一种大豆转基因组培苗的生根方法及生根诱导培养基与流程
本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种大豆转基因组培苗的生根方法及生根诱导培养基。
背景技术：
大豆(glycinemax(l.)merr.)是一种重要的油料和饲料作物，具有重要的经济价值。利用转基因技术进行的大豆育种是目前的研究热点之一。与其他的作物相比，大豆比较难转化，主要表现为大豆转化效率低，转化后再生频率低，生根难等问题。其中生根难是大豆植株的再生过程中最重要的环节。只有通过再生根自主吸收养分，才能使得大豆芽苗健康的生长发育。根据已发表文章的报道，大豆的生根一般采用iaa,iba或naa这常见的三种激素的诱导。其中，激素iaa最早主要用于大豆苗移栽时，根部涂抹刺激生根；此后，2008年，天津大学的学者赵清使用0.2mg/liba诱导大豆生根，其生根效率最高为85％；2013年，内蒙古大学的学者胡卫静使用0.5mg/lnaa诱导发现生根快，但根较粗大，没有根毛；2014年，青岛农业大学的学者姜国勇使用0.5mg/liba诱导1-3天，随后转移到生根培养基中培养14天即可长成2-5条根，生根率达到100％。因此根据现有的大豆生根技术手册，虽然可以在一定条件下生根，但无法实现大豆规模化生根，成为大豆大规模分子育种的瓶颈，亟待解决。
技术实现要素：
为解决上述技术问题，本发明提供了一种大豆转基因组培苗的生根方法，解决了现有技术中大豆生根难、生根慢、无法实现规模化生根的问题，填补了技术空白，将利用该方法实施大规模大豆分子育种，为转基因研究提供了重要的技术平台和支持。
本发明是这样实现的，根据本发明的一个方面，提供一种诱导培养基，成分包括ms粉2.0-2.5g/l、萘乙酸0.2-0.4mg/l、蔗糖10-15g/l、琼脂6-8g/l，ph值为5.6-5.8。
进一步地，所述诱导培养基成分包括ms粉2.2g/l、萘乙酸0.3mg/l、蔗糖15g/l、琼脂6.5g/l，ph值为5.6-5.8。
根据本发明的另外一个方面，提供一种大豆转基因组培苗的生根方法，包括如下步骤：
1)按照上述的配方配置生根诱导培养基；
2)大豆转基因组培苗的预处理及接种：在超净工作台上，用镊子将长度为3-4cm的大豆转基因组培苗用剪刀沿茎基部平剪切，然后将切下的组培苗插入步骤1)中配置的生根诱导培养基中；
3)根诱导：将步骤2)中接种好大豆转基因组培苗的生根诱导培养基置于温室中，温室培养温度为24-26℃、湿度为50-70％、光照强度为1500-2000lux、光照时间为16h，培养3-4天后获得带根的大豆组培苗；
4)炼苗：将步骤3)中生好根的大豆组培苗直接转移到蛭石土中，加盖保湿置于温室中暗培养过夜，次日打开盖子，在温室中光照培养即可成活。
进一步地，大豆转基因组培苗用剪刀沿茎基部平剪切，并将切口插入所述生根诱导培养基液面以下0.3-0.5cm处。
进一步地，插入到所述生根诱导培养基中的大豆转基因组培苗在温室中培养3-4天，可获得长度为3-5mm长度的根。
与现有技术相比，本发明的优点在于：该生根方法所需时间短(3-4天)，并且可获得100％的生根效率和100％的成活率。与现有生根技术相比，本发明建立的生根技术体系能够极大的缩减生根时间，使大豆规模化生根，为大豆转基因研究提供重要的技术平台和支持。
附图说明
下面结合附图及实施方式对本发明作进一步详细的说明：
图1为大豆(品种jack)应用本发明的方法的生根苗；
图2为大豆(品种jack)应用本发明的方法的底部生根图；
图3为大豆(品种williams82)应用本发明的方法的生根苗；
图4为大豆(品种williams82)应用本发明的方法的底部生根图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。
为了解决现有技术中的大豆转基因组培苗生根难、生根时间长、无法大规模生根的问题，本发明提供了一种大豆转基因组培苗方法，以大豆转基因组培伸长苗为研究出发点，在3-4d诱导出数量不等，长度为3-5mm的根，并且诱导率为100％；以该方法培育出的大豆转基因组培苗能够直接转移到蛭石中进行生长，成活率达到100％。本发明所用材料、药品均为市售。
实施例1
以大豆(品种jack)为试验对象
1)生根诱导培养基的配置：包括ms粉2.0g/l、萘乙酸0.2mg/l、蔗糖10g/l、琼脂6g/l，ph值为5.6-5.8；
2)在超净工作台上，用镊子将长度为3-4cm的大豆转基因组培苗用剪刀沿茎基部平剪切，然后将切下的组培苗插入步骤1)中配置的生根诱导培养基液面以下0.3-0.5cm处；
3)根诱导：将步骤2)中接种好大豆转基因组培苗的生根诱导培养基置于温室中，温室培养温度为24℃、湿度为50％、光照强度为1500lux、光照时间为16h，培养3-4天后获得带长度为3-5mm根的大豆组培苗；
4)炼苗：将步骤3)中生好根的大豆组培苗直接转移到蛭石土中，加盖保湿置于温室中暗培养过夜，次日打开盖子，在温室中光照培养即可成活。
一周后观察得知，利用本方法生根的大豆成活率达到100％，参考图1和图2。
实施例2
以大豆(品种williams82)为试验对象
1)生根诱导培养基的配置：包括ms粉2.2g/l、萘乙酸0.3mg/l、蔗糖13g/l、琼脂7g/l，ph值为5.6-5.8；
2)在超净工作台上，用镊子将长度为3-4cm的大豆转基因组培苗用剪刀沿茎基部平剪切，然后将切下的组培苗插入步骤1)中配置的生根诱导培养基液面以下0.3-0.5cm处；
3)根诱导：将步骤2)中接种好大豆转基因组培苗的生根诱导培养基置于温室中，温室培养温度为25℃、湿度为60％、光照强度为1700lux、光照时间为16h，培养3-4天后获得带长度为3-5mm根的大豆组培苗；
4)炼苗：将步骤3)中生好根的大豆组培苗直接转移到蛭石土中，加盖保湿置于温室中暗培养过夜，次日打开盖子，在温室中光照培养即可成活。
一周后观察得知，利用本方法生根的大豆成活率达到100％，参考图3和图4。
实施例3、
以大豆(品种williams82)为试验对象
1)生根诱导培养基的配置：包括ms粉2.5g/l、萘乙酸0.4mg/l、蔗糖15g/l、琼脂8g/l，ph值为5.6-5.8；
2)在超净工作台上，用镊子将长度为3-4cm的大豆转基因组培苗用剪刀沿茎基部平剪切，然后将切下的组培苗插入步骤1)中配置的生根诱导培养基液面以下0.3-0.5cm处；
3)根诱导：将步骤2)中接种好大豆转基因组培苗的生根诱导培养基置于温室中，温室培养温度为26℃、湿度为70％、光照强度为2000lux、光照时间为16h，培养3-4天后获得带长度为3-5mm根的大豆组培苗；
4)炼苗：将步骤3)中生好根的大豆组培苗直接转移到蛭石土中，加盖保湿置于温室中暗培养过夜，次日打开盖子，在温室中光照培养即可成活。
一周后观察得知，利用本方法生根的大豆成活率达到100％.
实施例4
以大豆(品种jack)为试验对象
1)生根诱导培养基的配置：包括ms粉2.2g/l、萘乙酸0.3mg/l、蔗糖15g/l、琼脂6.5g/l，加热完全溶解，调节培养基ph值为5.8，高压灭菌，待温度降低至60℃时倒入组培盒，冷却备用，上述操作均在无菌状态下进行；
2)在超净工作台上，用镊子将长度为3-4cm的大豆转基因组培苗用剪刀沿茎基部平剪切，然后将切下的组培苗插入步骤1)中配置的生根诱导培养基液面以下0.3-0.5cm处；
3)根诱导：将步骤2)中接种好大豆转基因组培苗的生根诱导培养基置于温室中，温室培养温度为26℃、湿度为70％、光照强度为2000lux、光照时间为16h，培养3-4天后获得带长度为3-5mm、数目不定的根的大豆组培苗；
4)炼苗：将步骤3)中生好根的大豆组培苗直接转移到蛭石土中，加盖保湿置于温室中暗培养过夜，次日打开盖子，在温室中光照培养即可成活。
一周后观察得知，利用本方法生根的大豆成活率达到100％.
实施例5
与实施例4不同的地方在于，步骤1)配置诱导培养基时，在1升蒸馏水中溶解ms粉2g，再加入萘乙酸0.3mg、蔗糖10g、琼脂7g，其他步骤均与实施例4相同，一周后观察大豆成活率为100％。
实施例6
与实施例4不同的地方在于，步骤1)配置诱导培养基时，在1升蒸馏水中溶解ms粉2.5g，再加入萘乙酸0.4mg、蔗糖15g、琼脂8g，其他步骤均与实施例4相同，一周后观察大豆成活率为100％。
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