甘蓝型油菜(Brassica napus)是重要的油料作物之一,也是全球植物油生产的重要来源。作为我国主要两年生的越冬植物,其种植受时令和季节等限制,快速和高效的获得转基因植株对研究相关基因的功能十分重要。建立高效的遗传转化系统和便捷的转基因阳性筛选方法,对在甘蓝型油菜中进行基因功能分析和分子育种具有重要意义。
近日,本课题组在Plant methods发表了标题为A convenient, rapid and efficient method for establishing transgenic lines of Brassica napus的研究论文。该论文报道了一种快速、便捷且高效的甘蓝型油菜基因转化方法和转基因材料极早期的快速筛选方法,通过快速筛选的愈伤组织获的转基因苗具有很高的阳性率。该技术手段对于甘蓝型油菜规模化的遗传转化和开展相关基因功能研究具有重要意义。
该研究将编码DsRed红色荧光蛋白的基因整合至两种不同的植物表达载体(超表达载体和RNA干扰载体)中。基于现有农杆菌介导的甘蓝型油菜下胚轴遗传转化系统,通过对初始农杆菌浓度(OD600)运用(0.4/OD600)*2进行体积换算,进而获得用于收集菌体的农杆菌液体积,使得最终用于侵染的农杆菌浓度OD600值在0.04左右。对8种不同油菜品种(品系)进行遗传转化,运用红色滤光片透过绿色激发光可以方便、快捷地筛选带有DsRed诱发的红色荧光的愈伤组织和再生芽,这8种材料的红色荧光视觉筛选率为59.1%,进一步PCR验证表明96.1%带有红色荧光的愈伤组织有目的基因插入。
对阳性转基因幼苗可进一步用DsRed红色荧光可视化筛选,在子叶、下胚轴、种皮和根中均可观察到红色荧光。高效的遗传转化系统与便捷、快速的转基因阳性可视化筛选方法相结合,对加速转基因阳性油菜苗获取具有很好的应用前景。
原文链接:https://plantmethods.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13007-020-00585-6。
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