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网眼瓦韦提取物在制备肿瘤化疗升白药物中的应用.pdf

花匠小妙招
2025-01-16 19:19

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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201310525401.4 (22)申请日 2013.10.31 A61K 36/12(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 7/00(2006.01) A61K 127/00(2006.01) (73)专利权人青岛市市立医院地址 266000 山东省青岛市市北区胶州路 1 号 (72)发明人李雪梅徐春园亓艳卫丽妍 (74)专利代理机构青岛申达知识产权代理有限公司 37243 代理人蒋遥明邓义熹等 . 植物内生菌活性成分研究进展 .安徽农业科学 .2009, 第 37 卷 ( 第 24。

2、期 ),11372-11373、 11378. 唐伟斌 . 河北省药用蕨类植物资源的初步研究 . 河北师范大学学报（自然科学版） .2007, 第 31 卷 ( 第 5 期 ),666-670. (54) 发明名称网眼瓦韦提取物在制备肿瘤化疗升白药物中的应用 (57) 摘要本发明涉及网眼瓦韦提取物在制备肿瘤化疗升白药物中的应用，属于医药领域。网眼瓦韦提取物在制备肿瘤化疗升白药物中的应用；所述网眼瓦韦提取物是按如下方法制备的：将网眼瓦韦提取后，通过两次大孔吸附树脂纯化得到。本发明所提供的网眼瓦韦提取物对制备肿瘤化疗升白药物具有重要意义。 (51)Int.C。

3、l. (56)对比文件审查员尹瑶菲 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利权利要求书1页说明书5页 CN 103585199 B 2016.02.10 CN 103585199 B 1/1 页 2 1.网眼瓦韦提取物在制备肿瘤化疗升白药物中的应用，所述网眼瓦韦提取物的制备方法为：（1）网眼瓦韦，用浓度 20%-80% 乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为 1-4 次，每次提取时间为 1-4 小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的 8-15 倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度 d=1.10-1.18，滤过，得药液 A ；（2）将步。

4、骤（1）得到的药液 A，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度 30%-70% 的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 A ；再用浓度 30%-95% 的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 B ；（3）将上述网眼瓦韦提取物A和网眼瓦韦提取物B按一定比例混匀，即得网眼瓦韦提取物。 2.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于所述网眼瓦韦提取物的制备方法为：（1）网眼瓦韦，用浓度 60。

5、% 乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为 3 次，每次提取时间为 2.5 小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的 14 倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度 1.12，滤过，得药液 A ；（2）将步骤（1）得到的药液 A，通过 D101 非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过 DM130 极性大孔树脂柱，再用浓度 60% 的乙醇溶液洗脱 D101 非极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物A ；再用浓度75% 的乙醇溶液洗脱 DM130 极性大孔吸附树脂柱，收集 75% 浓度乙醇洗脱。

6、液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 B ；（3）将上述网眼瓦韦提取物 A 和网眼瓦韦提取物 B 混匀，即得网眼瓦韦提取物。 3.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于所述的网眼瓦韦提取物的制备方法所采用的非极性大孔吸附树脂为 AB-8 大孔吸附树脂或 D101 大孔吸附树脂或 H107 大孔吸附树脂；所采用的极性大孔吸附树脂为 DM130 大孔吸附树脂或 LSA-21 大孔吸附树脂或 HPD450 大孔吸附树脂。 4.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于所述的网眼瓦韦提取物与化学药或中药或天然药物组成肿瘤化疗升白药物。 5.根据权利要求1中所述的网眼瓦。

7、韦提取物A或网眼瓦韦提取物B在制备肿瘤化疗升白药物中的应用。 6.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于所述的网眼瓦韦提取物主要含有：蜕皮甾酮、 20- 羟基蜕皮甾酮、荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素。 7.根据权利要求 1 所述的应用，其特征在于所述的网眼瓦韦提取物通过加入药剂学允许的各种辅料制成药剂学上口服的片剂或颗粒剂或胶囊。权利要求书 CN 103585199 B 2 1/5 页 3 网眼瓦韦提取物在制备肿瘤化疗升白药物中的应用技术领域 0001 本发明属于医药领域，涉及一种中药材提取物在制备肿瘤化疗升白药物中的应用，具体是涉及网眼。

8、瓦韦提取物在制备肿瘤化疗升白药物中的应用。背景技术 0002 我国最早的医书灵枢经认为肿瘤起因于 “营卫不通” 、“寒气客于肠外与卫气相搏” 、“邪气居其间” 。汉代医学家华佗在中藏经中认为肿瘤的发病是由脏腑 “蓄毒” 所生，不单是营卫之气的壅塞所致。宋代圣济总录中记载 “气血流行不失其常，则形体和平，无或余赘及郁结壅塞，则乘虚投隙，瘤所以生” ，即是指肿瘤的发生在于气血失常，郁结壅塞，形成了余赘所致。由于邪气可踞于脏腑、静脉、肌肤等不同的部位，而有 “茧唇” 、“翻花” 、“伏梁” 等称谓；由于邪正相搏消长，又呈现不同的证型变化。中医学认为，。

9、外感六淫、饮食不节及七情失常、脏腑功能失调、正气亏损是形成肿瘤的主要因素；气机不利、瘀血阻滞、湿痰凝聚、毒邪内聚、正气亏虚是肿瘤发生的主要机制。虚证是肿瘤发生发展的主要原因和病机：正气不足，气血虚弱，导致脏腑功能失调，因而出现气滞、血瘀、湿聚、痰结等一系列病理变化，最终形成肿瘤。外邪是肿瘤发生发展的一个重要因素：由于长期饮食不洁、情志失调、过度劳伤等引起机体阴阳平衡失调、脏腑功能失调、外邪乘虚而入，引起气滞血瘀、邪毒聚结等一系列病理变化，最终形成肿瘤。 0003 化疗是一种全身性治疗手段，对原发灶、转移灶和亚临床转移灶均有治。

10、疗作用；而如何进一步通过各种改进来提供疗效、如何体现出局部治疗和全身治疗的统一及生存时间和生活质量的统一，则是值得大力探索的问题。缺点是化疗药物的选择性差，在取得治疗效果的同时，常出现不同程度的毒副作用。将来肿瘤治疗的突破很有可能依赖于新型药物的开发和基因治疗的成熟。 0004 在肿瘤化疗中白细胞降低是临床常见的症状，大多数患者在常规应用化疗药物治疗中白细胞总数下降，骨髓抑制并伴有恶心、呕吐、食欲减退、乏力等临床症状，不能按时完成疗程。研发肿瘤化疗中生白药物意义重大。 0005 网眼瓦韦为水龙骨科植物网眼瓦韦（Lepisorus clathratus (。

11、Clarke) Ching）的干燥叶。收载于中华人民共和国卫生部药品标准藏药（第一册），标准编号： WS3-BC-0036-95。其性凉，味苦，具有愈疮，干脓，涩精，固骨髓，清热解毒 , 接补头骨之功效。用于胸腹腔疾病，烧伤，湿热腰痛。为我国藏蒙等少数民族地区的常用药物。但有关网眼瓦韦的基础研究尚十分有限，使该药材的后续推广和应用受到限制。现代研究表明，网眼瓦韦含有绿原酸和蜕皮甾酮以及槲皮素、山奈酚等黄酮类化合物，其他化学成分不详；药理作用未见报道。 0006 国内专利检索结果，未见网眼瓦韦相关专利。 0007 上述文献及专利等，尚未见网。

12、眼瓦韦或网眼瓦韦提取物用于制备肿瘤化疗生白药物的报道。说明书 CN 103585199 B 3 2/5 页 4 发明内容 0008 本发明的目的在于提供网眼瓦韦提取物的一种新用途。本发明所提供的网眼瓦韦提取物的一种新用途是在制备肿瘤化疗生白药物中的应用。 0009 本发明是通过如下技术方案实现的： 0010 本发明所用网眼瓦韦为水龙骨科植物网眼瓦韦（Lepisorus clathratus (Clarke) Ching）的干燥叶。 0011 网眼瓦韦提取物在制备肿瘤化疗升白药物中的应用。所述网眼瓦韦提取物的制备方法为： 0012 （。

13、1）网眼瓦韦，用浓度 20%-80% 乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为 1-4 次，每次提取时间为 1-4 小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的 8-15 倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度 d=1.10-1.18，滤过，得药液 A ； 0013 （2）将步骤（1）得到的药液 A，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度 30%-70% 的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 A ；再用浓度 30%-95% 的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附。

14、树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 B ； 0014 （3）将上述网眼瓦韦提取物A和网眼瓦韦提取物B按一定比例混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。 0015 网眼瓦韦提取物的制备方法为 : 0016 （1）网眼瓦韦，用浓度 20%-80% 乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为 1-4 次，每次提取时间为 1-4 小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的 8-15 倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度 d=1.10-1.18，滤过，得药液 A ； 0017 （2）将步骤（1）得到的药液 A，通过非极性大孔吸附树脂柱。

15、，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度 30%-70% 的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 A ；再用浓度 30%-95% 的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 B ； 0018 （3）将上述网眼瓦韦提取物A和网眼瓦韦提取物B混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。 0019 网眼瓦韦提取物的制备方法为 : 0020 （1）网眼瓦韦，用浓度 60% 乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为 3 次，每次提取时间为。

16、2.5 小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的 14 倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度 d=1.12，滤过，得药液 A ； 0021 （2）将步骤（1）得到的药液 A，通过 D101 非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过 DM130 极性大孔树脂柱，再用浓度 60% 的乙醇溶液洗脱 D101 非极性大孔吸附树脂柱，收集 60% 浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 A ；再用浓度 75% 的乙醇溶液洗脱 DM130 极性大孔吸附树脂柱，收集 75% 浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 B。

17、； 0022 （3）将上述网眼瓦韦提取物A和网眼瓦韦提取物B混匀，即得本发明的网眼瓦韦提说明书 CN 103585199 B 4 3/5 页 5 取物。 0023 本发明的网眼瓦韦提取物的制备方法，其特征在于：所采用的非极性大孔吸附树脂为 AB-8 大孔吸附树脂、 D101 大孔吸附树脂、 H107 大孔吸附树脂；所采用的极性大孔吸附树脂为 DM130 大孔吸附树脂、 LSA-21 大孔吸附树脂、 HPD450 大孔吸附树脂。 0024 本发明的网眼瓦韦提取物中主要含有：蜕皮甾酮、 20- 羟基蜕皮甾酮、荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素。 0。

18、025 本发明的网眼瓦韦提取物，通过加入药剂学允许的各种辅料，制成药剂学上的片剂、颗粒剂、胶囊等口服剂型。 0026 本发明的网眼瓦韦提取物与化学药或中药或天然药物组成的肿瘤化疗升白药物。 0027 本发明的网眼瓦韦提取物 A、网眼瓦韦提取物 B，在制备肿瘤化疗升白药物中的应用。 0028 本发明的网眼瓦韦提取物 A、网眼瓦韦提取物 B 与化学药或中药或天然药物组成的肿瘤化疗升白药物。 0029 本发明首次对网眼瓦韦采用两次大孔吸附树脂纯化技术，制备具有肿瘤化疗生白的提取物，制备工艺操作简便，生产成本低，适于工业化大生产。 0030 本发明首次探索研。

19、究以水龙骨科植物网眼瓦韦（Lepisorus clathratus (Clarke) Ching）的干燥叶为原料提取制备提取物用于肿瘤化疗升高白细胞。本发明首次探索研究并分离得到了网眼瓦韦具有肿瘤化疗生白作用的提取物 , 动物实验及临床观察实验结果均表明，本发明的网眼瓦韦提取物具有显著的肿瘤化疗生白作用。具体实施方式 0031 下面通过具体实验例和实施例对网眼瓦韦提取物在制备肿瘤化疗生白药物中的应用做进一步说明，但不限于本发明。 0032 实施例 1 ：网眼瓦韦提取物及单体化合物制备 0033 （1）网眼瓦韦 13kg，用浓度 60% 乙醇作为溶剂。

20、，加热回流提取，提取次数为 3 次，每次提取时间为 2.5 小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的 14 倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度 d=1.12，滤过，得药液 A ； 0034 （2）将步骤（1）得到的药液 A，通过 D101 非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过 DM130 极性大孔树脂柱，再用浓度 60% 的乙醇溶液洗脱 D101 非极性大孔吸附树脂柱，收集 60% 浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 A ；再用浓度 75% 的乙醇溶液洗脱 DM130 极性大孔吸附树脂柱，收集 75% 浓度。

21、乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 B ； 0035 （3）将上述网眼瓦韦提取物A和网眼瓦韦提取物B混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。 0036 网眼瓦韦提取物再经 200-300 目硅胶柱层析，以三氯甲烷 - 甲醇梯度洗脱（100:0-2.5:1），薄层跟踪检测，合并相同流份，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，分别得到蜕皮甾酮、 20- 羟基蜕皮甾酮、荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素。以上各化合物的化学结构均经质谱和核磁共振等波谱手段确证，纯度经高效液相色谱检测均大于 98%。 0037 实施例 2 ：网眼瓦韦提取物及单体化。

22、合物制备说明书 CN 103585199 B 5 4/5 页 6 0038 （1）网眼瓦韦，用 20% 乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为 1 次，每次提取时间为 4 小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的 15 倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度 d=1.18，滤过，得药液 A ； 0039 （2）将步骤（1）得到的药液 A，通过 AB-8 非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过 HPD450 极性大孔树脂柱，再用浓度 30% 的乙醇溶液洗脱 AB-8 非极性大孔吸附树脂柱，收集 30% 浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩。

23、干燥，即得网眼瓦韦提取物 A ；再用浓度 30% 的乙醇溶液洗脱 HPD450 极性大孔吸附树脂柱，收集 30% 浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 B ； 0040 （3）将上述网眼瓦韦提取物A和网眼瓦韦提取物B混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。 0041 网眼瓦韦提取物再经 200-300 目硅胶柱层析，以三氯甲烷 - 甲醇梯度洗脱（100:0-2.5:1），薄层跟踪检测，合并相同流份，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，分别得到蜕皮甾酮、 20- 羟基蜕皮甾酮、荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素。以上各化合物的化学。

24、结构均经质谱和核磁共振等波谱手段确证，纯度经高效液相色谱检测均大于 98%。 0042 实施例 3 ：网眼瓦韦提取物及单体化合物制备 0043 （1）网眼瓦韦，用 80% 乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为 4 次，每次提取时间为1小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度 d=1.10，滤过，得药液 A ； 0044 （2）将步骤（1）得到的药液 A，通过的的 D101 非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过 LSA-21 极性大孔树脂柱，再用浓度 70% 的乙醇溶液洗脱 D101 非极性大孔吸附树。

25、脂柱，收集 70% 浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 A ；再用浓度 95% 的乙醇溶液洗脱 LSA-21 极性大孔吸附树脂柱，收集 95% 浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物 B ； 0045 （3）将上述网眼瓦韦提取物A和网眼瓦韦提取物B混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。 0046 网眼瓦韦提取物再经 200-300 目硅胶柱层析，以三氯甲烷 - 甲醇梯度洗脱（100:0-2.5:1），薄层跟踪检测，合并相同流份，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，分别得到蜕皮甾酮、 20- 羟基蜕皮甾酮、荭草素、荭草苷。

26、、异荭草素、牡荆素、异牡荆素。以上各化合物的化学结构均经质谱和核磁共振等波谱手段确证，纯度经高效液相色谱检测均大于 98%。 0047 实施例 4: 网眼瓦韦提取物片剂的制备 0048 取实施例1网眼瓦韦提取物265g，加入淀粉60g，混匀，制粒，干燥，过筛，加微晶纤维素 25g，硬脂酸镁 2.5g，混匀，压制成 1000 片 , 即得网眼瓦韦提取物片剂。 0049 实施例 5 ：网眼瓦韦提取物颗粒剂的制备 0050 取实施例2网眼瓦韦提取物265g，加入糊精60g，蔗糖60g，混匀，制粒，干燥，整粒，即得网眼瓦韦提取物颗粒剂。 0051 实施例。

27、6 ：网眼瓦韦提取物胶囊的制备 0052 取实施例3网眼瓦韦提取物245g，加入淀粉85g，糊精12g，混匀，制粒，干燥，过筛，装胶囊 1000 粒，即得网眼瓦韦提取物胶囊。 0053 实验例 1 ：网眼瓦韦提取物在肿瘤化疗中的升白作用说明书 CN 103585199 B 6 5/5 页 7 0054 1 材料与方法 0055 1.1 动物与药品：昆明小白鼠体重 (202g)，雌雄各半，由沈阳药科大学动物室提供。环磷酰胺由上海华联制药厂生产。升白胺片由四川中方制药有限公司生产。网眼瓦韦提取物、网眼瓦韦提取物 A、网眼瓦韦提取物 B 为本发明实施例 1 。

28、方法制备得到。 0056 1.2 实验方法 0057 1.2.1 动物实验：小白鼠 80 只，随机分为 4 组，每组 20 只，雌雄各半。前 3 组为实验组，分别为网眼瓦韦提取物组、网眼瓦韦提取物 A 组、网眼瓦韦提取物 B 组；第 4 组为对照组。各组分别腹腔注射环磷酰胺每只 0.2ml(20mg/kg)。实验组同时灌胃中药 0.3ml/ 只 ( 相当于生药 15g/kg)。对照组灌胃等量生理盐水，每日 1 次。连续给药 7 天。第 4 天各组分别重复注射 1 次环磷酰胺，第 8 天剪尾取血，检查白细胞总数。 0058 1.2.2临床观察：观察对象为中晚期。

29、恶性肿瘤住院患者，共40例。观察组(网眼瓦韦提取物组 )20 例。其中男 12 例，女 8 例。年龄 31 40 岁 3 例。41 50 岁 8 例， 51 60 岁 6 例， 60 岁以上 3 例。瘤谱分类：肺癌 7 例，胃癌 6 例，乳腺癌 4 例，其他癌症 3 例。对照组 20 例，其中男 13 例，女 7 例，年龄、瘤谱基本同观察组。网眼瓦韦提取物组和对照组均用同样的化疗方案，实验前两组均停用升白药物，然后检查白细胞总数再开始用药。观察组在化疗同时服用网眼瓦韦提取物，对照组则常规服用维生素和升白胺片。用药期间每周检查白细胞 1 次，疗程结束立。

30、即检查白细胞总数。 0059 2 结果 0060 2.1 动物实验 0061 动物实验结果表明，网眼瓦韦提取物组白细胞总数明显高于对照组(P 0.01)。结果见表 1。 0062 表 1 网眼瓦韦提取物对小鼠白细胞的影响 (xs) 0063 0064 2.2 临床观察组 0065 临床观察实验结果表明，服用网眼瓦韦提取物后白细胞总数明显升高，一般保持在 5.52- 7.34 * 109/L。与对照组比较差异显著 (P0.01)，见表 2。 0066 表 2 观察组与对照组对 40 例恶性肿瘤患者白细胞的影响 (xs) 0067 0068 * 与对照组比较 P0.01。说明书 CN 103585199 B 7 。