河南大学国家食用菌加工技术研发中心在罗布麻花多糖免疫调节作用研究方面取得重要进展
该成果以“Immunoregulatory polysaccharides from Apocynum venetum L. flowers stimulate phagocytosis and cytokine expression via activating the NF-κB/MAPK signaling pathways in RAW264.7 cells” 为题发表于Food Science and Human Wellness杂志（即时IF：7.93）。
Introduction
罗布麻（Apocynum venetum L.）是夹竹桃科罗布麻属野生亚灌木。罗布麻花美丽、芳香，花期较长。研究表明罗布麻具有抗高血压、抗氧化、强心、保肝、降脂、抗焦虑和抗抑郁的作用。这些活性多与罗布麻植物中存在的黄酮类化合物有关，而罗布麻中多糖化合物的研究较少。课题组前期从罗布麻花中提取分离纯化了2种新的多糖，分别命名为Vp2a-II和Vp3。本研究通过预实验发现这两种多糖具有促进巨噬细胞RAW264.7释放NO的作用，因此本文以罗布麻花多糖Vp2a-II和Vp3为研究对象，探究其对RAW264.7细胞的免疫调节作用。
Results and Discussion
罗布麻花多糖免疫调节作用检测
图1 Vp2a-II和Vp3对NO释放量和iNOS mRNA的表达水平影响
NO作为免疫系统中最重要的炎症介质之一，可以通过杀灭病原微生物和肿瘤细胞来发挥免疫功能。在正常生理情况下，细胞的iNOS几乎不表达，当巨噬细胞受到细胞因子或LPS的诱导而激活时，细胞内的iNOS表达增加引起NO合成增多。如图1，Vp2a-II和Vp3均可通过激活iNOS的表达，促进细胞分泌NO，且Vp3对NO的调节作用强于多糖Vp2a-II。
罗布麻花多糖免疫调节机制探究
图2 Vp2a-II和Vp3对细胞内NF-κB表达的影响
NF-κB作为巨噬细胞调节免疫应答的一个主要的转录因子，在巨噬细胞中的存在形式主要是p65和p50异源二聚体。在正常细胞中，NF-κB通常与NF-κB抑制剂（IκB）结合存在于细胞质中。当巨噬细胞被激活，不同的上游信号传导途径聚集激活NF-κB抑制剂激酶（IKK）复合物。继而IKK复合物磷酸化I-κB，导致NF-κB从细胞质中释放并转移到细胞核中，激活特定的靶基因。本文通过检测NF-κB p65的表达发现Vp2a-II和Vp3能促进NF-κB从细胞质向细胞核的转移。同时通过NF-κB抑制剂（PDTC）的应用进一步验证了这一结果（如图2）。
MAPK家族包含3种主要的激酶，包括细胞外信号调节激酶（ERK 1/2）、c-Jun氨基末端激酶（JNK）和p38 MAPK。AP-1是MAPK的下游转录因子，其主要形式为Fos/Jun杂二聚体，AP-1通过调节相关基因的表达来发挥免疫调节作用。同上运用Western blot法检测Vp2a-II和Vp3对细胞内MAPK表达的影响。发现Vp2a-II和Vp3均能上调RAW264.7细胞MAPK蛋白磷酸化水平，但Vp3对p38蛋白的增强作用不明显。使用MAPK信号通路抑制剂PD98059（ERK抑制剂）、SP600125（SAPK/JNK抑制剂）和SB203580（p38抑制剂）预处理细胞，得到同样结果（如图3）。
图3 应用MAPK抑制剂后Vp2a-II和Vp3对蛋白表达的影响
Conclusion
罗布麻花多糖Vp2a-II和Vp3通过对巨噬细胞免疫信号通路的调控而发挥免疫调节作用。罗布麻花多糖Vp2a-II和Vp3通过激活巨噬细胞免疫调节NF-κB和MAPK信号通路，进而促进相关蛋白mRNA的表达，促进促炎性细胞因子和NO的分泌。
图4 罗布麻花多糖激活巨噬细胞的信号通路图
中心对罗布麻花多糖性质相关研究
1. L.L. Wang, X.F. Zhang, Y.Y. Niu, et al., Anticoagulant activity of two novel polysaccharides from flowers of Apocynum venetum L, Int J B Macromol. 124 (2019) 1230-1237. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2018.12.015.
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