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新一代核酸染料—CelRed 和CelGreen，EB完美替代品！

花匠小妙招
2025-01-26 13:15

2018-07-26 08:38点击次数：3151

关键词：核酸染料固与

由Goyoo（南京固与生物）公司研发推出的EB替代染料，染色效果和EB差不多，在紫外下不容易淬灭，可以用于胶回收。但价格较贵。

CelRed和 CelGreen 是两种集高灵敏、低毒性和超稳定性于一身的极佳的荧光核酸凝胶染色试剂。其水溶染色剂通过美国环保局安全认定，废弃物可直接倒入下水道，而不会造成任何环境污染。其特点有：

1）高灵敏度：CelRed和 CelGreen是目前市场中最灵敏的凝胶核酸染料之一；

2）稳定性极好：可以使用微波炉加热，可以在室温下保存；

3）更安全：艾姆斯氏试验结果表明，该染料的诱变性远小于溴化乙锭（EB）；

4）广泛的适应性：适用于预制凝胶和凝胶电泳后染色；

5）染色过程简单：与EB一样，在预制胶和电泳过程中不必担心染料降解；而电泳后染色过程也只需30分钟且无需脱色或冲洗；

6）对 DNA 和 RNA 的迁移影响小：对核酸迁移的影响小于 SYBR Green I；

7）与标准凝胶成像系统以及可见光激发的凝胶观察装置完美兼容：使用 312nm 激发的 UV 凝胶成像系统时，CelRed可以完美的替代EB；使用 254nm 激发的 UV 凝胶成像系统或可见光激发的凝胶观察装置时，CelGreen足以替代任意一种 SYB染料。但该染料会使小片段DNA迁移慢一些（与EB相比).

Gold View I型/II型

Goldview对于大片段DNA的染色效果良好，但是在对于500bp以下的片段效果不是很好，还有一个很致命的弱点是它的荧光基团在紫外灯下非常容易淬灭，一般5-10min条带就会消失。另外Goldview不适用于胶回收。 Goldview其实就是AO（丫啶橙，一种剧毒产品）且荧光效果远不如EB，灵敏度差，本底色严重，不利用于回收，不稳定，在紫外灯下其诱导突变能力极高

SYBR Green 和SYBR Gold

稳定性差，也有毒性。它属于花箐素类核酸染料，花箐类染料不是无毒的，而只是低毒的，电泳级别的是经过修饰的，修饰有三种：1.加入卤素或*基。2.插入环羟基。3.加入稳定剂。SYBR Green I是高灵敏的DNA荧光染料，适用于各种电泳分析，操作简单：无须脱色或冲洗。至少可检出20pg DNA，高于EB染色法25-100倍。SYBRGreen I 与dsDNA 结合荧光信号会增强800-1000倍，用SYBR Green I染色的凝胶样品荧光信号强，背景信号低。SYBR Green和SYBR Gold相对于EB的稳定性要差很多。SYBR系列的染料也能进入细胞染色线粒体以及核内的DNA，从而产生危害。SYBR Green I已被证实在紫外光下将会产生强诱变能力，使DNA或其他物质发生突变。

几种核酸染料的比较

新一代核酸染料—CelRed 和CelGreen

要想获得安全的凝胶染料必须能清除或最小化染料和基因组DNA的相互作用。基于这种原则，科学家们结合物质的结构特点，开发出了一款不会渗透乳胶手套*类手套和生物细胞膜的一种染料。

CelRed和CelGreen是为代替高毒性的EB设计产生的新一代荧光核酸染料。由Biotium公司开发。相对于EB和其他的EB替代物，CelRed和CelGreen有更多的优势：低毒性，高灵敏性，高稳定性。

EB由于其价格低和足够高的灵敏性，使其成为近几十年来最常用的核酸凝胶染料。但是 EB是一种强诱变化学试剂。由于其存在的安全危害以及处理污染物所花费的大量金钱，使其使用变得并不廉价，也不再方便。基于这种原因，替代品开始出现，比如SYBR系列染料近年来开始应用于市场中。但这些产品虽然降低了危害性，却损失了产品的灵敏性和稳定性。比如SYBR Safe的灵敏性很低，SYBR Green和SYBR Gold相对于EB的稳定性要差很多。SYBR系列的染料也能进入细胞染色线粒体以及核内的DNA，从而产生危害。SYBR Green I已被证实在紫外光下将会产生强诱变能力，使DNA或其他物质发生突变（Ohta，et al.Mut Res 492,91(2001)）。

SYBR Safe则不能做到。此外，环境安全实验也显示CelRed和CelGreen对水栖动物没有影响，因此CelRed和CelGreen没有环境破坏性，使用后能做一般的处置。

CelRed和CelGreen特点：

更安全：艾姆斯氏实验以及其他实验证实无诱变性无细胞毒性；

更方便处理：通过了环境安全实验，可以直接丢弃无需特殊处理。

超灵敏：比EB和SYBR Safe更灵敏。

更稳定：室温下，溶液中可稳定存在。

使用更方便：可预染也可后染。

与常用的仪器兼容：CelRed可用EB常用仪器观察；CelGreen可用SYBR染料仪器进行观察。

可用于下游实验：普通的胶回收后，可用于下游实验。

EB CelRed

SYBR Safe CelGreen

图1. CelRed和CelGreen比EB和SYBR Safe更灵敏。左图：比较了CelRed和EB 的1%预制胶，TBE缓冲液跑胶。右图：比较了CelGreen和SYBR Safe 1%琼脂糖凝胶的后染状况，同样在TBE缓冲液中完成。选用了Invitrogen的1 Kb的DNA Ladder作2倍稀释，分别加入四个泳道中，从左向右依次为200ng，100ng，50ng和25ng。

SYBRSafe CelRed CelGreen

图2. CelRed和CelGreen更安全，因为它们不能穿过活细胞的细胞膜结合到DNA上。用1×SYBR Safe，CelRed和CelGreen分别在37℃孵育Hela细胞。随后用FITC处理过的SYBR Safe和CelGreenCelRed及Cy3处理CelRed孵育细胞。SYBR Safe很快进入细胞使核染色。CelRed和CelGreen不能穿过细胞膜，不能观察到被染上色的细胞，仅在少量死亡的细胞中看到零星的荧光。