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一种南药广霍香的组培快繁方法与流程

花匠小妙招
2025-02-23 03:40

本发明实施例涉及南药培育技术领域，具体涉及一种南药广霍香的组培快繁方法。

背景技术：

广藿香为唇形科刺蕊草属多年生草本植物，喜温暖湿润和光照充足环境，怕霜冻，宜疏松肥沃和排水良好的沙壤土，生长最适温度为22-28℃。原产菲律宾、马来西亚、印度等国，目前广东是主要产地。广藿香作为中国传统药料由来已久，其挥发油具有抗菌、抗病毒、消炎、促进消化、抗氧化药理活性。此外，广藿香还广泛应用于食品、香料等领域。

广东省遂溪县乌塘镇地处雷州半岛北部，螺岗岭脚下，110°00'15"e，21°16'14"n。属于亚热带气候，雨量充沛、长年无霜，土地肥沃，有雷州青运河横贯全镇，还有两条自然河流贯穿，灌溉便利，非常适合广藿香生长。自1960年起，当地群众开始种植广藿香，广藿香是当地传统的经济作物，药效佳，销路广、效益高。

但近年来随着种植规模不断扩大，传统的剪枝扦插种植模式虽然简单易行，但长期采用扦插繁殖，引起植株生长缓慢、参差不齐，且病虫害发生率高、抗逆性弱，单位产量低口。故采用新的繁殖方式以助提高广藿香的品质和产量具有必要性。

技术实现要素：

为此，本发明实施例提供一种南药广霍香的组培快繁方法，通过步骤二到步骤四的设计，通过洗洁精、乙醇和氯化汞的层层消毒，避免了传统剪枝扦插植株的细菌感染情况，合理的6-ba、iba和蔗糖浓度配比，有利于广霍香发芽，利用简单的材料和操作步骤，提高了广霍香的存活率，简化了成苗工艺，降低了栽种成本，实用性强，通过步骤五到步骤六的设计，通过混合基质的制备和培养室条件的设置，为幼苗提供了充足的养分和合适的生长环境，使幼苗生长速度快，长势粗壮，叶色浓绿，叶面积大，保证了移栽的成活率，通过多菌灵水溶液的使用，降低了广霍香的病虫害发生率，使广霍香抗逆性强，产量高，质量好，以解决现有技术中由于传统的剪枝扦插种植模式引起植株生长缓慢、参差不齐，且病虫害发生率高、抗逆性弱，单位产量低口的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：一种南药广霍香的组培快繁方法，具体步骤如下：

步骤一：材料的选择和准备：以生长健壮、无病虫害的优良广藿香嫩茎及嫩叶片作为外植体；

步骤二：外植体的消毒处理：将采回的广藿香幼嫩叶片用自来水冲洗10-20min，再用浓度为10％的洗洁精水溶液冲洗2-4次，每次3-5min，后在超净工作台上用浓度为75％的乙醇消毒10-12s，倒去乙醇消毒液，后将外植体继续放入消毒液中浸泡消毒8-12min，倒去消毒液，再用无菌水漂洗5-8次，把残留的氯化汞漂洗干净，沥干水备用；

步骤三：培养基的配备：

基本培养基的配备：以ms培养基为基础，加入6-ba2.0mg/l，iba0.1mg/l，添加3％蔗糖和0.8％琼脂，调整ph值至5.8，制成基本培养基；

愈伤组织诱导培养基的配备：将ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、6ba0.05-0.3mg/l和浓度为1-2％的蔗糖混合制成愈伤组织诱导培养基；

芽诱导培养基的配备：将ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、6-ba0.05-0.3mg/l、浓度为3-3.5％的蔗糖和浓度为0.7％的卡拉胶混合制成ph为5.8的芽诱导培养基；

壮苗生根培养基的配备：将1/2ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、香蕉汁15％、浓度为2.5-3％的蔗糖和浓度为0.75％的卡拉胶混合制成壮苗生根培养基；

步骤四：外植体的接种转接：在超净工作台上先切去外植体嫩枝两端及叶柄先端，然后将剩余部分切成1.2-2.1cmx0.45-0.55cm的小段，每段含1-2节，将小段的植体转接到愈伤组织诱导培养基上，诱导出愈伤组织后，将其切成0.5cmx0.5cm的小块转接到芽诱导培养基上，将外植体叶片切成1.5-1.8cmx0.40-0.45cm的小块转接到基本培养基上，待到植体出芽后，将外植体转接到壮苗生根培养基内，在外植体接种后，使培养基均置于培养室内；

步骤五：炼苗与移栽：待试管苗根长1.5cm左右时，用镊子将试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去粘附的培养基，勿伤苗体，浸人1.2g/l的多菌灵水溶液中20min，然后进行炼苗后移栽到混合基质中，移栽后，第1周将温度控制在25℃空气相对湿度控制在80％-90％；第2周温度为23℃，空气相对湿度控制在70％-80％；第21d温度为18-20℃，空气相对湿度控制在60％-70％，则移栽成活率达到95-99％；

步骤六：水肥和病虫害管理：在移栽初期每周喷1次1.2g/l多菌灵水溶液。移栽21d后，组培苗开始长出新叶，发出新根，50-65d左右苗高可达23-27cm左右，叶片在8-11对，即可出圃进行大田种植。

进一步地，在步骤二中消毒液为在浓度为0.1-0.15％的氯化汞溶液中加1-3滴聚山梨酯-80制成。

进一步地，在步骤四中每个愈伤组织诱导培养基和基本培养基上均接种35-40个外植体，每个芽诱导培养基和壮苗生根培养基上均接种17-20个外植体。

进一步地，在步骤四中配制好的培养基均在压力为0.105mpa，温度为121℃的环境中灭菌15-30min后备用。

进一步地，在步骤四中培养室温度为23-26℃、光照强度为1800-2000lx、光照时间为12-14h/d培养室顶部覆盖有75-80％的遮阳网。

进一步地，在步骤五中混合基质由比例为3:3:2:2的泥炭土、椰糠、谷壳和珍珠岩混合而成。

进一步地，在步骤五中炼苗为在光照强度为1100-1500lx的自然光下暴晒5-7d，当叶片呈深绿色、苗木比较健壮时准备移栽。

本发明实施例具有如下优点：

1、本发明通过步骤二到步骤四的设计，与现有技术相比，通过洗洁精、乙醇和氯化汞的层层消毒，避免了传统剪枝扦插植株的细菌感染情况，有利于后期植株发芽，合理的6-ba、iba和蔗糖浓度配比，有利于广霍香发芽，利用简单的材料和操作步骤，提高了广霍香的存活率，简化了成苗工艺，降低了栽种成本，实用性强；

2、本发明通过步骤五到步骤六的设计，与现有技术相比，通过混合基质的制备和培养室条件的设置，为幼苗提供了充足的养分和合适的生长环境，使幼苗生长速度快，长势粗壮，叶色浓绿，叶面积大，保证了移栽的成活率，通过多菌灵水溶液的使用，降低了广霍香的病虫害发生率，使广霍香抗逆性强，产量高，质量好。

具体实施方式

以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

本发明提供一种南药广霍香的组培快繁方法，具体步骤如下：

步骤一：材料的选择和准备：以生长健壮、无病虫害的优良广藿香嫩茎及嫩叶片作为外植体；

步骤二：外植体的消毒处理：将采回的广藿香幼嫩叶片用自来水冲洗10min，再用浓度为10％的洗洁精水溶液冲洗2次，每次3min，后在超净工作台上用浓度为75％的乙醇消毒10s，倒去乙醇消毒液，在浓度为0.1％的氯化汞溶液中加1滴聚山梨酯-80制成消毒液，后将外植体继续放入消毒液中浸泡消毒8min，倒去消毒液，再用无菌水漂洗5次，把残留的氯化汞漂洗干净，沥干水备用；

步骤三：培养基的配备：

基本培养基的配备：以ms培养基为基础，加入6-ba2.0mg/l，iba0.1mg/l，添加3％蔗糖和0.8％琼脂，调整ph值至5.8，制成基本培养基；

愈伤组织诱导培养基的配备：将ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、6ba0.05mg/l和浓度为1-2％的蔗糖混合制成愈伤组织诱导培养基；

芽诱导培养基的配备：将ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、6-ba0.05mg/l、浓度为3％的蔗糖和浓度为0.7％的卡拉胶混合制成ph为5.8的芽诱导培养基；

壮苗生根培养基的配备：将1/2ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、香蕉汁15％、浓度为2.5％的蔗糖和浓度为0.75％的卡拉胶混合制成壮苗生根培养基；

步骤四：外植体的接种转接：将培养基置于压力为0.105mpa，温度为121℃的环境中灭菌15min后备用，后在超净工作台上先切去外植体嫩枝两端及叶柄先端，然后将剩余部分切成1.2cmx0.45cm的小段，每段含1-2节，将小段的植体转接到愈伤组织诱导培养基上，诱导出愈伤组织后，将其切成0.5cmx0.5cm的小块转接到芽诱导培养基上，将外植体叶片切成1.5cmx0.40cm的小块转接到基本培养基上，待到植体出芽后，将外植体转接到壮苗生根培养基内，每个愈伤组织诱导培养基和基本培养基上均接种35个外植体，每个芽诱导培养基和壮苗生根培养基上均接种17个外植体，在外植体接种后，使培养基均置于温度为23℃、光照强度为1800lx、光照时间为12h/d，顶部覆盖有75％遮阳网的培养室内；

步骤五：炼苗与移栽：待试管苗根长1.5cm左右时，用镊子将试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去粘附的培养基，勿伤苗体，浸人1.2g/l的多菌灵水溶液中20min，将泥炭土、椰糠、谷壳和珍珠岩按3:3:2:2的比例混合制成混合基质，然后将广霍香苗置于光照强度为1100lx的自然光下暴晒5d，当叶片呈深绿色、苗木比较健壮时移栽到混合基质中，移栽后，第1周将温度控制在25℃空气相对湿度控制在80％；第2周温度为23℃，空气相对湿度控制在70％；第21d温度为18℃，空气相对湿度控制在60％，则移栽成活率达到95％；

步骤六：水肥和病虫害管理：在移栽初期每周喷1次1.2g/l多菌灵水溶液。移栽21d后，组培苗开始长出新叶，发出新根，50d左右苗高可达23cm左右，叶片在8对，即可出圃进行大田种植。

实施例2：

本发明提供一种南药广霍香的组培快繁方法，具体步骤如下：

步骤一：材料的选择和准备：以生长健壮、无病虫害的优良广藿香嫩茎及嫩叶片作为外植体；

步骤二：外植体的消毒处理：将采回的广藿香幼嫩叶片用自来水冲洗15min，再用浓度为10％的洗洁精水溶液冲洗3次，每次4min，后在超净工作台上用浓度为75％的乙醇消毒11s，倒去乙醇消毒液，在浓度为0.12％的氯化汞溶液中加2滴聚山梨酯-80制成消毒液，后将外植体继续放入消毒液中浸泡消毒10min，倒去消毒液，再用无菌水漂洗7次，把残留的氯化汞漂洗干净，沥干水备用；

步骤三：培养基的配备：

基本培养基的配备：以ms培养基为基础，加入6-ba2.0mg/l，iba0.1mg/l，添加3％蔗糖和0.8％琼脂，调整ph值至5.8，制成基本培养基；

愈伤组织诱导培养基的配备：将ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、6ba0.15mg/l和浓度为1.5％的蔗糖混合制成愈伤组织诱导培养基；

芽诱导培养基的配备：将ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、6-ba0.12mg/l、浓度为3.2％的蔗糖和浓度为0.7％的卡拉胶混合制成ph为5.8的芽诱导培养基；

壮苗生根培养基的配备：将1/2ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、香蕉汁15％、浓度为2.7％的蔗糖和浓度为0.75％的卡拉胶混合制成壮苗生根培养基；

步骤四：外植体的接种转接：将培养基置于压力为0.105mpa，温度为121℃的环境中灭菌22min后备用，后在超净工作台上先切去外植体嫩枝两端及叶柄先端，然后将剩余部分切成1.7cmx0.50cm的小段，每段含1-2节，将小段的植体转接到愈伤组织诱导培养基上，诱导出愈伤组织后，将其切成0.5cmx0.5cm的小块转接到芽诱导培养基上，将外植体叶片切成1.7cmx0.43cm的小块转接到基本培养基上，待到植体出芽后，将外植体转接到壮苗生根培养基内，每个愈伤组织诱导培养基和基本培养基上均接种37个外植体，每个芽诱导培养基和壮苗生根培养基上均接种18个外植体，在外植体接种后，使培养基均置于温度为24.5℃、光照强度为1900lx、光照时间为13h/d，顶部覆盖有78％遮阳网的培养室内；

步骤五：炼苗与移栽：待试管苗根长1.5cm左右时，用镊子将试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去粘附的培养基，勿伤苗体，浸人1.2g/l的多菌灵水溶液中20min，将泥炭土、椰糠、谷壳和珍珠岩按3:3:2:2的比例混合制成混合基质，然后将广霍香苗置于光照强度为1300lx的自然光下暴晒6d，当叶片呈深绿色、苗木比较健壮时移栽到混合基质中，移栽后，第1周将温度控制在25℃空气相对湿度控制在85％；第2周温度为23℃，空气相对湿度控制在75％；第21d温度为19℃，空气相对湿度控制在65％，则移栽成活率达到97％；

步骤六：水肥和病虫害管理：在移栽初期每周喷1次1.2g/l多菌灵水溶液。移栽21d后，组培苗开始长出新叶，发出新根，56d左右苗高可达25cm左右，叶片在10对，即可出圃进行大田种植。

实施例3：

本发明提供一种南药广霍香的组培快繁方法，具体步骤如下：

步骤一：材料的选择和准备：以生长健壮、无病虫害的优良广藿香嫩茎及嫩叶片作为外植体；

步骤二：外植体的消毒处理：将采回的广藿香幼嫩叶片用自来水冲洗20min，再用浓度为10％的洗洁精水溶液冲洗4次，每次5min，后在超净工作台上用浓度为75％的乙醇消毒12s，倒去乙醇消毒液，在浓度为0.15％的氯化汞溶液中加3滴聚山梨酯-80制成消毒液，后将外植体继续放入消毒液中浸泡消毒12min，倒去消毒液，再用无菌水漂洗8次，把残留的氯化汞漂洗干净，沥干水备用；

步骤三：培养基的配备：

基本培养基的配备：以ms培养基为基础，加入6-ba2.0mg/l，iba0.1mg/l，添加3％蔗糖和0.8％琼脂，调整ph值至5.8，制成基本培养基；

愈伤组织诱导培养基的配备：将ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、6ba0.3mg/l和浓度为2％的蔗糖混合制成愈伤组织诱导培养基；

芽诱导培养基的配备：将ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、6-ba0.3mg/l、浓度为3.5％的蔗糖和浓度为0.7％的卡拉胶混合制成ph为5.8的芽诱导培养基；

壮苗生根培养基的配备：将1/2ms无机盐、肌醇100mg/l、烟酸0.5mg/l、盐酸硫胺素1.0mg/l、盐酸吡哆素0.5mg/l、甘氨酸2.0mg/l、香蕉汁15％、浓度为3％的蔗糖和浓度为0.75％的卡拉胶混合制成壮苗生根培养基；

步骤四：外植体的接种转接：将培养基置于压力为0.105mpa，温度为121℃的环境中灭菌30min后备用，后在超净工作台上先切去外植体嫩枝两端及叶柄先端，然后将剩余部分切成2.1cmx0.55cm的小段，每段含1-2节，将小段的植体转接到愈伤组织诱导培养基上，诱导出愈伤组织后，将其切成0.5cmx0.5cm的小块转接到芽诱导培养基上，将外植体叶片切成1.8cmx0.45cm的小块转接到基本培养基上，待到植体出芽后，将外植体转接到壮苗生根培养基内，每个愈伤组织诱导培养基和基本培养基上均接种40个外植体，每个芽诱导培养基和壮苗生根培养基上均接种20个外植体，在外植体接种后，使培养基均置于温度为26℃、光照强度为2000lx、光照时间为14h/d，顶部覆盖有80％遮阳网的培养室内；

步骤五：炼苗与移栽：待试管苗根长1.5cm左右时，用镊子将试管苗从培养瓶中轻轻取出，洗去粘附的培养基，勿伤苗体，浸人1.2g/l的多菌灵水溶液中20min，将泥炭土、椰糠、谷壳和珍珠岩按3:3:2:2的比例混合制成混合基质，然后将广霍香苗置于光照强度为1500lx的自然光下暴晒7d，当叶片呈深绿色、苗木比较健壮时移栽到混合基质中，移栽后，第1周将温度控制在25℃空气相对湿度控制在90％；第2周温度为23℃，空气相对湿度控制在80％；第21d温度为20℃，空气相对湿度控制在70％，则移栽成活率达到99％；

步骤六：水肥和病虫害管理：在移栽初期每周喷1次1.2g/l多菌灵水溶液。移栽21d后，组培苗开始长出新叶，发出新根，65d左右苗高可达27cm左右，叶片在11对，即可出圃进行大田种植。

实施例4：

由实施例1-3得出以下数据：

由上表可知，实施例1-4的南药广霍香的组培快繁方法均能促进广霍香种植过程中快速繁殖，提升产量，但是实施例3的提升程度最大，通过步骤二到步骤四的设计，使洗洁精、乙醇和氯化汞的层层消毒，避免了传统剪枝扦插植株的细菌感染情况，有利于后期植株发芽，合理的6-ba、iba和蔗糖浓度配比，有利于广霍香发芽，利用简单的材料和操作步骤，提高了广霍香的存活率，简化了成苗工艺，降低了栽种成本，实用性强，通过步骤五到步骤六的设计，使混合基质的制备和培养室条件的设置，为幼苗提供了充足的养分和合适的生长环境，使幼苗生长速度快，长势粗壮，叶色浓绿，叶面积大，保证了移栽的成活率，通过多菌灵水溶液的使用，降低了广霍香的病虫害发生率，使广霍香抗逆性强，产量高，质量好。

虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施例对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。