植物中广泛分布。它能够结合并转移细胞膜之间或植物与环境之间的各种脂质（missaoui et al., 2022;salminen et al., 2016）。nsltp蛋白包含8个保守的半胱氨酸基序（8cm），其一般形式为c-xn-c-xn-cc-xn-cxc-xn-c-xn-c（yang et al., 2022; zhang et al., 2019b）。edstam等人（2011）综合考虑了内含子位置、gpi锚定、8个保守的半胱氨酸基序以及序列相似性等，将nsltp分为了ltp1（约9kd）、ltp2（约7kd）和c-k类型。拟南芥中ltp1类型的脂质转运蛋白基因均预测编码病程相关蛋白；f、h、g和 k存在于非开花植物，d和g类型主要存在于早期陆地植物，而其他一些类型则仅限于单一物种，比如h类型只发现于江南卷柏（edstam et al.,2011）。
4、nsltp参与多种生物过程，包括转运脂质、脂质代谢、角质层形成、细胞壁延伸、信号传导、植物应激反应和植物生长发育等（ahmed et al., 2017; chae et al., 2010;jung et al., 2009; liu et al., 2015; zhang et al., 2010; zhou et al., 2019）。 nsltp在拟南芥和水稻中的过表达能够显著增加种子的含油量（song et al., 2021; wanget al., 2015）。另外，一些不同植物来源的 nsltp的过表达，均能够提高拟南芥、烟草、马铃薯和水稻对病原体感染的抗性（jung et al., 2005; patkar and chattoo, 2006; wanget al., 2021）。 nsltp的过表达也能提高番茄和水稻的耐盐性和耐寒性（gangadhar etal., 2016; zhao et al., 2020）；还有一些 nsltp已被证明参与活性氧（ros）清除的调节，这对于植物在胁迫条件下的存活至关重要（wang et al., 2014）。前人研究发现，拟南芥中 at3g51600（ltp1类型）的功能获得性突变体ltp-1表现出有性生殖缺陷，同时也表现出初生芽矮化、下胚轴伸长延迟、各种非正常的组织融合以及多分枝等性状，表明 ltp参与多种植物生长发育过程（chae et al., 2010）。然而，拟南芥中另外一个ltp1类型的 nsltp（ at5g59320）能够促使脱落酸（aba）的含量升高，进而导致病原菌易感（gao et al.,2016）。
5、前期研究中，发明人测定了牡丹花瓣衰老过程中的基因表达谱，发现牡丹基因组中的 psltp1基因参与了牡丹花瓣衰老进程，在延缓牡丹花衰老、延长花期方面具有应用前景，特提出本发明。
技术实现思路
1、为了解决延缓花瓣衰老和延长开花期的技术问题，本发明提供了延缓牡丹花衰老和延长牡丹花花期的 psltp1基因，其核苷酸序列如seq id no：1所示。
2、atggctggttcaggattcctcaagctcgcttgtgtggcatttgccttgatgatggtggctgcaccttgtgcagaagccataacatgtggtcaggtgacgagcagcctgactccatgcattggttacctgagaagcggtggagcagtcccaccggcctgctgcagtggcgtcaagtccctcaacggtgctgctaagaccacaccggaccgccagactgcctgcaactgccttaaatcagcagctggtagcatctctggcatcaatttgagttttgctagtggccttcctggcaagtgtggcgtcaacattccttacaagattagcccctccactgactgcagcacattaaaataa（seq id no：1）
3、进一步地，所述 psltp1基因编码的psltp1蛋白的氨基酸序列如seq id no：2所示。
4、magsgflklacvafalmmvaapcaeaitcgqvtssltpcigylrsggavppaccsgvkslngaakttpdrqtacnclksaagsisginlsfasglpgkcgvnipykispstdcstlk（seq id no：2）。
5、本发明还提供了一种psltp1蛋白，其氨基酸序列如seq id no：2所示。
6、本发明还提供了一种载体，所述载体为质粒载体，包含所述 psltp1基因。
7、进一步地，所述载体为psuper 1300-gfp载体或pbi121载体与 psltp1基因重组获得的质粒。
8、本发明还提供一种重组菌，包含所述载体。
9、进一步地，所述重组菌为大肠杆菌或农杆菌，优选大肠杆菌（e.coli）菌株dh5ɑ、农杆菌菌株gv3101、或农杆菌菌株eha105。
10、本发明还提供了所述 psltp1基因、psltp1蛋白、所述载体或重组菌在延缓牡丹花瓣衰老，和/或延长牡丹花花期的应用。
11、进一步地，所述应用可以包括如下几种方式：
12、①提高牡丹的 psltp1基因表达，例如基因修饰或者导入所述载体；
13、②用 psltp1基因、所述载体或重组菌表达psltp1蛋白，再用含有psltp1蛋白的溶液侵染牡丹花；
14、③培养扩增重组菌，用含有重组菌的悬液侵染牡丹花。
15、本发明还提供了一种延缓牡丹花衰老的方法，包括：
16、（1）设计引物对 psltp1的开放阅读框进行扩增，构建pbi21- psltp1超表达载体并转化农杆菌eha105；
17、（2）用侵染液重悬菌体至od值达到1.0-1.2，将牡丹花花苞浸泡于侵染液中侵染。
18、进一步地，所述侵染液包含：2.132 g/l mes、0.9522 g/l mgcl2、0.5 mol/l as。
19、与现有技术相比，本发明的有益效果至少包括：
20、1、本发明首次在“雪映桃花”牡丹花中挖掘出了 psltp1基因，并证明了 psltp1基因参与了牡丹花瓣衰老进程。
21、2、本发明成功扩增了 psltp1基因，探究了其在牡丹花中的调控机理。
22、3、本发明构建了 psltp1基因的载体、重组菌，验证了其在延缓牡丹花衰老、延长花期方面具有应用前景。
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