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利用aflp标进行榧树雌雄株鉴定.pdf文档全文免费阅读、在线看

利用aflp标进行榧树雌雄株鉴定

摘 要 Fort)的雌雄株鉴定开展了研究,获 利用AFLP标记,就榧树(Torreyagrandis 得了以下结果: 1.首次采用CTAB裂解.硅珠吸咐法,成功提取了榧树叶片和胚乳高质量的DNA, 其OD26clOD280值大多在1.8.2.O之间,且琼脂糖凝胶电泳条带明亮、清晰。 2.首次建立了适合榧树叶片和胚乳的AFLP实验体系,为今后榧树分子生物学研 究、构建遗传图谱奠定了基础。AFLP实验体系具体如下: I、 EcoR I、T4连接酶、M接头、E接头、100xBSA、10 酶切连接过夜,12h可酶切完全。 I 预扩引物和EcoR rain。 延伸60s,25个循环;72℃延伸5 选择性扩增优化体系:20“l的反应体系中有模板DNA,dNTP,M92+,脚聚合酶, Mse I选扩引物和&DRI选扩引物,缓冲液。PCR扩增程序:95℃变性30s,65℃退火 s,56℃退 40s,72℃延伸60S,13个循环,每个循环退火温度降低O.7℃;95℃变性30 火40s,72℃延伸60s,25个循环,最后72℃延伸5min。 选择性扩增产物用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,并进行银染。 3.从64对选择性扩增引物中筛选出了适合胚乳AFLP分析的引物组合20对,适 合叶片分析的15对,既适合胚乳又适合叶片的引物7对。 4.利用AFLP分析技术,用引物对E.AGC/M.CAT得到一条雌性榧树特异的条带。 5.这条榧树雌性性别特异性条带,仅可以对榧树的雌、雄株进行鉴别,不能区分 雌株与雌雄同株的个体,也不能区分同是雌性的品种香榧与其它自然变异类型的榧 树。研究结果可应用于生产,解决榧树章期雌雄株鉴别的问题。 关键词:榧树;香榧;AFLP;叶片;胚乳 Abstract been tothe fragmentlengthpolymorphism)has AFLP(amplified applied ofthemaleandfemalein Fort.The differentiation Torreyagrandis havebeen following obtained: 1.Itisthefirsttimeto isolate DNAfrom successfullyhighquality leavesand of aCTAB—silicon—basedmethod.The TorreyagrandisFort.by DNAextracted endosperm hadan valuebetween1.8-2.0andwas andclearwhen OD260/OD280 bright in agarose electrophoresizedgel. the timet

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所属分类:花卉
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