微生物实验室常见20种培养基配方
微生物实验室常见20种培养基配方
成分：
牛肉膏 5克,蛋白胨 10克,氯化钠 3克,磷酸氢二钠 2克,0.2％滇麝香草酚蓝溶液 12毫升,蒸馏水 1000毫升,PH 7.4
制法
1. 葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5％加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内，121摄氏度高压灭菌15分钟。
2. 其他各种糖发酵管可按上述成分配好后，分装每瓶1000 毫升，121摄氏度高压灭菌15分钟。另将各种糖类分别配好10%溶液，同时高压灭菌。将5毫升糖溶液加入于100 毫升培养基内，以无菌操作分装小试管。
注：
蔗糖不纯，加热后会自行水解者，应采用过滤法除菌。
试验方法：
从琼脂斜面上挑取小量培养物接种，于36摄氏度±1摄氏度培养，一般观察2～3d。迟缓反应需观察14~30d。
成分：
蛋白胨 20克,猪胆盐（或牛、羊胆盐）5克,乳糖 10克,0.04%滇甲酚紫水溶液 25毫升,蒸馏水 1000毫升
制法：将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10 毫升，并放入一个小倒管，115摄氏度高压灭菌15分钟。
注：
双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。
三、5％乳糖发酵管
成分：
蛋白胨 0.2克,氯化钠 0.5克,乳糖 5克,2%溴麝香草酚蓝水溶液 1.2毫升,蒸馏水 100毫升,pH 7.4
制法：除乳糖以外的各成分：溶解于50毫升蒸馏水内，校正pH。将乳糖溶解于另外50毫升蒸馏水内，分别灭菌121 摄氏度 15分钟，将两液混合，以无菌操作分装于灭菌小试管内。
注：
在此培养基内，大部分乳糖迟缓发酵的细菌可于ld内发酵。
成分：
磷酸氢二钾 5克,多胨 7克,葡萄糖 5克,蒸馏水 1000毫升
制法：溶化后校正pH，分装试管，每管1毫升 ，121摄氏度高压灭菌15分钟。
甲基红（MR）试验：自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中，于36±1摄氏度培养2～5d，哈夫尼亚菌则应在22～25摄氏度培养。滴加甲基红试剂一滴，立即观察结果。鲜红色为阳性，黄色为阴性，甲基红试剂配法：10毫克甲基红溶于30毫升95％乙醇中，然后加入20 毫升蒸馏水。
V-P试验：用琼脂培养物接种本培养基中，于36±1摄氏度培养2～4d。哈夫尼亚菌则应在22～25摄氏度培养。加入6％α-萘酚-乙醇溶液0.5毫升和40％氢氧化钾溶液0.2毫升充分振摇试管，观察结果阳性反应立刻或于数分钟内出现红色，如为阴性，应放在36±1摄氏度下培养4h再进行观察。
五、营养明胶
成分：
蛋白胨 5克,牛肉膏 3克,明胶 120克,蒸馏水 1000毫升,pH 6.8~7.0
制法：加热溶解，校正至pH7.4～7.6，分装小管，121摄氏度高压灭菌10分钟，取出后迅速冷却，使其凝固，复查最终pH应为6.8～7.0。
试验方法：
用琼脂培养物穿刺接种，放在22～25摄氏度培养，每天观察结果，记录液化时间。或放在36士1摄氏度培养，每天取出，放冰箱内30分钟后再观察结果。
六、苯丙氨酸培养基
成分：
酵母浸膏 3克,DI-苯丙氨酸（或L-苯丙氨酸1克）2克,磷酸氢二钠 1克,氯化钠 5克,琼脂 12克,蒸馏水 1000毫升
制法：加热溶解后分装试管，121摄氏度高压灭菌15分钟，使成斜面。
试验方法：
自琼脂斜面上挑取大量培养物，移种于苯丙氨酸琼脂，在36士1摄氏度培养4h或18～24h，滴加10％三氯化铁溶液2～3滴，自斜面培养物上流下，苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。
成分：
蛋白胨（或胰蛋白胨）20克,氯化钠 5克,蒸馏水 1000毫升,pH7.4
制法：按上述成分配制，分装小试管，121摄氏度高压灭菌15分钟。
靛基质试剂
柯凡克试剂：将5克对二甲氨基苯甲醛溶解于75毫升戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25毫升。
欧-波试剂：将1克对二甲氨基苯甲醛溶解于95毫升95%乙醇内，然后缓慢加入浓盐酸20 毫升。试验方法：挑取小量培养物接种，在36士1摄氏度培养1～2d，必要时可培养4～5d。加入柯凡克试剂约0.5毫升，轻摇试管，阳性者于试剂层呈深红色；或加入欧-波试剂约0.5 毫升，沿管壁流下，覆盖于培养液表面，阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。
注：
蛋白胨中应含有丰富的色氨酸。每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。
成分：
牛肉膏 3克,酵母浸膏 3克,蛋白胨 10克,硫酸亚铁 0.2克,硫代硫酸钠 0.3克,氯化钠 5克,琼脂 12克,蒸馏水 1000 毫升
制法：加热溶解，校正pH，分装试管，115摄氏度高压灭菌15分钟，取出直立候其凝固。
试验方法：
挑取琼脂培养物，沿管壁穿刺，于36士1摄氏度培养1～2d，观察结果。产硫化氢者使培养基变为黑色。
注：
肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生，应采用三糖铁琼脂或本培养基。
成分：
蛋白胨 1克,氯化钠5克葡萄糖1克,磷酸二氢钾 2克,4%酚红溶液 3 毫升,琼脂 20克,蒸馏水 1000 毫升,20%尿素溶液 100毫升
制法：将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH，加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121摄氏度高压灭菌15分钟。冷至50～55摄氏度，加入经除菌过滤的尿素溶液，尿素的最终浓度为2％，最终pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管内，放成斜面备用。
试验方法：
挑取琼脂培养物接种，在36士1摄氏度培养24h，观察结果。尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。
成分：
蛋白胨10克,氯化钠 5克,磷酸二氢钾 0.225克,磷酸氢二钠 5.64克,蒸馏水 1000 毫升,0.5%氰化钾溶液 20 毫升,pH 7.6
制法：将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶，121摄氏度高压灭菌15分钟。放在冰箱内使其充分冷却。每100 毫升培养基加入0.5％氰化钾溶液2.0毫升（最后浓度为1：10000），分装于12mm*100mm灭菌试管，每管约4毫升，立刻用灭菌橡皮塞塞紧，放在4摄氏度冰箱内，至少可保存两个月。同时，将不加氰化钾的培养基作为对照培养基，分装试管备用。
成分：
蛋白胨10克,牛肉膏3克,氯化钠5克,琼脂15～20克,蒸馏水1000毫升
制法：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2毫升，校正pH至7.2~7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化分装烧瓶，121摄氏度高压灭菌15分钟。
注：
此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%；如作成平板或斜面，则应为2%。
成分：
蛋白胨 10克,牛肉膏 3克,氯化钠 5克,蒸馏水 1000毫升,pH7.4
制法：按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225 毫升 ，121摄氏度高压灭菌15分钟。
成分：
蛋白胨 10克,氯化钠 5克,磷酸氢二钠 9克,磷酸二氢钾 1.5克,蒸馏水1000毫升,pH 7.2
制法：按上述成分配好后以大烧瓶装，121摄氏度高压灭菌15分钟。临用时无菌分装每瓶225毫升。
注：本培养基供沙门氏菌前增菌用。
注：
本培养基供沙门氏菌前增菌用。
十四、EC肉汤
成分：
胰蛋白胨 20克,3号胆盐（或混合胆盐）1.5克,乳糖 5克,磷酸氢二钾 4克,磷酸二氢钾 1.5克,氯化钠 5克,蒸馏水 1000毫升
制法：将上述成分混合，溶解后，分装有发酵倒管的试管中，121摄氏度高压灭菌15分钟。最终pH为6.9±0.2。
十五、四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）
基础培养基
多胨或眎胨 5克,胆盐 1克,碳酸钙 10克,硫代硫酸钠 3克,蒸馏水 1000毫升,碘溶液 碘 6克,碘化钾 5克,蒸馏水 20 毫升
制法：将基础培养基的各成分加入蒸馏水中，加热溶解，分装每瓶100毫升。分装时应随时振摇，使其中的碳酸钙混匀，121摄氏度高压灭菌15分钟备用。临用时每100毫升基础培养基中加入碘溶液2毫升，,0.1%煌绿溶液1毫升。
十六、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）
成分：
蛋白胨 5克,乳糖 4克,亚硒酸氢钠 4克,磷酸氢二钠 5.5克,磷酸二氢钾 4.5克,L-胱氨酸 0.01克,蒸馏水 1000毫升
1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液的配法：称取L-胱氨酸0.1克或（DL-胱氨酸0.2克），加1mol/L氢氧化钠1.5毫升，使溶解，再加入蒸馏水8.5毫升即成。
制法：将除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900毫升蒸馏水中，加热煮沸，候冷备用。另将亚硒酸氢钠溶解于100毫升蒸馏水中，加热煮沸，候冷，以无菌操作与上液混合。再加入1% L-胱氨酸-氢氧化钠溶液1毫升。
分装于灭菌瓶中．每瓶100毫升，pH应为7.0±0.1。
成分：
蛋白胨 10克,牛肉膏 5克,葡萄糖 5克,硫酸亚铁 0.3克,磷酸氢二钠 4克,煌绿 0.025克,柠檬酸铋铵 2克,亚硫酸钠 6克,琼脂 18~20克,蒸馏水 1000毫升,pH 7.5
制法：
1.将前面5种成分溶解于300毫升蒸馏水中。
2将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠另用50毫升蒸馏水溶解。
3将琼脂于600毫升蒸馏水中煮沸溶解，冷至80摄氏度。
4将以上三液合并，补充蒸馏水至1000毫升，校正pH，加0.5%煌绿水溶液5毫升，摇匀，冷至50～55摄氏度，倾注平皿。
注：
此培养基不需高压灭菌。制备过程不宜过分加热，以免降低其选择性。应在临用前一天制备，贮存于室温暗处，超过48h不宜使用。
成分：
蛋白胨 20克,牛肉膏 5克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化钠 5克,硫酸亚铁铵 0.2克,硫代硫酸钠 0.2克,琼脂 12克,酚红 0.025克,蒸馏水 1000 毫升,pH 7.4
制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 毫升，摇匀，分装试管。装量宜多些，以便得到较高的底层。121摄氏度高压灭菌15分钟，放置高层斜面备用。
十九、三糖铁琼脂换用方法
成分：
蛋白胨15克,眎胨5克,牛肉膏 3克,酵母膏 3克,乳糖 10克,蔗糖 10克,葡萄糖 1克,氯化钠 5克,硫酸亚铁 0.2克,硫代硫酸钠 0.3克,琼脂 12克,酚红 0.025克,蒸馏水 1000 毫升,pH7.4
制法：将除琼脂和酚红以外的各成分溶解于蒸馏水中，校正pH，加入琼脂，加热煮沸，以溶化琼脂。加入0.2%酚红水溶液12.5 毫升，摇匀，分装试管，装量宜多些，以便得到较高的底层。121摄氏度高压灭菌15分钟，放置高层斜面备用。
成分：
蛋白胨2克,氯化钠 按不同量加,蒸馏水100 毫升,pH7.7
制法：配制2%蛋白胨水，校正pH，共配制5瓶，每瓶100毫升。每瓶分别加入不同量的氯化钠：（1）不加；（2）3克；（3）7克；（4）9克；（5）11克。待溶解后分装试管，121摄氏度高压灭菌15分钟
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