石蜡切片操作
一 材料的选择与分割
选取新鲜、无病虫害并具代表性的材料
先作徒手切片或剥离检查，决定适宜的材料，立即固定。
注意按季节和植物 生长发育不同阶段取材。
材料大小要适当;
例根：直径5mm以内----切取5-10mm小段
例叶：切成2-5mm
例茎：横切或纵切
例花：花药:横纵;子房：横纵
二 杀死、固定、保存
杀死：在制片过程中，将制片的材料迅速杀死，使组织块尽量保持原生活状态。这种处理叫杀生(死)。用一种或多种化学药品。
固定：在杀生处理过程中，将材料按原来的形态保存下来，并为后续制片保持固有形态，达到固定的要求。杀生、固定关系密切，通常二者兼有作用。
保存：组织块茎杀伤固定后，能较长时间保存下来，仍能制片。
常用固定液：
FAA固定液(福尔马林-冰醋酸-酒精)，万能固定液或标准保存液。
适用范围：根、茎、叶、花药、子房的组织切片均可
固定时间：一般24h， 并可在此液中长期保存。温度宜低(10度左右)
之后不必水洗，直接70%(嫩材料50%)酒精洗---进行脱水。
配法：福尔马林(38%甲醛)----5ml
冰醋酸-------------------------5ml
70%酒精-----------------------90ml (幼嫩材料50% 酒精防材料收缩)
用于胚胎材料改为：50% 酒精----89ml
甲醛------------5ml
冰醋酸---------6ml
~undefined可加入5ml甘油(丙三醇)放固定液蒸发和材料变硬。
Canoys Fluid(卡诺氏液)
适用范围：常用于细胞学如根尖，花药的压片，及子房石蜡切片
固定时间：不同。根尖、花药15min-半小时，花药1h，其他材料不超过24小时(12-24h)否则材料受到破坏。固定后用同浓度酒精洗涤。
保存液：70% 酒精(95%，85% 酒精浸洗约20 分---70%酒精中保存)
卡诺液配制：纯酒精(或95%酒精)：冰醋酸=3：1
三 脱水
制作石蜡切片，要把材料包埋在石蜡中，所以浸蜡前必须把材料中水分出去。有水分石蜡无法渗入到细胞中。
脱水：就是用一种药剂，把材料中水分全部代替干净。
其作用：
1 材料变硬，形状更稳定。
2 除尽水分，使包埋剂和封固剂渗透于组织中，包埋剂和封固剂不能与水混合，必须
把水除尽。
常用脱水剂：
酒精(不是最理想的，易引起组织收缩，使材料变硬。脱水后还要用其他有机溶剂除尽酒精。但应用久，价格低廉。)
注意：
1 脱水从低浓度开始逐渐替换高浓度酒精。否则发生细胞收缩。
2 从同浓度(保存液中)酒精开始。例FAA 从70% (50%)酒精开始。
3 30%---50%---70%----85%----95%(加少许番红，便于包埋中识别)---100%--100%。加盖，各级酒精停留时间因材料而定，材料2mm，各2-4h。
四 透明
脱水后要经过常用的有机溶剂(氯仿，二甲苯等)进行透明，便于石蜡及封固胶进入和溶合。当材料为透明剂所占，在显微镜下观察成透明状态。
常用的透明剂：二甲苯、氯仿、冬青油等。
二甲苯(xylol)是目前应用最广的透明剂，作用迅速，但易使材料变脆。盖盖!!
注意：使用时材料必脱尽水分，否则发生乳状混浊。
避免材料收缩----1/2 xyl + 1/2 alc (1h)-----xyl (1h)-----xyl (0.5 h)
五 浸蜡
以石蜡透入细胞组织内的全过程称为---浸蜡。其目的在于，除去材料中的二甲苯而代之以石蜡。
方法：
1 透明材料放小烧杯中，注新二甲苯漫过材料
2 加溶化的石蜡，由烧杯一侧慢慢倒入，与二甲苯等量
3 小烧杯放入蜡箱内(60℃)30-60min
4 换纯蜡，每次1-2h
六 包埋
选蜡：软材料---------------------------54-56℃熔点，(黄承芬p73)
5um以下厚度或夏季切片---58-60℃石蜡
叠纸盒
倒干净溶解的石蜡,半盒。
把材料放入，排列好，切面朝下(注意横切纵切)
赶气泡，放冷水中冷却。
七.切片
八.粘片和展片。
九.脱蜡：二甲苯
十.染色：苏木精、番红、固绿、碱性品红
单染 ：只用一种染料
双重染色：两种染料 番红--固绿; 苏木精---曙红
多重染色：多种染料 番红—固绿—桔红G;酸性品红—苯胺蓝—桔红G等
相关知识
植物石蜡切片技术
植物石蜡切片之溶液配制、实验用品和操作步骤
【求助】求助植物组织石蜡切片的正确方法
一种用于竹叶石蜡切片前的去硅预处理方法与流程
生物切片标本 洋葱花药切片实验过程
槐树花花蕾切片
适合于植物花器官的冰冻切片技术
嫁接用的石蜡是什么蜡
生物标本 雨林教育 花类生物标本
植物试验切片观察.ppt
网址: 石蜡切片操作 https://m.huajiangbk.com/newsview1155741.html
| 上一篇: 线段的垂直平分线的性质1：线段垂 |
下一篇: 5G网络切片技术解析，一文让你读 |
