香榧组织培养及主要活性物质富集研究
香榧组织培养及主要活性物质富集研究
【摘要】： 本文分别以香榧不同器官(茎、叶、芽、假种皮)为原料,对其总酚、总黄酮、紫杉醇和巴卡亭Ⅲ含量及抗氧化能力进行研究。大量研究已证实,通过细胞培养方式生产活性物质具有很多优势,越来越多的研究人员关注这一点。但关于香榧组织培养技术的研究甚少,因此,本文旨在探究香榧愈伤组织诱导与继代培养最佳方案,以确保愈伤组织稳定持续生长,进而在组织悬浮培养阶段添加生物合成诱导剂或前体物质,以达到富集目的产物的作用。这可为香榧资源的进一步开发提供参考和实验依据。主要研究结果如下:1.分析香榧假种皮、茎段、叶片和顶芽中活性物质。结果表明,假种皮中总黄酮和总酚含量最高,与茎段、叶片和顶芽相比差异显著(P<0.05),分别为15.637 mg/g、20.727 mg/g。茎段、叶片、假种皮中紫杉醇含量分别为0.0178%、0.0160%、0.0073%;而巴卡亭Ⅲ仅在茎段和叶片中发现,含量分别为0.0034%,0.0051%。2.对榧树假种皮、茎段、叶片活性物质提取液进行抗氧化能力分析。结果发现总黄酮提取液的抗氧化能力较强,当提取液浓度≧0.3 mg/m L对OH·、DPPH·、ABTS·的清除率高于60%。并且,清除能力均高于紫杉醇粗提物。但整体清除率普遍低于VC,仅假种皮中黄酮提取物对OH·的清除率高于VC。3.分别探究外源激素对榧树茎段、叶片和顶芽愈伤组织诱导的影响。试验结果表明:茎段愈伤诱导率最高可达100%,其次是顶芽,而叶片最低;正交试验结果表明,外源激素对愈伤诱导的影响次序为:NAA>KT>6-BA>2.4-D;方差分析表明,NAA对愈伤诱导的影响差异显著(P<0.05)。其最优培养基为B5+2.0 mg/L NAA+0.5mg/L KT。4.分析诱导条件对愈伤组织诱导的影响。正交试验结果发现,最佳诱导条件为:3月份采摘的当年生枝条,在25℃环境下光照10 h/d,培养基蔗糖浓度10 g/L。方差分析得采摘季节和诱导温度对愈伤组织诱导有显著影响(P<0.05)。5.对茎段愈伤组织进行扩大培养,分析培养环境对组织生长的影响。结果发现,最优培养基为B5+2.0 mg/L NAA,生长指数达4.064;且黑暗条件下更适于愈伤组织扩大培养,生长指数比光照培养高出2倍。茎段愈伤组织生长阶段呈“S”曲线,在第28 d生物量达到最大值,为0.6324g,后进入生长衰败期。经5次继代培养后,愈伤组织生长量趋于平稳,进入生长平稳期。6.为抑制愈伤组织褐化现象产生,培养基中分别添加抗坏血酸(VC)、水解酪蛋白(CH)、活性炭(AC)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。试验结果表明褐化程度无明显改善,表征观察下颜色仍出现黄褐色。7.探究不同诱导剂对紫杉醇含量积累的影响。悬浮培养试验结果证实1 mmol/L D,L-β苯丙氨酸,10 mg/L、20 mg/L、30 mg/L茉莉酸甲酯的添加,使紫杉醇含量相比空白组分别增长了1.9倍、2.14倍、2.54倍、1.28倍,但诱导子的加入使组织生长迟缓,甚至抑制现象,尤其是10 mg/L MeJA。
【学位授予单位】：安徽农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
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