百合的质量研究及抗抑郁作用探讨
摘要
本文以百合科植物卷丹Lilium lancifolium Thunb.、百合Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker.、细叶百合Lilium pumilum DC.为研究对象，在文献研究的基础上,进行了百合药材质量标准研究、总皂苷提取纯化工艺研究、百合药材HPLC指纹图谱研究等内容，并以卷丹为对象，对其部位进行了抗抑郁的药效筛选，并进一步对筛选得到的有效部位深入进行了抗抑郁的机制研究。目的在于建立完善的百合药材的质量标准，建立三种不同来源的百合药材及中间体百合总皂苷的指纹图谱信息，从而有效地控制药材及其制剂的质量；对其部位进行抗抑郁的药效筛选，找出其抗抑郁的有效部位，并对该部位进行深入的抗抑郁的机制研究，找出其抗抑郁的主要作用途径，为充分开发这一药用资源提供理论依据。
质量标准研究方面，百合药材在05版药典中收载的药材标准中仅有性状鉴别和薄层鉴别项，质量标准不完善,没有含量测定项。本文对其质量标准进一步完善。收集了三种来源的百合药材，卷丹10批，百合10批，细叶百合20批，其他产地的百合7批。对三种不同来源的百合进行了显微鉴别；按药典条件进行了薄层鉴别；按照药典方法，进行了杂质、水分、灰分和酸不溶性灰分的测定，确定了药材中杂质、水分、灰分和酸不溶性灰分的限度；对水溶性浸出物及醇溶性浸出物进行了测定，确定了水溶性浸出物、醇溶性浸出物的限度；以薯蓣皂苷为对照品，采用用紫外－可见分光光度法，测定了三种不同来源的百合药材中总皂苷含量，确定了药材中总皂苷含量的限度；采用高效液相色谱法（HPLC法），测定了三种不同来源百合药材中薯蓣皂苷的含量，确定了百合药材中薯蓣皂苷含量的限度。较05版药典增加了显微鉴别项、检查项，以及含量测定项，完善了百合药材的质量标准，提高了百合药材的质量控制水平。
对百合总皂苷的提取纯化工艺进行了研究，分别进行了单因素考察和正交考察。单因素考察进行了不同乙醇浓度、溶媒倍量、提取时间、提取次数和提取温度对总皂苷提取率和纯度的影响的考察；建立了四因素三水平的正交试验，最终确立了最佳的提取工艺为：10倍量80％乙醇70℃水浴回流提取3次，每次3小时。用大孔吸附树脂对总皂苷粗提物进行了纯化处理，筛选了不同型号的树脂，考察了树脂的静态、动态吸附性能，并对上样液浓度和流速，洗脱溶剂浓度和体积等相关因素进行了优化，确立了最佳的纯化工艺为：AB-8型大孔吸附树脂，上样液中药材与湿树脂质量比1:1,依次用10BV蒸馏水、20BV80%乙醇以1-3ml/min的洗脱速度洗脱，收集80%乙醇部分，减压浓缩至干。在此工艺下得到的百合总皂苷纯度达67.95％。
对三种来源的百合药材和相应的百合总皂苷提取物进行了HPLC指纹图谱研究，通过色谱条件的优化建立了各自的指纹图谱及检测方法，分别标定了卷丹药材16个共有峰，百合药材13个共有峰，细叶百合药材18个共有峰；卷丹总皂苷10个共有峰，百合总皂苷10个共有峰，细叶百合总皂苷15个共有峰，以控制药材的质量。参照国家药监局颁布的《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求（暂行）》及运用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004年A版）对指纹图谱进行了评价，结果显示，10批卷丹药材、11批百合药材、10批细叶百合药材和相应的卷丹总皂苷提取物、百合总皂苷提取物、细叶百合总皂苷提取物的相似度都在0.9～1.0之间。对三种来源的百合药材指纹图谱进行分区比较，卷丹药材在一区的表观强度较大，百合药材在二区的表观强度较大，细叶百合药材在三区的表观强度较大，五区三者表现一致。对百合药材和总皂苷提取物指纹图谱进行分区比较，二者主要差异在一区，提示百合药材经过提取纯化以后，总皂苷成分基本保留。
采用聚类分析的方法对三种来源的百合TLC及指纹图谱进行聚类分析，分别以薄层鉴别的Rf值、指纹图谱的RRT值为指标，进行聚类分析，结果显示，三种不同来源的百合药材分别属于三种不同的类别。可见三种来源的百合药材及总皂苷是确实存在着一定的差异，这种差异可以通过数理统计的方法来区分，进一步说明本课题建立的指纹图谱信息存在着实用价值。
三种来源百合药材及总皂苷指纹图谱信息的建立，有利于进一步控制百合药材及百合总皂苷的质量。
抗抑郁的药效筛选方面，进行了百合有效部位抗抑郁药效筛选，分别富集了百合皂苷、百合多糖，提取了百合水液。另设了对照组及阳性药氟西汀组。分别进行了小鼠悬尾实验、小鼠利血平拮抗实验、小鼠强迫游泳实验，结果得出，百合皂苷为抗抑郁的主要有效成分之一。
抗抑郁的机制研究方面，对百合皂苷进行了抗抑郁药效研究，制备了大鼠慢性心理应激抑郁模型，分别观察了百合皂苷对抑郁模型大鼠行为学的影响，包括抑郁模型大鼠体重、耗食量、糖水偏嗜度及敞箱实验的的检测；百合皂苷对抑郁模型大鼠COR、ACTH的影响；百合皂苷对抑郁模型大鼠CRFmRNA、GR、MRmRNA的影响；百合皂苷对了单胺类神经递质，如 DA、5-HT、NE、5-HIAA的影响。结果显示百合皂苷可改善抑郁模型大鼠的体重减轻、耗食量减少及快感缺失等症状，可以改善抑郁模型大鼠的活动能力，改善抑郁模型大鼠的行为迟缓；百合皂苷可提高血液COR、ACTH的含量；百合皂苷可减少抑郁模型大鼠下丘脑CRFmRNA的表达，增加海马GR、MRmRNA的表达；百合皂苷体提高抑郁模型大鼠脑内神经递质的含量，包括DA、5-HT。得出以下结论：百合皂苷有抗抑郁作用，其作用机制可能是：
（1）增高抑郁模型大鼠大脑皮层的单胺类神经递质的含量；
（2）抑制抑郁模型大鼠亢进的HPA。展开▼
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